本发明涉及测量头足类脂肪酸含量领域，更具体地说，涉及一种快速测定头足类脂肪酸含量的方法。
背景技术：
脂肪酸是生物生命活动不可或缺的成分，在生物体内占重要比例，对海洋生物而言，其体内的某些脂肪酸可以用来示踪食物沿食物链的传递过程，脂肪酸的信息可以反应摄食者较长时间段内的摄食饵料情况，不同脂肪酸组成特征指示不同的饵料种类。海洋生物的脂肪酸组成特征既可以反映出海洋生物在食物网中的营养状态，同时还可以反映其摄食生物的选择性及生活史，因此，海洋生物的脂肪酸组成及应用在海洋生态系统食物网中有广泛的研究。
据fao统计，世界头足类产量由上世纪70年代100万吨上升到近年来的430多万吨，在世界海洋渔业中的地位越来越重要。头足类是金枪鱼等大型鱼类、鸟类和抹香鲸等哺乳动物的重要饵料，在海洋食物网中具有很重要的地位，同时，短生命周期的头足类种类通常被认为是海洋生态系统变化的指示器。
目前针对头足类脂肪酸的研究比较缺乏，没有快速准确的处理并测定头足类脂肪酸的方法。
技术实现要素：
1．要解决的技术问题
针对现有技术中存在的目前没有快速准确的处理并测定头足类脂肪酸的方法问题，本发明的目的在于提供一种快速测定头足类脂肪酸含量的方法，它可以实现快速准确的处理并测定头足类的脂肪酸种类和含量。
2.技术方案
为解决上述问题，本发明采用如下的技术方案。
一种快速测定头足类脂肪酸含量的方法，包括如下步骤：
（1）清洗一条鱿鱼，用手术剪刀取下鱿鱼胴体上的一块重量为0.8-1.2g肌肉样品,将肌肉样品放入10ml离心管中，并将10ml离心管标记，保存于冰柜中备用；
（2）取出10ml离心管中的肌肉样品，然后用解剖刀和镊子剔除肌肉上的皮肤；
（3）用超声波清洗肌肉3分钟，清洗后用超纯水冲洗；
（4）将清洗去污后的肌肉冷冻干燥，研磨成粉末样品，制备过程应避免沾污；
（5）使用天平准确称取研磨后的粉末样品0.25g，置于15ml离心管中；
（6）向装有粉末样品的15ml离心管中加入15ml三氯甲烷-甲醇溶液，浸泡时间为20-25h；
（7）15ml离心管离心溶液后收集其上清液，然后用5ml三氯甲烷-甲醇溶液润洗15ml离心管的下层，15ml离心管再次离心溶液，离心后再次收集上清液，然后向15ml离心管中加入4ml浓度为0.9%的氯化钠溶液，静置2小时；
（8）选取圆底烧瓶并进行称重，记录重量m1，然后取加入氯化钠的15ml离心管中的下层溶液于圆底烧瓶中并进行旋转蒸发得到总脂，然后对圆底烧瓶再次称重，记录重量m2，总脂含量为m2-m1；
（9）在圆底烧瓶中加入6ml浓度为0.5mol/l的氢氧化钠-甲醇溶液，混合后连接水浴回流装置，水浴加热5-10分钟；
（10）加入5ml三氯化硼甲醇溶液水浴回流30分钟；
（11）加入5ml正己烷水浴回流萃取2分钟；
（12）将圆底烧瓶回流萃取后的溶液冷却，然后加入10ml饱和氯化钠溶液，摇晃,静置分层30分钟；
（13）用注射器吸取3-5ml的圆底烧瓶上层溶液；用针头式过滤器对吸取的溶液进行过滤，将过滤后的溶液加入样品瓶中备用，并标记样品瓶；
（14）使用移液枪取2-3ml的样品瓶中的样品，然后以1:1的比例加入400mg/l十九烷酸甲酯内标，然后进行脂肪酸测量。
通过向带有粉末样品的离心管中加入三氯甲烷-甲醇溶液离心分层，并对离心分层的溶液进行蒸发得到总酯，然后向总酯中加入氢氧化钠-甲醇溶液并对其进行处理，并向处理后的溶液中加入十九烷酸甲酯内标，然后进行脂肪酸测量，利用甲酯化方法对头足类样品进行快速甲酯化，能够快速准确的处理并测定头足类的脂肪酸种类和含量，该方法油脂提取完全，可以分离所有常见脂肪酸，操作过程简单，减少使用剧毒物质进行测量，结果准确，可重复性高。
优选地，所述步骤（1）和步骤（2）中使用的手术剪刀、解剖刀和镊子使用前利用超声波清洗消毒，对操作工具进行清洗消毒，提高测量准确度。
优选地，所述步骤（3）中对肌肉进行超声波清洗前利用胶带粘取黏连在肌肉表面的杂质，对黏连在肌肉表面的杂质进行粘取，提高清洗肌肉的效率。
