蓝舌病病毒b-elisa抗体检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒，包括盒体与盒盖，本实用新型盒体与盒盖采用插入式结构相连；盒体内设置有与盒体尺寸大小相同的海绵托，所述的海绵托上设置有12个凹孔；凹孔内分别放置有1瓶20×浓缩洗涤液、1瓶稀释液、1瓶包被液、1瓶终止液、1瓶底物液、1管BTV单抗、1管HRP羊抗鼠二抗、1管BTV强阳性血清、1管BTV弱阳性血清、1管BTV阴性血清、1管注射用水，1瓶BTV?VP7抗原。本实用新型将便携性达到极致，使得蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测可以企业化操作、规模化生产，且具有检测灵敏度高、检测时间短、稳定可靠的优点。
【专利说明】蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒
【技术领域】
[0001]本实用新型属于试剂盒结构【技术领域】，具体涉及蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒结构【技术领域】。
【背景技术】
[0002]蓝舌病(Bluetongue,BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒(BTV)引起的经媒介昆虫传播的动物传染病。BTV主要感染反刍动物牛、羊，表现为高烧、黏膜水肿和糜烂等症状，致死率为20% -30%。
[0003]蓝舌病最早的记录可追溯于18世纪南非发病的绵羊。1940年前，本病报道仅限于撒哈拉以南的非洲大陆少数几个国家。Gambles (1949)首次报道在非洲大陆以外的塞浦路斯出现本病流行，随后的30年间，该病在土耳其(1944，1946，1947)、以色列(1949)、美国(1952)、伊比利亚半岛(1956-1960)、葡萄牙(1956)、西班牙(1957)、巴勒斯坦、印度、中国等国均有爆发。
[0004]蓝舌病病毒抗体检测方法有中和试验、ELISA试验。其中ELISA方法由于实验条件要求低(不涉及病原操作、生物安全要求低)而被广泛应用。本实用新型专利中的B-ELISA抗体检测方法，主要利用昆虫细胞表达的蓝舌病病毒BTV VP7蛋白作为包被抗原，针对VP7蛋白的单克隆抗体及其他物质组成而成试剂盒。试剂盒具有生产成本低，易于规模化生产等特点。
【发明内容】
[0005]本实用新型的目的是提供一种简便、快速、敏感、特异的新型蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒，可广泛应用于羊、等各种动物感染BTV后血清抗体的检测和相应的流行病学调查。
[0006]蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒，包括盒体与盒盖，本实用新型盒体与盒盖采用插入式结构相连；盒体内设置有与盒体尺寸大小相同的海绵托，所述的海绵托上设置有12个凹孔；凹孔内分别放置有I瓶20X浓缩洗涤液、I瓶稀释液、I瓶包被液、I瓶终止液、I瓶底物液、I管BTV单抗、I管HRP羊抗鼠二抗、I管BTV强阳性血清、I管BTV弱阳性血清、I管BTV阴性血清、I管注射用水，I瓶BTV VP7抗原。
[0007]本实用新型所述的20X浓缩洗涤液体积为60ml，瓶盖为蓝色；所述的稀释液体积为50ml,瓶盖为黄色；所述的包被液体积为25ml,瓶盖为紫色；所述的终止液体积为25ml,瓶盖为红色；所述的底物液体积为25ml，瓶盖为棕色；所述的BTV强阳性血清和BTV弱阳性血清体积分别为300ul，管盖均为红色；所述的BTV阴性血清体积为300ul，管盖为蓝色；所述的BTV单抗体积为300ul，管盖为绿色；所述的注射用水体积为800ul，管盖为白色；所述的HRP羊抗鼠二抗体积为300ul，管盖为黄色。
[0008]本实用新型所述海绵托上放置有2块酶标板、8张封板纸以及I份说明书。
[0009]本实用新型所述的酶标板为96孔酶标板，该酶标板由聚乙烯制成，酶标板上设置有支撑架，且可单条拆卸，由12条酶标条构成，每条酶标条上有8个微孔。
[0010]本实用新型的有益效果是:阻断ELISA方法利用ELISA系统作为显示系统检测抗体对抗原的中和水平。ELISA系统有很多好处，如不需活病毒，因此不需要在2?3级生物安全实验室中进行，另外阻断ELISA法具有病毒抗体检测快速、敏感、重复性强、成本低的特点。本实用新型将便携性达到极致，使得蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测可以企业化操作、规模化生产，且具有检测灵敏度高、检测时间短、稳定可靠的优点。
【专利附图】
【附图说明】
[0011]图1为本实用新型盒体内布置结构示意图；
[0012]图2为酶标板结构图。
[0013]图中标号为，1:两块酶标板，2:1份说明书，3:8张封板纸，4:60ml20X浓缩洗涤溶液，5:50ml稀释液，6:25ml包被液，7:25ml终止液，8:25ml底物液，9:BTV VP7抗原，10:0.3ml BTV 强阳性血清，11:0.3ml BTV 弱阳性血清，12:0.3ml BTV 阴性血清，13:0.3mlHRP羊抗鼠二抗，14 =BTV单抗，15:0.8ml注射用水(去离子水)，16:盒体。
[0014]下面结合附图和【具体实施方式】对本实用新型做出进一步解释。
【具体实施方式】
