尿液中的登革热特异性IgA抗体作为登革热的诊断标志物的制作方法

本发明涉及疾病诊断领域，具体地，涉及尿液中的登革热特异性iga抗体作为登革热的诊断标志物。

背景技术：

登革热是由登革病毒(denguevirus，denv)感染引起的、经蚊子传播的疾病。登革热是一种热带病毒病，主要分布于东南亚和西太平洋地区。但是，近年来，随着国际贸易和旅游业的日益频繁，以及气候改变等诸多因素的影响，登革热已经波及到了温带，甚至是寒带地区，成为了目前世界上分布最广、发病人数最多，威胁最为严重的虫媒病毒病之一。据统计，全球每年感染登革病毒的人数近3.9亿，发病人数9600万，其中50万重症病例需入院治疗，给全球公共卫生系统带来了沉重的负担。在我国，登革热被列入法定乙类传染病，主要流行于广东、福建、浙江和云南等地。近年来，随着媒介范围的不断扩大和国际交往的日益频繁，我国仅有三省未见登革热的报告病例，登革热已成为严重威胁我国公共卫生安全的重要蚊媒传染病之一。

根据2009年世界卫生组织发布的登革热诊疗指南，登革热患者被分为普通登革热和重症登革热。普通登革热主要表现为急性发热，全身肌肉、骨骼和关节疼痛，并可出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻等消化道症状。通常愈后良好。但是，少数患者会在退热后症状加重，如果有下列情况之一者可诊断为重症登革热，病死率高达5-20％：1)严重出血包括皮下血肿、呕血、黑便、阴道流血、肉眼血尿、颅内出血等；2)休克；3)重要脏器功能障碍或衰竭：肝脏损伤(alt和/或ast>1000iu/l)、ards、急性心功能衰竭、急性肾功能衰竭、脑病(脑炎、脑膜脑炎)等。

登革病毒可分为4个血清型(denv-1、denv-2、denv-3和denv-4)。不同血清型登革病毒感染均可导致重症登革热。目前，重症登革热的发病机制尚不清楚，并存在多种假说。其中的抗体依赖增强假说被广泛接受。该假说认为，不同血清型登革病毒间存在交叉反应，但缺乏交叉保护作用。初次感染登革病毒的病人，临床上表现相对温和，并可诱导针对同一血清型病毒的持久保护力；但是，如果该患者再次感染了异型登革病毒，则异型登革病毒会借助之前体内存在的无交叉保护的抗体，来增强病毒的感染能力。临床上常出现严重的症状，可危及生命。

登革病毒感染的临床表现十分复杂，而且多数症状与疟疾、伤寒以及基孔肯亚热等疾病难以区分，单纯依据患者的流行病学资料和临床表现很难明确诊断，因此，通常需要实验室检测进一步确诊。目前，登革热的实验室诊断技术，主要包括病毒分离、病毒核酸和ns1抗原的检测，血清中igm和igg抗体亦具有确诊意义。上述诊断标志物主要存在于患者血液。但是，对于新生儿和有出血症状的患者，血液标本相对难以获得；同时出于基层疾控和家庭早期诊断的需求，发展其他便捷可行的快速诊断方法受到广泛重视。

技术实现要素：

本发明的目的是克服现有技术中只能基于血液诊断登革热的不足，提供尿液中的登革热特异性iga抗体作为登革热的诊断标志物及相关的用途。

本发明的发明人经大量实验后发现，无论是在普通登革热患者，还是重症登革热患者的尿液中均存在登革热特异性iga抗体，而且在重症登革热患者的尿液中，登革热特异性iga抗体的检出率显著高于普通登革热患者，故而可以通过检测尿液中的登革热特异性iga抗体来协助确诊患者是否患重症登革热。因此，为了实现上述目的，第一方面，本发明提供了用于检测登革热特异性iga抗体的试剂和用于获取尿液样品的器具在制备用于诊断登 革热的医疗器具中的用途。

第二方面，本发明提供了登革热特异性iga抗体胶体金快速检测试剂在检测尿液中的登革热特异性iga抗体中的用途。

第三方面，本发明提供了一种诊断登革热的方法，该方法包括：检测患者的尿液样品中的登革热特异性iga抗体。

通过以上技术方案，本发明能够有效辅助诊断登革热(特别是重症登革热)，从而方便医生对登革热患者进行确诊。而且，尿液的临床采集具有无创、便利的优点，因此更值得推广应用。

本发明的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

附图说明

附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1为普通登革热患者和重症登革热患者尿液标本中特异性iga的检测信号强度结果图。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。

