一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂磁性纳米微球及其制备方法与流程

文档序号:23626060发布日期:2021-01-12 10:38阅读:65来源:国知局
本发明涉及检测试剂领域,特别是一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂磁性纳米微球及其制备方法。
背景技术
:“对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂”主要用于定性检测尿液中的对羟基苯丙氨酸的含量,从而判断人体内恶性肿瘤细胞的代谢活跃程度,进而进行恶性肿瘤风险评估。恶性肿瘤患者普遍存在氨基酸代谢异常的现象,即蛋白质分解为氨基酸的过程增强,而氨基酸的分解代谢则减弱,可使氨基酸重新用于肿瘤细胞蛋白质合成,多余而无法利用的氨基酸则排出体外。氨基酸代谢异常在肿瘤发生早期就存在,其中一个重要表现,就是尿液中对羟基苯丙氨酸(酪氨酸)的含量升高。肿瘤细胞代谢越活跃,氨基酸代谢异常越显著,酪氨酸含量升高越明显。通过大量实验研究发现,几乎所有恶性肿瘤病人尿液中的酪氨酸含量明显升50%-150%。因此临床上将“对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂”主要应用于原发肿瘤的发现、肿瘤高危人群的筛选、肿瘤治疗效果的观察和评价以及肿瘤复发和预后的预测等。市场上一般采用分别配置硫酸汞溶液,硝酸亚汞溶液,硫酸镍溶液,α-亚硝基-β-萘酚溶液,然后再按比例混合,这样的操作复杂,必须要器具齐全的实验室才能完成,如果事先配置好,做成试纸,则稳定性低,尿检的准确性不高,检测试剂存放时间越长,颜色变化不明显,准确性越低,这样就无法便携,必须在实验室进行,方便性低,降低检测质量;市场需要一种能增强检测试剂稳定性的方法,提高检测试剂的保存时限,方便做成便携检测设备;本发明解决这样的问题。技术实现要素:为解决现有技术的不足,本发明的目的在于提供一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂磁性纳米微球及其制备方法,能够提高检测试剂稳定性,无需复杂的配制过程,混合酸液后即可检测使用,方便做成便携检测设备,提高尿检的准确率。为了实现上述目标,本发明采用如下的技术方案:一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂磁性纳米微球,包括:配方包括:明胶26-42份,酸溶性壳聚糖18-34份,磁性纳米粒子0.6-1.2份,无水乙醇60-120份,硫酸汞12-24份,硝酸亚汞56-68份,硫酸镍2-6份,α-亚硝基-β-萘酚1-3份,表面活性剂64-120份。前述的一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂磁性纳米微球,酸溶性壳聚糖为对苯二甲醛交联的壳聚糖。前述的一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂磁性纳米微球,磁性纳米粒子包括:氧化铁纳米粒子,超顺磁氧化铁纳米颗粒。前述的一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂磁性纳米微球,表面活性剂为浓度为1%的仲烷基硫酸钠。