[0015]如图1和图2所示，蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒，包括盒体与盒盖，本实用新型盒体与盒盖采用插入式结构相连；盒体内设置有与盒体尺寸大小相同的海绵托，所述的海绵托上设置有12个凹孔；凹孔内分别放置有I瓶20 X浓缩洗涤液、I瓶稀释液、I瓶包被液、I瓶终止液、I瓶底物液、I管BTV单抗、I管HRP羊抗鼠二抗、I管BTV强阳性血清、I管BTV弱阳性血清、I管BTV阴性血清、I管注射用水，I瓶BTV VP7抗原。
[0016]本实用新型所述的20X浓缩洗涤液体积为60ml，瓶盖为蓝色；所述的稀释液体积为50ml,瓶盖为黄色；所述的包被液体积为25ml,瓶盖为紫色；所述的终止液体积为25ml,瓶盖为红色；所述的底物液体积为25ml，瓶盖为棕色；所述的BTV强阳性血清和BTV弱阳性血清体积分别为300ul，管盖均为红色；所述的BTV阴性血清体积为300ul，管盖为蓝色；所述的BTV单抗体积为300ul，管盖为绿色；所述的注射用水体积为800ul，管盖为白色；所述的HRP羊抗鼠二抗体积为300ul，管盖为黄色。
[0017]本实用新型所述海绵托上放置有2块酶标板、8张封板纸以及I份说明书。
[0018]本实用新型所述的酶标板为96孔酶标板，该酶标板由聚乙烯制成，酶标板上设置有支撑架，可单条拆卸，由12条酶标条构成，每条酶标条上有8个微孔。
[0019]使用本试剂盒的操作步骤如下。
[0020](I)在BTV VP7抗原冻干瓶中注入600ul注射用水，用包被液1:50稀释后，在所需的孔中各加10ul，37。。孵育Ih ；
[0021](2)将各孔的液体弃入废液桶。每孔加300ul的洗涤液(试剂盒内20X浓缩洗液需用蒸馏水或去离子水稀释后方可使用。如有结晶，需先溶解后，方可进行稀释)进行洗板，重复三次。
[0022](3)在每孔中加入40ul稀释液；然后在Al，A2孔加入1ul稀释液；BI，B2，Cl，C2中加入1uIBTV强阳性血清；D1, D2，El, E2中加入1uIBTV弱阳性血清；F1, F2，Gl，G2中加入1ul稀释液；H1，H2中加入1uIBTV阴性血清；待检样品，取1ul加入相应的孔中，并做好记录，37 °C孵育Ih ；
[0023](4)将BTV单抗用稀释液1:50稀释后，除了 Al，A2孔外，其余各孔加入50ul，在Al，A2孔中加入50ul稀释液，37°C孵育Ih ；
[0024](5)重复步骤⑵；
[0025](6)将HRP羊抗鼠二抗用稀释液1:100稀释后，每孔中加入100ul，37°C孵育Ih ；
[0026](7)重复步骤⑵；
[0027](8)每孔加10ul底物液；
[0028](9) 37°C避光放置 10_15min ；
[0029](10)每孔加10ul终止液；在15min内于450nm波长处测定各孔的吸光度值，即
0^450? 值。
[0030](11)计算各孔的S/N值，即S/N =(血清样品OD值/BTV阴性血清孔平均OD值)X 100。结果判定当BTV强阳性对照(SP) S/N值小于或等于20 ;BTV弱阳性对照(WP)S/N值在50-70之间；CC(BTV羊抗鼠二抗对照即Al，A2孔)孔S/N值小于10 ；BTV阴性血清孔(N)0D450读数大于0.5，实验结果有效。此时检测样品S/N值彡80时判为阴性，70 < S/N值< 80时判为可疑，需用其它方法检测，S/N ( 70时判为阳性。
[0031]备注:BTV VP7抗原溶解后呈乳白色或无色或有微量不溶物，不影响使用效果。溶解抗原-20°C保存，反复冻融至少30次不影响实验结果；试剂盒保存方式，2°C _8°C保存。
【权利要求】
1.蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒，包括盒体与盒盖，其特征在于，盒体与盒盖采用插入式结构相连；盒体内设置有与盒体尺寸大小相同的海绵托，所述的海绵托上设置有12个凹孔；凹孔内分别放置有I瓶20 X浓缩洗涤液、I瓶稀释液、I瓶包被液、I瓶终止液、I瓶底物液、I管BTV单抗、I管HRP羊抗鼠二抗、I管BTV强阳性血清、I管BTV弱阳性血清、I管BTV阴性血清、I管注射用水，I瓶BTV VP7抗原。
2.根据权利要求1所述的蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的20 X浓缩洗涤液体积为60ml，瓶盖为蓝色；所述的稀释液体积为50ml，瓶盖为黄色；所述的包被液体积为25ml,瓶盖为紫色；所述的终止液体积为25ml,瓶盖为红色；所述的底物液体积为25ml，瓶盖为棕色；所述的BTV强阳性血清和BTV弱阳性血清体积分别为300ul，管盖均为红色；所述的BTV阴性血清体积为300ul，管盖为蓝色；所述的BTV单抗体积为300ul,管盖为绿色；所述的注射用水体积为800ul,管盖为白色；所述的HRP羊抗鼠二抗体积为300ul，管盖为黄色。
3.根据权利要求1所述的蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述海绵托上放置有2块酶标板、8张封板纸以及I份说明书。
4.根据权利要求3所述的蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的酶标板为96孔酶标板，该酶标板由聚乙烯制成，酶标板上设置有支撑架，用于单条拆卸。
【文档编号】G01N33/569GK203941168SQ201420380440
【公开日】2014年11月12日 申请日期:2014年7月10日 优先权日:2014年7月10日
【发明者】艾军, 杨云庆, 祝贺, 杨俊兴, 聂福平, 叶玲玲, 蒋宏伟, 杨素, 周晓黎, 花群义, 李应国, 董俊, 尹尚莲 申请人:艾军, 杨俊兴, 聂福平