优选地，所述步骤（4）对肌肉进行冷冻干燥前利用吹风机对其进行吹热风去除水分处理，利用吹风机吹散肌肉表面的大部分水分，防止了肌肉表面水分过多，提高了冷冻干燥的效果。
优选地，所述步骤（4）冷冻干燥采用真空冷冻干燥机冷冻干燥，真空冷冻干燥机干燥效率高，且有效的防止杂质污染，提高了测量准确度。
优选地，所述步骤（4）对肌肉样品进行研磨前对研磨机进行清洗消毒，对研磨机进行清洗消毒，避免了杂质沾污样品，提高测量准确度。
优选地，所述步骤（6）和步骤（7）使用的三氯甲烷-甲醇溶液体积比为2:1，体积比为2:1的三氯甲烷-甲醇溶液提取脂肪酸提取的更加完整，提高了测量准确度。
优选地，所述步骤（8）选取的圆底烧瓶在进行空瓶称重前进行干燥处理，干燥有效的去除了圆底烧瓶空瓶时的水分，使得测量的m1更加准确，提高测量准确度。
优选地，所述步骤（8）的圆底烧瓶蒸发采用旋转蒸发仪进行蒸发，旋转蒸发仪能够进行匀速旋转，蒸发效率高，提高了测量效率。
优选地，所述步骤（14）对脂肪酸进行测定时，利用gcmsd测定，色谱柱为hp-88，取样品瓶中的脂肪酸甲脂样品1-2ml放入gcmsd，测样升温程序为初始125℃，以8℃/min升到145℃，保持26min，以2℃/min升到220℃，保持1min，再以1℃/min升到227℃，保持1min，gcmsd进样口温度250℃，辅助加热器温度280℃；分流比20:1；载气为氦气，利用gcmsd测定测量效率高，测量准确度高。
3.有益效果
相比于现有技术，本发明的优点在于：
（1）本方案的通过向带有粉末样品的离心管中加入三氯甲烷-甲醇溶液离心分层，并对离心分层的溶液进行蒸发得到总酯，然后向总酯中加入氢氧化钠-甲醇溶液并对其进行处理，并向处理后的溶液中加入十九烷酸甲酯内标，然后进行脂肪酸测量，利用甲酯化方法对头足类样品进行快速甲酯化，能够快速准确的处理并测定头足类的脂肪酸种类和含量，该方法油脂提取完全，可以分离所有常见脂肪酸，操作过程简单，减少使用剧毒物质进行测量，结果准确，可重复性高。
（2）对操作工具进行清洗消毒，提高测量准确度。
（3）利用胶带粘取黏连在肌肉表面的杂质，对黏连在肌肉表面的杂质进行粘取，提高清洗肌肉的效率。
（4）利用吹风机吹散肌肉表面的大部分水分，防止了肌肉表面水分过多，提高了冷冻干燥的效果。
（5）真空冷冻干燥机干燥效率高，且有效的防止杂质污染，提高了测量准确度。
（6）对研磨机进行清洗消毒，避免了杂质沾污样品，提高测量准确度。
（7）体积比为2:1的三氯甲烷-甲醇溶液提取脂肪酸提取的更加完整，提高了测量准确度。
（8）干燥有效的去除了圆底烧瓶空瓶时的水分，使得测量的m1更加准确，提高测量准确度。
（9）旋转蒸发仪能够进行匀速旋转，蒸发效率高，提高了测量效率。
（10）利用gcmsd测定测量效率高，测量准确度高。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例；对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述；显然；所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例；而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例；本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例；都属于本发明保护的范围。
实施例1：
一种快速测定头足类脂肪酸含量的方法，包括如下步骤：
（1）清洗一条鱿鱼，用手术剪刀取下鱿鱼胴体上的一块重量为0.8-1.2g肌肉样品,将肌肉样品放入10ml离心管中，并将10ml离心管标记，保存于冰柜中备用，手术剪刀利用超声波清洗消毒，提高了测量准确度；
（2）取出10ml离心管中的肌肉样品，然后用解剖刀和镊子剔除肌肉上的皮肤，剔除皮肤上的黑色素等杂质，避免了黑色素影响测试结果，提高测量准确度，解剖刀和镊子利用超声波清洗消毒，提高了测量准确度；