一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂磁性纳米微球的制备方法,包括如下步骤:按照配方准备材料;配方包括:明胶26-42份,酸溶性壳聚糖18-34份,磁性纳米粒子0.6-1.2份,无水乙醇60-120份,硫酸汞12-24份,硝酸亚汞56-68份,硫酸镍2-6份,α-亚硝基-β-萘酚1-3份,表面活性剂64-120份;制作硫酸汞磁性纳米微球:步骤1,微球聚合物壳层基材:将明胶、酸溶性壳聚糖、磁性纳米粒子、无水乙醇搅拌,脱泡,熟化后得到聚合物壳层基材;步骤2,微球聚合物芯层溶液:将硫酸汞和24-46份表面活性剂混合;步骤3,使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液得到硫酸汞磁性纳米微球;制作硝酸亚汞磁性纳米微球:步骤a,微球聚合物壳层基材:将明胶、酸溶性壳聚糖、磁性纳米粒子、无水乙醇搅拌,脱泡,熟化后得到聚合物壳层基材;步骤b,微球聚合物芯层溶液:将硝酸亚汞和32-54份表面活性剂;步骤c,使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液得到硝酸亚汞磁性纳米微球;制作硫酸镍磁性纳米微球:步骤a,将明胶、酸溶性壳聚糖、磁性纳米粒子、无水乙醇搅拌,脱泡,熟化后得到聚合物壳层基材;步骤b,微球聚合物芯层溶液:将硫酸镍和4-12份表面活性剂混合;步骤c,使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液得到硫酸镍磁性纳米微球;制作α-亚硝基-β-萘酚磁性纳米微球:步骤ⅰ,微球聚合物壳层基材:将明胶、酸溶性壳聚糖、磁性纳米粒子、无水乙醇搅拌,脱泡,熟化后得到聚合物壳层基材;步骤ⅱ,微球聚合物芯层溶液:将α-亚硝基-β-萘酚和4-8份表面活性剂混合;步骤ⅲ,使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液得到α-亚硝基-β-萘酚磁性纳米微球;将硫酸汞磁性纳米微球,硝酸亚汞磁性纳米微球,硫酸镍磁性纳米微球,α-亚硝基-β-萘酚磁性纳米微球按照2-3:2.2-4.4:1.6-2.2:0.8-1.2的体积比混合得到对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂磁性纳米微球。前述的一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂磁性纳米微球的制备方法,微球聚合物壳层基材的具体制备方法为:将明胶溶解在80-90摄氏度的水中搅拌,将酸溶性壳聚糖加入明胶溶液中搅拌,再搅拌加入磁性纳米粒子,最后加入无水乙醇,在温度20-40℃的温度下搅拌溶解,在0.06-0.08mpa的真空度下脱泡,熟化,得到聚合物壳层基材。前述的一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂磁性纳米微球的制备方法,硫酸汞磁性纳米微球,硝酸亚汞磁性纳米微球,硫酸镍磁性纳米微球,α-亚硝基-β-萘酚磁性纳米微球按照2.2:3.6:1.8:1.0的体积比混合得到对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂磁性纳米微球。前述的一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂磁性纳米微球的制备方法,使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液的方法包括:将微球聚合物壳层基材、微球聚合物芯层溶液放入同轴式喷注器内,放置微球聚合物壳层基材的针头内径为1.0-1.2mm,溶液流速为6-10ml/h,放置微球聚合物芯层溶液的针头内径为0.6-1.0mm,溶液流速为1.4-2.6ml/h,喷注电压为18-26kv,喷涂距离为4-8cm;喷注完成后在固化浴中完成固化得到纳米微球。本发明的有益之处在于:本发明将每个试剂都单独用微球聚合物壳层基材进行包裹,能够提高检测试剂稳定性,无需复杂的配制过程,混合酸液后即可检测使用,方便做成便携检测设备,提高尿检的准确率;本发明的微球聚合物壳层基材采用的配方搭配磁性纳米粒子,这样使得搭载各个试剂的微球在使用时能够快速的凝聚在一起,提高溶解速度,提高检测速度。具体实施方式以下结合具体实施例对本发明作具体的介绍。