一种三聚氰胺快速检测试纸条的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种三聚氰胺快速检测试纸条。该试纸条包括底板、样品垫、过滤层、硒标结合垫、反应垫、吸水垫。本实用新型通过对常规三聚氰胺试纸条结构进行优化改进，即在样品垫和硒标结合垫之间增加了一段滤膜作为过滤层，解决了现有试纸条在检测奶粉时由于某些成分不易溶解，导致固体颗粒或大分子堵塞膜孔道，延长检测时间、检测结果不准确的问题。使用本实用新型试纸条检测三聚氰胺，可以提高检测的准确性，防止假阴性结果的出现，可广泛用于实验室、家庭和现场检测。
【专利说明】一种三聚氰胺快速检测试纸条
【技术领域】
[0001]本实用新型属于一种检测奶粉中三聚氰胺快速检测试纸条，这种试纸条采取胶体硒免疫层析检测技术，属于食品安全检测领域。
【背景技术】
[0002]三聚氰胺(Melamine，MEL)又名蜜胺，氰尿三酰胺，是一种重要的氮杂环有机化工原料。由于食品工业中常需要测定食品中的蛋白质含量，而由于直接测量蛋白质技术比较复杂，所以常用凯氏定氮法间接确定食品中蛋白质的含量。由于三聚氰胺分子含氮量很高，只要添加到食品中就可在检测中造成蛋白质含量较高的假象。目前在饲料、牛奶、奶粉、饼干、奶糖等相关产品均发现有三聚氰胺残留现象。动物实验结果表明，三聚氰胺的摄入可能会导致膀胱炎、慢性肾炎、肾结石、甚至膀胱癌。
[0003]因此，目前乳制品中三聚氰胺添加剂的残留已经成为消费者关注的焦点问题，为使牛奶中三聚氰胺添加剂残留问题得到有效监控，各类三聚氰胺检测试纸条相继开发，主要集中在应用酶联免疫吸附分析法(ELISA)的原理。然而现有的检测三聚氰胺的试纸条，没有过滤层，在检测奶粉时，由于某些成分不易溶解，常常发生固体颗粒或大分子堵塞膜孔道，延长了检测时间且易出现假阴性的检测结果。本实用新型通过对常规三聚氰胺试纸条结构的优化改进，增加了一段滤膜作为过滤层，解决了现有试纸条在检测奶粉时由于某些成分不易溶解，导致固体颗粒或大分子容易堵塞膜孔道，延长检测时间、检测不准确的问题。使用本实用新型试纸条检测三聚氰胺，可以提高检测的准确性，防止假阴性结果的出现，可广泛用于实验室、家庭和现场检测。
【发明内容】
[0004]本实用新型的目的是提供一种能够快速检测三聚氰胺的试纸条。
[0005]一种三聚氰胺快速检测试纸条，该试纸条包括底板1、样品垫3、硒标结合垫5、反应垫2、吸水垫8 ;所述的样品垫3和吸水垫8分别设置在底板I两端，硒标结合垫5设置在样品垫3 —端，硒标结合垫5上有胶体硒标记的鼠源抗三聚氰胺单克隆抗体，反应垫2设置在吸水垫8 —端，且设置在硒标结合垫5和吸水垫8之间，其中反应垫2上设置有一条检测线6和一条质控线7，检测线6用检测线(T)表示，质控线7用质控线(C)表示，检测线6和质控线7互相平行，并且与试纸条的长相垂直，检测线6靠近样品垫3 —端，质控线7靠近吸水垫8 —端，检测线6包被有三聚氰胺抗原，质控线7包被有羊抗鼠IgG，其中该试纸条在样品垫3和硒标结合垫5之间还设置有一段过滤层4。
[0006]本实用新型提供的一种三聚氰胺快速检测试纸条，其中所述的过滤层4为聚醚砜(PES)。聚醚砜滤膜为水系膜，具有较高的化学和热稳定性，流速快，耐酸碱能力强(pH范围1-14)，具有高机械强度的优点。
[0007]本实用新型提供的一种三聚氰胺快速检测试纸条，所述底板I为硬质塑胶条或不吸水的硬纸条；所述样品垫3为玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜；所述硒标结合垫5为玻璃纤维素膜，所述反应垫2为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜，所述吸水垫8为吸水滤纸或滤油纸。
[0008]现有的试纸条没有过滤层4，在检测奶粉时，由于某些成分不易溶解，常常发生固体颗粒或大分子堵塞膜孔道，致使检测样品溶液不能够充分渗透到样品硒标结合垫5 —段，并在试纸条上进行层析的速度十分缓慢，导致检测样品中的物质不能够与检测线6上包被的抗原充分接触，可能导致假阴性结果，致使试纸条的准确度下降。