（3）用超声波清洗肌肉3分钟，清洗后用超纯水冲洗，对肌肉进行超声波清洗前利用胶带粘取黏连在肌肉表面的杂质，对黏连在肌肉表面的杂质进行粘取，提高清洗肌肉的效率，超声波清洗的肌肉较干净，而且快，超纯水清洗去除杂质干扰，避免引入污染，提高测量准确度；
（4）将清洗去污后的肌肉冷冻干燥，研磨成粉末样品，制备过程应避免沾污，对肌肉进行冷冻干燥前利用吹风机对其进行吹热风去除水分处理，利用吹风机吹散肌肉表面的大部分水分，防止了肌肉表面水分过多，提高了冷冻干燥的效果，冷冻干燥后的肌肉便于进行研磨，冷冻干燥采用真空冷冻干燥机冷冻干燥，真空冷冻干燥机干燥效率高，且有效的防止杂质污染，提高了测量准确度，对肌肉样品进行研磨前对研磨机进行清洗消毒，对研磨机进行清洗消毒，避免了杂质沾污样品，提高测量准确度；
（5）使用天平准确称取研磨后的粉末样品0.25g，置于15ml离心管中；
（6）向装有粉末样品的15ml离心管中加入15ml三氯甲烷-甲醇溶液，浸泡时间为20-25h，三氯甲烷-甲醇溶液体积比为2:1，体积比为2:1的三氯甲烷-甲醇溶液提取脂肪酸提取的更加完整，提高了测量准确度；
（7）15ml离心管离心溶液后收集其上清液，然后用5ml三氯甲烷-甲醇溶液润洗15ml离心管的下层，15ml离心管再次离心溶液，离心后再次收集上清液，然后向15ml离心管中加入4ml浓度为0.9%的氯化钠溶液，静置2小时，三氯甲烷-甲醇溶液体积比为2:1，体积比为2:1的三氯甲烷-甲醇溶液提取脂肪酸提取的更加完整，提高了测量准确度；
（8）选取圆底烧瓶并进行称重，记录重量m1，然后取加入氯化钠的15ml离心管中的下层溶液于圆底烧瓶中并进行旋转蒸发得到总脂，然后对圆底烧瓶再次称重，记录重量m2，总脂含量为m2-m1，圆底烧瓶在进行空瓶称重前进行干燥处理，干燥有效的去除了圆底烧瓶空瓶时的水分，使得测量的m1更加准确，提高测量准确度，圆底烧瓶蒸发采用旋转蒸发仪进行蒸发，旋转蒸发仪能够进行匀速旋转，蒸发效率高，提高了测量效率；
（9）在圆底烧瓶中加入6ml浓度为0.5mol/l的氢氧化钠-甲醇溶液，混合后连接水浴回流装置，水浴加热5-10分钟；
（10）加入5ml三氯化硼甲醇溶液水浴回流30分钟；
（11）加入5ml正己烷水浴回流萃取2分钟；
（12）将圆底烧瓶回流萃取后的溶液冷却，然后加入10ml饱和氯化钠溶液，摇晃,静置分层30分钟；
（13）用注射器吸取3-5ml的圆底烧瓶上层溶液，上层为正己烷层，用针头式过滤器对吸取的溶液进行过滤，将过滤后的溶液加入样品瓶中备用，并标记样品瓶；
（14）使用移液枪取2-3ml的样品瓶中的样品，然后以1:1的比例加入400mg/l十九烷酸甲酯内标，然后进行脂肪酸测量，对脂肪酸进行测定时，利用gcmsd测定，色谱柱为hp-88，取样品瓶中的脂肪酸甲脂样品1-2ml放入gcmsd，测样升温程序为初始125℃，以8℃/min升到145℃，保持26min，以2℃/min升到220℃，保持1min，再以1℃/min升到227℃，保持1min，进样口温度250℃，辅助加热器温度280℃；gcmsd分流比20:1；载气为氦气，利用gcmsd测定测量效率高，测量准确度高。
通过向带有粉末样品的离心管中加入三氯甲烷-甲醇溶液离心分层，并对离心分层的溶液进行蒸发得到总酯，然后向总酯中加入氢氧化钠-甲醇溶液并对其进行处理，并向处理后的溶液中加入十九烷酸甲酯内标，然后进行脂肪酸测量，利用甲酯化方法对头足类样品进行快速甲酯化，能够快速准确的处理并测定头足类的脂肪酸种类和含量，该方法油脂提取完全，可以分离所有常见脂肪酸，操作过程简单，减少使用剧毒物质进行测量，结果准确，可重复性高。
以上所述；仅为本发明较佳的具体实施方式；但本发明的保护范围并不局限于此；任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内；根据本发明的技术方案及其改进构思加以等同替换或改变；都应涵盖在本发明的保护范围内。