一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂磁性纳米微球,包括:配方包括:明胶26-42份,酸溶性壳聚糖18-34份,磁性纳米粒子0.6-1.2份,无水乙醇60-120份,硫酸汞12-24份,硝酸亚汞56-68份,硫酸镍2-6份,α-亚硝基-β-萘酚1-3份,表面活性剂64-120份。作为一种实施例,酸溶性壳聚糖为对苯二甲醛交联的壳聚糖,表面活性剂为浓度为1%的仲烷基硫酸钠。作为一种实施例,磁性纳米粒子包括:氧化铁纳米粒子,超顺磁氧化铁纳米颗粒;需要说明的是磁性纳米粒子的种类不受限制,都可以应用于本配方。一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂磁性纳米微球的制备方法,包括如下步骤:按照配方准备材料;配方包括:明胶26-42份,酸溶性壳聚糖18-34份,磁性纳米粒子0.6-1.2份,无水乙醇60-120份,硫酸汞12-24份,硝酸亚汞56-68份,硫酸镍2-6份,α-亚硝基-β-萘酚1-3份,表面活性剂64-120份;制作硫酸汞磁性纳米微球:步骤1,微球聚合物壳层基材:将明胶溶解在80-90摄氏度的水中搅拌,将酸溶性壳聚糖加入明胶溶液中搅拌,再搅拌加入磁性纳米粒子,最后加入无水乙醇,在温度20-40℃的温度下搅拌溶解,在0.06-0.08mpa的真空度下脱泡,熟化,得到聚合物壳层基材;步骤2,微球聚合物芯层溶液:将硫酸汞和24-46份表面活性剂混合;步骤3,使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液得到硫酸汞磁性纳米微球;使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液的方法包括:将微球聚合物壳层基材、微球聚合物芯层溶液放入同轴式喷注器内,放置微球聚合物壳层基材的针头内径为1.0-1.2mm,溶液流速为6-10ml/h,放置微球聚合物芯层溶液的针头内径为0.6-1.0mm,溶液流速为1.4-2.6ml/h,喷注电压为18-26kv,喷涂距离为4-8cm;喷注完成后在固化浴中完成固化得到纳米微球;制作硝酸亚汞磁性纳米微球:步骤a,微球聚合物壳层基材:将明胶溶解在80-90摄氏度的水中搅拌,将酸溶性壳聚糖加入明胶溶液中搅拌,再搅拌加入磁性纳米粒子,最后加入无水乙醇,在温度20-40℃的温度下搅拌溶解,在0.06-0.08mpa的真空度下脱泡,熟化,得到聚合物壳层基材;步骤b,微球聚合物芯层溶液:将硝酸亚汞和32-54份表面活性剂;步骤c,使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液得到硝酸亚汞磁性纳米微球;使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液的方法包括:将微球聚合物壳层基材、微球聚合物芯层溶液放入同轴式喷注器内,放置微球聚合物壳层基材的针头内径为1.0-1.2mm,溶液流速为6-10ml/h,放置微球聚合物芯层溶液的针头内径为0.6-1.0mm,溶液流速为1.4-2.6ml/h,喷注电压为18-26kv,喷涂距离为4-8cm;喷注完成后在固化浴中完成固化得到纳米微球;制作硫酸镍磁性纳米微球:步骤a,将明胶溶解在80-90摄氏度的水中搅拌,将酸溶性壳聚糖加入明胶溶液中搅拌,再搅拌加入磁性纳米粒子,最后加入无水乙醇,在温度20-40℃的温度下搅拌溶解,在0.06-0.08mpa的真空度下脱泡,熟化,得到聚合物壳层基材;步骤b,微球聚合物芯层溶液:将硫酸镍和4-12份表面活性剂混合;步骤c,使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液得到硫酸镍磁性纳米微球;使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液的方法包括:将微球聚