[0009]本实用新型试纸条比现有试纸条检测的准确度高，由于本实用新型试纸条在样品垫3和硒标结合垫5之间还设置有一段过滤层4，当样品经过过滤层4时固体颗粒或大分子物质被截留，而由于所检测的三聚氰胺是小分子可以迅速通过到达硒标结合垫5而不影响检测，并且过滤后的样品在试纸条上的层析速度比较快，使样品中的待检物质能够充分的与检测线6上包被的抗原结合，从而提高了试纸条的检测准确度。
【专利附图】
【附图说明】
[0010]图1为本实用新型试纸条剖面图，其中，1.底板；3.样品垫；2.反应垫；4.过滤层；5.硒标结合垫；6.检测线；7.质控线；8.吸水垫。
[0011]图2为本实用新型试纸条结构图。
[0012]图3中a、b、C、d为本实用新型三聚氰胺快速检测试纸条的性能检测实验检测结果图。检测线用检测线(T)表示，质控线用质控线(C)表示。3表示含有0，1，5，1(^8/1的标准三聚氰胺样品检测的结果山表示含有50μ g/L的标准三聚氰胺样品的检测结果；c表示含有100，500 μ g/L的标准三聚氰胺样品的检测结果，d表示试纸条无效时的检测结果。
[0013]图4中a、b、C、d、e为本实用新型市售奶粉交叉反应实验试纸条检测结果图。检测线用检测线(T)表示，质控线用质控线(C)表示。a表示含有O μ g/L的标准三聚氰胺样品的检测结果；b表示含有500 μ g/L的标准三聚氰胺样品的检测结果；c表示含有500 μ g/L的标准三聚氰酸样品的检测结果，d表示含有500 μ g/L的标准三聚氰胺一酰胺的样品检测结果，e表示含有500 μ g/L的标准三聚氰胺二酰胺样品的检测结果。
【具体实施方式】
[0014]下面结合实施例并对照附图对本实用新型做进一步说明。
[0015]本三聚氰胺快速检测试纸条的目的是这样实现的:如图1、2所示，该试纸条包括底板1、样品垫3、过滤层4、硒标结合垫5、反应垫2、吸水垫8 ;所述的样品垫3和吸水垫8分别设置在底板两端，硒标结合垫5设置在样品垫3 —端，硒标结合垫5上有胶体硒标记的鼠源抗三聚氰胺单克隆抗体，反应垫2设置在吸水垫8 一端，且设置在硒标结合垫5和吸水垫8之间，其中反应垫2上设置有一条检测线6和一条质控线7，检测线6用检测线(T)表示，质控线7用质控线(C)表示，检测线6和质控线7互相平行，并且与试纸条的长相垂直，检测线6靠近样品垫3 —端，质控线7靠近吸水垫8 一端，检测线6包被有三聚氰胺抗原，质控线7包被有羊抗鼠IgG。
[0016]实施例一三聚氰胺快速检测试纸条的制作
[0017]试纸条制备是基于胶体硒免疫层析检测技术，由于三聚氰胺是小分子，只有一个抗原表位，因此本实施例三聚氰胺快速检测试纸条的制备选择竞争法。[0018]1、胶体硒颗粒标记鼠源抗三聚氰胺单克隆抗体
[0019]胶体硒分别加入终浓度为0.5-30 μ g/mL的鼠源抗三聚氰胺单克隆抗体(可于广州沃维生物科技有限公司公司购得)，轻轻混匀10分钟，于透射电镜观察胶体硒被鼠源抗三聚氰胺抗体包埋的程度，从而确定最佳标记量。
[0020]吸取5ml制备的胶体硒颗粒,用碳酸钾溶液调节适宜pH ；
[0021]向上述胶体硒溶液中搅拌、缓慢加入鼠源抗三聚氰胺单克隆抗体，该标记量按上述方法确定；
[0022]轻轻混匀，反应10分钟后，加入牛血清白蛋白(BSA)以稳定体系，继续搅拌至标记完全;
[0023]制得的硒标单克隆抗体进行高速低温(12000rpm、4°C)离心30分钟,弃上清,沉淀用等体积含BSA和蔗糖的TBS缓冲液重悬，重复三次；若加入适量叠氮钠，则可4°C长期保存。
[0024]通过该标记方法可以将胶体硒与抗体成功结合。
[0025]2、三聚氰胺快速检测试纸条的组装
[0026]如图1所示，试纸条包括底板1，样品垫3，过滤层4，硒标结合垫5，反应垫2和吸水垫8六部分组成，其中反应垫2上包被有检测线6和质控线7，硒标结合垫5上包被有结合了抗体的胶体硒。
[0027]将经过含牛血清白蛋白(BSA)和Tween-20 10 mM pH 7.4的PBS活化的玻璃纤维，干燥备用；
[0028]在硝酸纤维素膜上适宜距离喷涂0.1-2.0mg/mL的三聚氰胺完全抗原检测线和
0.5-2.0mg/mL的羊抗鼠IgG质控线，该完全抗原与抗体制备免疫小鼠所用完全抗原不同；
[0029]将上述制备的胶体硒标记的鼠源抗三聚氰胺单克隆抗体喷于硒标结合垫上，干燥备用;
