一种用液相色谱法分离测定沃替西汀有关物质的方法与流程

本发明属于分析化学领域，具体涉及液相色谱法分离测定沃替西汀及其有关物质的方法。

背景技术：

沃替西汀，英文名为vortioxetine，化学名为：1-[2-(2，4-二甲基苯基硫基)-苯基]哌嗪，是由丹麦灵北制药公司(lundbeck）和日本武田制药公司(takeda）共同研发的一种新型抗抑郁的药物，2013年9月该药物获得fda批准上市，商品名称为brintellix，2013年12月，该药物在欧盟批准上市。

在合成该化合物的过程中，中间体及其杂质可能会由于去除不完全而影响药物的纯度和质量，该中间体的结构式为：。

对于合成沃替西汀中引入的有关物质，在原料药中是需要进行质量控制的，因此，实现沃替西汀及其有关物质的分离，在沃替西汀合成过程的质量控制方面具有重要的现实意义。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种分析沃替西汀的纯度以及分离其有关物质的方法，从而实现沃替西汀与其有关物质的分离和测定，从而保证沃替西汀的纯度，实现其终产品原料药的质量控制。

本发明所述的用液相色谱法分析沃替西汀的纯度以及分离其有关物质的方法，是采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的无机盐缓冲溶液－有机相为流动相。

上述所说的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料。

上述所说的有机相选自以下化合物：甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇，优选为乙腈。

上述所说的方法，其流动相无机盐缓冲溶液-有机相采用梯度洗脱。

上述所说的方法中，无机盐缓冲溶液中包含的无机盐选自磷酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐，优选为磷酸盐，具体为磷酸二氢钾、磷酸二氢铵。

其中无机盐缓冲溶液中包含的无机盐的浓度为0.01～0.1mol/l，优选浓度为0.02mol/l。

本发明所述的分离测定方法，可按照以下方法实现：

1)取沃替西汀样品适量，用甲醇或流动相溶解样品，配制成每1ml含沃替西汀0.1～1.5mg的样品溶液。

2)设置流动相流速为0.5～1.5ml/min，流动相流速优选为1.0ml/min，检测波长为210～250nm，最佳检测波长为220nm，柱温箱温度为20～50℃，柱温箱温度最佳为25℃。

3)取1)的样品溶液10～50μl，注入液相色谱仪，完成沃替西汀与有关物质的分离测定。其中：

高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为岛津：lc-20at，cbm-20a，sil-20ac，spd-m20a，cto-10asvp

色谱柱：c18（es，250×4.6mm，5μm）

流动相：a：0.02mol/l磷酸二氢钾缓冲溶液（称取磷酸二氢钾2.72g，加水溶解并定容至1000ml，用稀磷酸调ph值为3.0）；b：乙腈；采用梯度洗脱；

流速：1.0ml/min

检测波长：220nm

柱温：25℃

进样体积：10μl

本发明采用c18（250×4.6mm，5μm），能够有效的分离沃替西汀及其有关物质。本发明解决了沃替西汀及其有关物质的分离测定问题，从而确保了沃替西汀原料药的质量可控。

附图说明

图1为实施例1时的沃替西汀及其有关物质hplc图；

图2为实施例2时的沃替西汀及其有关物质hplc图；

具体实施方式：

以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。

实施例1

仪器与条件

高效液相色谱仪：岛津：lc-20at，cbm-20a，sil-20ac，spd-m20a，cto-10asvp；

色谱柱：c18（250×4.6mm，5μm）

流动相：0.02mol/l磷酸二氢铵缓冲溶液（称磷酸二氢铵2.3g，加水溶解并定容至1000ml）-甲醇（20:80）

流速：1.0ml/min

检测波长：220nm

柱温：25℃

进样体积：10μl

实验步骤

取沃替西汀及其中间体适量，分别用甲醇溶解样品，配制成含沃替西汀及其中间体约0.5mg/ml的样品溶液。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图1，图1中保留时间为10.372min的色谱峰为沃替西汀，其余色谱峰为沃替西汀各有关物质的色谱峰。

实施例2

仪器与条件

高效液相色谱仪：岛津：lc-10atvp，spd-m10avp；

色谱柱：c18（kromasil，250×4.6mm，5μm）

流动相：0.02mol/l磷酸二氢钾缓冲液（称取磷酸二氢钾2.72g，加水溶解并定容至1000ml，用稀磷酸调ph至3.0）-乙腈（60:40）

流速：1.0ml/min

检测波长：220nm

柱温：25℃

进样体积：10μl

实验步骤

取沃替西汀及其中间体适量，分别用甲醇溶解样品，配制成含沃替西汀及其中间体约0.5mg/ml的样品溶液；另取甲醇适量作为空白溶剂。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图2，图2中保留时间为10.761min的色谱峰为沃替西汀，其余色谱峰为沃替西汀各有关物质的色谱峰。

从图1－图2表明：本发明的方法，可以清楚地将沃替西汀与其中间体分离，并可以准确进行检测定量，以计算出沃替西汀的含量，从而有效控制沃替西汀的产品质量。