合物壳层基材、微球聚合物芯层溶液放入同轴式喷注器内,放置微球聚合物壳层基材的针头内径为1.0-1.2mm,溶液流速为6-10ml/h,放置微球聚合物芯层溶液的针头内径为0.6-1.0mm,溶液流速为1.4-2.6ml/h,喷注电压为18-26kv,喷涂距离为4-8cm;喷注完成后在固化浴中完成固化得到纳米微球;制作α-亚硝基-β-萘酚磁性纳米微球:步骤ⅰ,微球聚合物壳层基材:将明胶溶解在80-90摄氏度的水中搅拌,将酸溶性壳聚糖加入明胶溶液中搅拌,再搅拌加入磁性纳米粒子,最后加入无水乙醇,在温度20-40℃的温度下搅拌溶解,在0.06-0.08mpa的真空度下脱泡,熟化,得到聚合物壳层基材;步骤ⅱ,微球聚合物芯层溶液:将α-亚硝基-β-萘酚和4-8份表面活性剂混合;步骤ⅲ,使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液得到α-亚硝基-β-萘酚磁性纳米微球;使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液的方法包括:将微球聚合物壳层基材、微球聚合物芯层溶液放入同轴式喷注器内,放置微球聚合物壳层基材的针头内径为1.0-1.2mm,溶液流速为6-10ml/h,放置微球聚合物芯层溶液的针头内径为0.6-1.0mm,溶液流速为1.4-2.6ml/h,喷注电压为18-26kv,喷涂距离为4-8cm;喷注完成后在固化浴中完成固化得到纳米微球;将硫酸汞磁性纳米微球,硝酸亚汞磁性纳米微球,硫酸镍磁性纳米微球,α-亚硝基-β-萘酚磁性纳米微球按照2-3:2.2-4.4:1.6-2.2:0.8-1.2的体积比混合得到对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂磁性纳米微球。作为一种优选,硫酸汞磁性纳米微球,硝酸亚汞磁性纳米微球,硫酸镍磁性纳米微球,α-亚硝基-β-萘酚磁性纳米微球按照2.2:3.6:1.8:1.0的体积比混合得到对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂磁性纳米微球。使用同轴式喷注器将微球聚合物壳层基材包裹微球聚合物芯层溶液的方法包括:将微球聚合物壳层基材、微球聚合物芯层溶液放入同轴式喷注器内,放置微球聚合物壳层基材的针头内径为1.0-1.2mm,溶液流速为6-10ml/h,放置微球聚合物芯层溶液的针头内径为0.6-1.0mm,溶液流速为1.4-2.6ml/h,喷注电压为18-26kv,喷涂距离为4-8cm;喷注完成后在固化浴中完成固化得到纳米微球。以下进行实验验证本发明的检测试剂经过苛刻的环境也能维持试剂的稳定性,提高存放的方便性,给做便携设备提供条件。明胶26-42份,酸溶性壳聚糖18-34份,磁性纳米粒子0.6-1.2份,无水乙醇60-120份,硫酸汞12-24份,硝酸亚汞56-68份,硫酸镍2-6份,α-亚硝基-β-萘酚1-3份,表面活性剂64-120份。作为一种实施例,酸溶性壳聚糖为对苯二甲醛交联的壳聚糖,表面活性剂为浓度为1%的仲烷基硫酸钠。作为一种实施例,磁性纳米粒子包括:氧化铁纳米粒子将硫酸汞和24-46份表面活性剂混合;将硝酸亚汞和32-54份表面活性剂;将硫酸镍和4-12份表面活性剂混合;将硫酸镍和4-12份表面活性剂混合;将α-亚硝基-β-萘酚和4-8份表面活性剂混合实施例1:明胶26g,酸溶性壳聚糖18g,氧化铁纳米粒子0.6g,无水乙醇60g,硫酸汞12g,搭配的浓度为1%的仲烷基硫酸钠24g,硝酸亚汞56g,搭配的浓度为1%的仲烷基硫酸钠32g,硫酸镍2g,搭配的浓度为1%的仲烷基硫酸钠4g,α-亚硝基-β-萘酚1g,搭配的浓度为1%的仲烷基硫酸钠4g。实施例2:明胶34g,酸溶性壳聚糖26g,氧化铁纳米粒子0.8g,无水乙醇90g,硫酸汞18g,搭配的浓度为1%的仲烷基硫酸钠38g,硝酸亚汞62g,搭配的浓度为1%的仲烷基硫酸钠48g,硫酸镍4g,搭配的浓度为1%的仲烷基硫酸钠8g,α-亚硝基-β-萘酚2g,搭配的浓度为1%的仲烷基硫酸钠6g。