[0030]于底板I (硬质塑胶条)上依次粘贴吸水垫8 (吸水滤纸)、反应垫2 (硝酸纤维素膜)、硒标结合垫5 (玻璃纤维素膜)、过滤层4 (聚醚砜(PES))、样品垫3 (玻璃纤维素棉)，得三聚氰胺快速检测试纸条，干燥条件保存备用。
[0031]实施例二三聚氰胺快速检测试纸条的检测实验
[0032]1、三聚氰胺快速检测试纸条的性能检测实验
[0033]在经鉴定无三聚氰胺的市售奶粉中加入不同浓度标准的三聚氰胺，通过三聚氰胺快速检测试纸条检测样品中三聚氰胺浓度，从而验证三聚氰胺快速检测试纸条的有效性。
[0034]市售奶粉中三聚氰胺检测实验:于50mL离心管中加入奶粉和40mL蒸馏水混匀，并用配置好的2mg/mL标准三聚氰胺溶液逐级稀释获得分别含有O，1,5,10，50，100和500 μ g/L的标准三聚氰胺样品，供试纸条检测使用。
[0035]将试纸标有箭头标记端向下，插入样品奶粉溶液中，试纸条与样品溶液充分接触5min后观察结果。结果显示:检测含有0、1、5、10 μ g/L的标准三聚氰胺样品的试纸条,反应膜上的三聚氰胺检测线显示一条红色条带，同时质控线也显示一条红色条带，表示样品中不含三聚氰胺或低于试纸条对三聚氰胺的最低检测限(如图3中a);检测50 μ g/L的标准三聚氰胺样品的试纸条，反应膜上的三聚氰胺检测线开始不显色，而质控线显示一条红色条带，表示检测样品中三聚氰胺含量等于试纸条对三聚氰胺的最低检测限(如图3中b);检测100，500 μ g/L的标准三聚氰胺样品的试纸条，反应膜上的三聚氰胺检测线完全不显色，而质控线显示一条红色条带，表示检测样品中三聚氰胺含量高于试纸条对三聚氰胺的最低检测限(如图3中c)。因此，三聚氰胺快速检测试纸条在检测奶粉过程中，灵敏度可达到50 μ g/L。
[0036]另外，如果反应膜上的质控线没有显示红色条带，无论三聚氰胺检测线是否显示红色条带，试纸条检测结果均视为无效(如图3中d)。
[0037]根据上述实验结果可以得出以下结论:本实用新型三聚氰胺快速检测试纸条不仅可以灵敏、准确的检测样品中是否含有三聚氰胺，同时三聚氰胺快速检测试纸条结果清晰可辨。
[0038]2、市售奶粉交叉反应实验:于250mL烧杯中加入经鉴定无三聚氰胺的市售奶粉和IOOmL蒸馏水混匀，并用配置好的2mg/mL标准三聚氰胺溶液逐级稀释获得含有O和500 μ g/L的标准三聚氰胺样品，同样的方法获得含有三聚氰胺同系物:三聚氰酸、三聚氰胺一酰胺和三聚氰胺二酰胺样品，供试纸条检测使用。
[0039]通过市售奶粉中三聚氰胺快速检测试纸条交叉反应试验的检测结果(图4中a、b、C、d、e)可以看出，各个三聚氰胺快速检测试纸条的质控线均显色，只有检测含有三聚氰胺的市售奶粉的三聚氰胺快速检测试纸条的检测线不显色，其他检测含有三聚氰胺同系物的试纸条的检测线均显色，且颜色强度相当。
[0040]因此，三聚氰胺快速检测试纸条同三聚氰胺同系物三聚氰酸、三聚氰胺一酰胺和三聚氰胺二酰胺没有交叉反应，可以特异性检测样品中的三聚氰胺。
[0041]通过三聚氰胺快速检测试纸条对含有标准三聚氰胺的样品奶粉检测实验及市售奶粉交叉反应实验可以看出，该试纸条特异性强、检测准确度高，结果清晰易辨，可方便的用于检测固体奶粉，而防止假阴性结果的出现。
【权利要求】
1.一种三聚氰胺快速检测试纸条，该试纸条包括底板(I)、样品垫(3)、硒标结合垫(5)、反应垫(2)、吸水垫(8);所述的样品垫(3)和吸水垫(8)分别设置在底板(I)两端,硒标结合垫(5)设置在样品垫(3) —端，反应垫(2)设置在吸水垫(8) —端，且设置在硒标结合垫(5)和吸水垫(8)之间，其中反应垫(2)上设置有一条检测线(6)和一条质控线(7)，检测线(6)和质控线(7)互相平行，并且与试纸条的长相垂直，检测线(6)靠近样品垫(3) —端，质控线(7)靠近吸水垫(8)—端，其特征在于该试纸条在样品垫(3)和硒标结合垫(5)之间还设置有一段过滤层(4 )。
2.根据权利要求1所述的一种三聚氰胺快速检测试纸条，其特征在于所述的过滤层(4)为聚醚砜(PES)。
【文档编号】G01N33/04GK203772846SQ201420139229
【公开日】2014年8月13日 申请日期:2014年3月25日 优先权日:2014年3月25日
【发明者】不公告发明人 申请人:兰州红虫生物工程有限责任公司