[0025] 制备巧光微粒标记兔IgG ;
[0026] 将18-22mg的巧光素或480-520mg巧光胶乳标记物与兔IgG混合后，置于4°C，调 节体系抑6. 8-9. 0, 一边揽拌一边缓慢加入0. 2-1 %戊二醒；反应2-5小时，用Se地adex G25 凝胶柱将抗体巧光标记物进行纯化，去除杂质，用巧光保护剂复溶；经冻干保存备用；
[0027] 将上述制备好的巧光微粒标记的M化抗体和巧光微粒标记兔IgG混合，W使两种 抗体浓度分别都为化g/ml，按500ul/30cm均匀铺涂在条形的玻璃纤维上，再将条形的玻璃 纤维截断制成所述巧光结合垫。
[002引本发明的巧光定量检测MBL的免疫层析试剂盒，其中所述巧光结合垫还可采用W 下方法制成：
[0029] 制备巧光微粒标记的M化抗体；
[0030] 用抑8. 0-PH9. 6碳酸盐缓冲液溶解45mg M化单克隆抗体，用抑8. 0-PH9. 6碳酸盐 缓冲液溶解或悬浮18-22mg巧光素或480-520mg巧光微球；边揽拌边将上述溶解的巧光素 或巧光微球渐渐加入抗体溶液中，加完后，继续避光揽拌10-14小时，结合完毕后，装入透 析袋中，用上述碳酸缓冲盐水透析过夜，用巧光保护剂复溶，经冻干保存备用；
[0031] 制备巧光微粒标记兔IgG ;
[0032] 用抑8. 0-pH9. 6碳酸盐缓冲液溶解45mg兔IgG，用抑8. 0-pH9. 6碳酸盐缓冲液溶 解或悬浮18-22mg巧光素或480-520mg巧光微球；边揽拌边将上述溶解的巧光素或巧光微 球渐渐加入抗体溶液中，加完后，继续避光揽拌10-14小时，结合完毕后，装入透析袋中，用 上述碳酸缓冲盐水透析过夜，用巧光保护剂复溶，经冻干保存备用；
[0033] 将上述制备好的巧光微粒标记的M化抗体和巧光微粒标记兔IgG混合，W使两种 抗体浓度分别都为化g/ml，按500ul/30cm均匀铺涂在条形的玻璃纤维上，再将条形的玻璃 纤维截断制成所述巧光结合垫。
[0034] 本发明的用作包被的人甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，于2014 年11月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、，地址；北京市朝阳区 北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No. 10091，建议的分类命名为；产生用作包被抗甘露 糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株；本发明的用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单 克隆抗体的杂交瘤细胞株，于2014年11月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普 通微生物中屯、，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No. 10092,建议 的分类命名为：产生用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
[0035] 本发明的巧光定量检测MBL的免疫层析试剂盒的检测原理是双抗体夹心法，巧光 素或巧光微球与M化单克隆抗体共价结合。将检测样本（血清或血浆）用样本稀释液稀释 100倍后加入加样孔中，其巧光标记MBL单克隆抗体可与血液中的M化结合，形成复合物； 向上层析与包被膜上检测区T的M化单克隆抗体形成抗体-抗原-抗体复合物。当含MBL 样本滴加至试纸条的样品垫上，向上层析与巧光标记垫上的巧光标记M化单抗结合，混合 液继续沿着包被膜向前移动，样本中所含M化量越多，可与M化抗体结合的巧光标记抗体就 越多，从而使测得巧光检出值升高。结果判断；a.当检测线T和质控线C在450nm激发光 照射下同时显现绿色巧光印迹，表示检测结果为阳性；b.当检测线T在450皿激发光照射 下不显现绿色巧光印迹，只有质控线C在激发光下同时显现绿色巧光印迹，表示检测结果 为阴性；C.质控线C在激发光下不显现绿色巧光印迹时，该试纸条不能用。当通过巧光检 测仪扫描巧光信号强度，可检测出样本中MBL含量。
[0036] 本发明的巧光定量检测MBL的免疫层析试剂盒的MBL巧光免疫层析试纸条与GC/ MS、HPLC等色谱仪器W及酶免法检测M化相比，具有简单操作一步完成、适合不同数量样本 检测、快速，15分钟左右即可有结果、灵敏度更高等优点。
[0037] 本发明的巧光定量检测MBL的免疫层析试剂盒，采用巧光标记液冻干处理均匀铺 涂在进口玻璃纤维上的方法，与其他干燥工艺相比，其批量生产的精密度和准确度达到最 好效果，相较于巧光标记物液体保存稳定性更好，操作简便。在巧光定量检测仪上可W达到 仅10秒就能对M化进行灵敏的定量测定，更快更精确的测定样品中所含M化量；M化层析 试纸条具有良好的准确度，回收率为90 % -110 %，定量偏差小，定量偏差在20 % W内，高灵 敏度，需要的样品量少，仅为lOOul，操作非常简便，检测结果极其准确可靠，具有突出的实 质性特点和显著的进步。
[003引下面结合附图对本发明的巧光定量检测MBL的免疫层析试剂盒作进一步详细说 明。
【附图说明】
[0039] 图1是本发明的巧光定量检测M化层析试剂盒中巧光试纸条的结构示意图的立体 图；
[0040] 图2是图1俯视图；
[0041] 图3是本发明的巧光定量检测M化层析试剂盒中用于放置试纸条检测卡的示意 图。
【具体实施方式】
[0042] 本发明的巧光定量检测MBL的免疫层析试剂盒，包括巧光试纸条和样本稀释液， 如图1和图2所示，巧光试纸条包括底板7,底板7的上表面自一端至另一端依次粘贴有样 品垫1、巧光结合垫2、包被膜3和吸水纸6,样品垫1的里端和巧光结合垫2的一端搭接相 连，巧光结合垫2的另一端与所述包被膜3的一端搭接相连，包被膜3的另一端与所述吸水 纸6搭接相连，所述包被膜3包括检测区4和质控区5 ;所述检测区4包被有抗M化单克隆 抗体，所述质控区5包被羊抗兔IgG ;所述巧光结合垫2中含有巧光标记的M化单克隆抗体 和巧光标记的兔IgG。