实施例3:明胶42g,酸溶性壳聚糖34g,氧化铁纳米粒子1.2g,无水乙醇120g,硫酸汞24g,搭配的浓度为1%的仲烷基硫酸钠46g,硝酸亚汞68g,搭配的浓度为1%的仲烷基硫酸钠54g,硫酸镍6g,搭配的浓度为1%的仲烷基硫酸钠12g,α-亚硝基-β-萘酚3g,搭配的浓度为1%的仲烷基硫酸钠8g。对比实施例配方包括:硫酸汞溶液配制:将硫酸汞18g加入到12mol/l的硫酸溶液中搅拌溶解后,再用12mol/l的硫酸溶液稀释至100ml得到无色透明的液体待用;硝酸亚汞溶液配制:将硝酸亚汞62g加入到24mol/l的硝酸溶液中,溶解后用24mol/l硝酸溶液稀释至100ml,得到绿色液体,放置待溶液绿色褪去后待用;硫酸镍溶液配制:将硫酸镍4g溶解到蒸馏水中,然后用蒸馏水稀释至100ml,得到蓝绿色液体,待用;α-亚硝基-β-萘酚溶液配制:将α-亚硝基-β-萘酚2g溶解于100ml、12mol/l的硝酸溶液中,待用;混合:将硫酸汞溶液、硝酸亚汞、硫酸镍溶液、α-亚硝基-β-萘酚溶液按体积比1.4:1.6:0.3:0.2进行混合后得到对比样品1。试剂能与尿中酪氨酸、色氨酸及其衍生物及含有此类氨基酸残基的变性蛋白发生具特异性颜色的沉淀反应,根据比色板辅助判断结果。将实施例1-3按照如上的方法制备得到的硫酸汞磁性纳米微球,硝酸亚汞磁性纳米微球,硫酸镍磁性纳米微球,α-亚硝基-β-萘酚纳米微球按照2.2:3.6:1.8:1.0的体积比混合得到对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂磁性纳米微球。实验一:环境耐受实验:取6g样品1-3放入密封试管内经过30天模拟日晒实验,摇晃实验;取对比样品1放入密封试管内经过相同的30天模拟日晒实验,摇晃实验;30天后,将6g实施例2样品标为样品4;取用对比实施例的配方配制的作为对比样品2;样品1-4用硫酸、硝酸混合溶液溶解待用;将两滴络氨酸溶液分别滴入样品1-4和对比样品1-2中观察变色情况;变色速度变色明显程度试验样品1快明显试验样品2快明显试验样品3快明显试验样品4快明显对比样品1慢不明显对比样品2快明显由样品1-3和样品4对比可知:本发明采用的方式经过苛刻的环境后依然能够保持检测活性,无论是变色速度还是变色的明显程度都很好,对比对比样品1和对比样品2可知,新配置的对比样品的灵敏度很好,而对比样品1经过长时间苛刻的环境灵敏程度已经降低;本发明的产品具有环境耐受能力,经过长时间的苛刻环境也能保持稳定性和灵敏性。本发明的微球聚合物壳层基材采用的配方搭配磁性纳米粒子,这样使得搭载各个试剂的微球在使用时能够快速的凝聚在一起,提高了溶解速度,不会影响检测速度。实验二:精确度实验;取合作医院的患者尿液和健康者尿液;取实验一的试验样品1-4和对比样品1-2分别检测患者尿液和健康者尿液,实验结果如下:由以上结果可知,只有对比样品1的结果与医院检查结果不一致,所以本发明的方法在经过长时间苛刻的环境后仍然能够保持检测的精确度,能够满足制作便携式检测设备的条件。本发明提供一种对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂磁性纳米微球及其制备方法,能够提高检测试剂稳定性,无需复杂的配制过程,混合酸液后即可检测使用,方便做成便携检测设备,提高尿检的准确率。以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。本行业的技术人员应该了解,上述实施例不以任何形式限制本发明,凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案,均落在本发明的保护范围内。当前第1页12
当前第1页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1