在本发明中，在未作相反说明的情况下，使用的术语“登革热特异性iga抗体”是指人体b细胞针对登革热病毒的抗原表位产生的一种免疫球蛋白，氨基酸序列可参见ncbi。

第一方面中，本发明提供了用于检测登革热特异性iga抗体的试剂和用于获取尿液样品的器具在制备用于诊断登革热(特别是重症登革热)的医疗器具中的用途。

第一方面中，用于检测登革热特异性iga抗体的试剂可以为各种本领域常规的用于检测登革热特异性iga抗体的试剂，为了实现快速检测，用于检测登革热特异性iga抗体的试剂优选为登革热特异性iga抗体胶体金快速检测试剂(如mpdiagnostics的登革热特异性iga抗体快速检测胶体金试纸)。

第一方面中，用于获取尿液样品的器具可以为常规的用于获取患者尿液的器具，优选情况下，用于获取尿液样品的器具包括尿液采集器、离心管和离心机。尿液采集器可以方便患者收集新鲜尿液；离心管用于盛装新鲜尿液以置于离心机中对新鲜尿液进行离心处理，从而获得上清液作为待检测的尿液样品。

第二方面中，本发明提供了登革热特异性iga抗体胶体金快速检测试剂(如mpdiagnostics的登革热特异性iga抗体快速检测胶体金试纸)在检测尿液中的登革热特异性iga抗体中的用途。

第三方面中，本发明提供了一种诊断登革热(特别是重症登革热)的方法，该方法包括：检测患者的尿液样品中的登革热特异性iga抗体。如果尿液样品中存在登革热特异性iga抗体，则提示该患者患登革热(特别是易发展为重症登革热)。

第三方面中，可以直接对新鲜尿液进行上述检测，也可以对尿液样品进行适当的预处理。优选地，尿液样品的制备方法为：将患者的尿液在400-1000g的条件下离心3-10min，取上清液作为尿液样品。

第三方面中，检测尿液样品中的登革热特异性iga抗体的方法为登革热特异性iga抗体胶体金快速检测法(如使用mpdiagnostics的登革热特异性iga抗体快速检测胶体金试纸)。

以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，“室温”表示“25℃±3℃”；下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1

本实施例用来说明登革热患者尿液标本中特异性iga抗体的检测。

共收集78名登革热患者(普通登革热53例，重症登革热25例)在不同发病时间的262份尿液标本，所有患者根据“who/tdr.dengue-guidelinesfordiagnosis,treatment,preventionandcontrol.2009；http://www.who.int/tdr/publications/training-guideline-publications/dengue-diagnosis-treatment/en/index.html.dateofaccess:12/05/2015.2009”进行确诊。患者的基本信息见表1。

表1

采用登革热特异性iga抗体快速检测胶体金试纸(dengueigarapidtest，mpdiagnostics)对所有尿液标本进行登革病毒特异性iga抗体的检测：首先，将新鲜的尿液标本在室温下，400g，离心5min。取25μl上清液，滴加在胶体金试纸上，室温放置20min，根据试剂盒自带的比色卡确定目的条带的信号强度。iga信号强度分为5级：0.2、0.5、1、2和3。检测结果如表2所示。

表2

根据表2进一步分析登革热患者在不同发病期的特异性iga抗体检测阳性率，可以看出，46例登革热患者的尿液标本中可检测到登革病毒特异性iga抗体，阳性率为59.0％；而且，重症登革热患者在不同发病期的iga抗体检测阳性率均高于普通登革热患者(参见表3)。

表3

根据表2分析登革热患者尿液标本中特异性iga的动态变化，结果显示：iga最早可出现在普通登革热患者发病2天的尿液标本中，并可持续存在至发病13天；而在发病14天的重症登革热患者的尿液中仍能检测到iga抗体(参见表4)。

表4

根据表4统计不同发病时间段的登革热患者尿液标本中特异性iga抗体的检测阳性率，结果显示：在重症登革热组，iga的检测阳性率在发病的不同时间段均高于普通登革热组，而且随发病时间的延长，iga的检测阳性率不断增高，于发病12-14天，达到92.8％；在普通登革热组，iga的检测阳性率最高则出现于发病8-11天，仅为53.8％(参见表5)。

表5

采用fisher检验分析尿液标本中登革病毒特异性iga抗体的检出率与疾病的严重程度的相关性(表6)，结果表明，重症登革热患者尿液标本中iga的检出率显著高于轻症登革热患者(p<0.001)，表明尿液标本中的iga抗体是重症登革热的危险因子。

表6

进一步对登革热患者尿液标本中的iga进行了定量分析(iga信号强度分析，见图1，其中，线图上的数据点为散点数据的平均值)。结果显示，在重症登革热组，iga信号强度在发病7天后显著高于普通登革热组，并持续维持在1以上。提示临床医生在登革热患者的发病过程中应密切关注尿液中的iga水平，如果iga信号强度>1，则说明该患者很有可能发展为重症登革热。

从以上结果可以看出，通过检测尿液中的登革热特异性iga抗体能够有效辅助医生对登革热进行确诊。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。