[0043] 专利申请号为201310390393. 7、发明名称为"抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体 及试剂盒"的中国发明专利申请，公开了一种杂交瘤细胞株，其包括用作包被抗甘露糖结合 凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏号为CGMCC No. 7592,还包括用作标记抗甘露 糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏号为CGMCC No. 7591，用作包被抗甘露 糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株与用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗 体的杂交瘤细胞株具有不同的结合表位。
[0044] 上述抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体，包括用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单 克隆抗体的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体，还包括用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克 隆抗体的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体。
[0045] 上述甘露糖结合凝集素定量检测试剂盒，包括用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单 克隆抗体的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体，还包括用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克 隆抗体的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体。
[0046] 本发明的巧光定量检测M化的免疫层析试剂盒中的所述检测区4包被的抗M化单 克隆抗体，可W利用专利申请号为201310390393. 7、发明名称为"抗甘露糖结合凝聚素的单 克隆抗体及试剂盒"公开的保藏号为CGMCC No. 7592、用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克 隆抗体的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体。
[0047] 本发明的巧光定量检测M化的免疫层析试剂盒中的所述巧光结合垫2中含有巧光 标记的M化单克隆抗体，可W利用专利申请号为201310390393. 7、发明名称为"抗甘露糖结 合凝聚素的单克隆抗体及试剂盒"公开的保藏号为CGMCC No. 7591、用作标记抗甘露糖结合 凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体。
[0048] 使用保藏号为CGMCC No. 7592杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体W及保藏号为 CGMCC No. 7591的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体的巧光定量检测MBL的免疫层析试剂 盒，完全可W满足本发明的检测要求，但其灵敏度通常只能达到1.化g/ml的水平，灵敏度 不如本发明重新保藏的杂交瘤细胞株。
[0049] 作为本发明的改进，上述检测区4包被的抗M化单克隆抗体由用作包被抗甘露糖 结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株产生，用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗 体的杂交瘤细胞株的保藏号为CGMCC No. 10091，所述巧光结合垫2中含有巧光标记的MBL 单克隆抗体由用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株产生，用作标记 抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株的保藏号为CGMCC No. 10092,用作包被 抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株与用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单 克隆抗体的杂交瘤细胞株具有不同的结合表位。利用夹屯、法的原理检测标本。
[0化日]使用上述本发明新的保藏号为CGMCC No. 10091杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体 W及新的保藏号为CGMCC No. 10092的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体的巧光定量检测 M化的免疫层析试剂盒，其灵敏度可达0.化g/ml。
[0化1] 作为本发明的进一步改进，上述质控区5包被羊抗兔IgG的包被液浓度为 0. 2-4mg/ml，用量为30yl/30cm;所述检测区4的MBL单克隆抗体的包被液浓度为 0. 2-4mg/ml，用量为 30 y 1/30畑1。
[0化2] 作为本发明的进一步改进，上述质控区5包被羊抗兔IgG的包被液浓度优化为 0. 5-1. 5mg/ml，所述检测区4的MBL单克隆抗体的包被液浓度优化为l-2mg/ml。
[0化3] 作为本发明的进一步改进，上述巧光结合垫2包括玻璃纤维，巧光结合垫2由巧光 标记的M化单克隆抗体和巧光标记的兔IgG混合后喷涂于玻璃纤维上经冻干制成，玻璃纤 维上标记物中的巧光标记的MBL单克隆抗体的浓度为2-5 y g/ml，巧光标记的兔IgG的浓度 为 2-5 y g/ml。
[0化