用于丙型肝炎酶联免疫诊断的无害化阳性对照的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及酶联免疫试剂盒，具体地说，设及一种用于丙型肝炎酶联免疫诊断的 无害化阳性对照及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0002] 丙型病毒性肝炎化巧atitis C)是一种主要经血液传播的疾病，由丙型肝炎病毒 化epatitis C virus, HCV)感染引起，呈全球性流行，感染率约3%。我国一般人群感染率 为3. 2%，长江W北为3. 6%，中南和东北地区分别高达3. 8%和4. 6%。
[0003] 丙型肝炎的危害在于HCV感染后自发痊愈病例极少，慢性化率可高达60 %? 85%。其后果是导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，容易转化为肝硬化、肝细胞癌（肥C)等终 末期肝病，预后差。我国十五科技攻关的资料表明，感染10年和20年W上的肝硬化发生率 分别为9. 20%和15. 29%。世界卫生组织（WHO)对6个国家的11项研究资料表明，感染20 年后平均肝硬化发生率为10%?15%，最高可达55%，而肥C的发生率最高可达23%。由 于其流行的广泛性和致病后果，与己肝一起，被专家称为比艾滋病还要严重的疾病。
[0004] HCV属于黄病毒科（flaviviridae)，其基因组为单股正链RNA，易变异，可分为6个 基因型及11种W上不同亚型。HCV进入人体后，与宿主染色体整合，宿主可W重复感染不同 的基因型或亚型。HCV目前尚不能用常规方法培养，也没有疫苗和特效药物，控制其流行W 预防为主。
[0005] 鉴于丙型肝炎对人民健康和生命危害极大，已成为严重的社会和公共卫生问题， 我国卫生部和中华医学会于2004年3月推出了《丙型肝炎防治指南》，几乎同时，美国也发 布了《丙型肝炎诊断处理和治疗指南》。
[0006] 《指南》指出目前国内外广泛使用的主流试剂是第=代抗-HCV酶联免疫检测试剂， 其基本原理为采用基因工程重组表达的丙肝病毒特异性抗原（Core、E2、NS3、NS4、NS5)包 被酶联板，辣根过氧化物酶（HR巧标记的鼠抗人IgG (抗r链）单克隆抗体为示踪物，TMB显 色系统，间接化ISA方法检测人血清或血浆中的丙肝病毒IgG抗体。适用于辅助丙型肝炎 和筛查丙型肝炎病毒感染者。具有灵敏度高，特异性强，操作简便，加样变色，反应快速，反 应模式好、重复性好等优点。试剂盒中阳性对照为人HCV阳性血清，材料来源受限，且虽已 进行灭活处理仍有潜在的生物危害风险，需按传染性污染物处理。
【发明内容】
[0007] 为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种用于丙型肝炎酶联免 疫诊断的无害化阳性对照及其制备方法与应用。解决阳性对照材料的来源受限并避免使用 人血清潜在的风险。
[000引为了实现本发明目的，本发明首先提供一种用于丙型肝炎酶联免疫诊断的无害化 阳性对照，所述阳性对照由鼠抗HCV抗体和抗鼠IgG抗体按2:1-1:32的比例混合制成，优 选 1:4。
[0009] 所述鼠抗HCV抗体，为可与HCV病毒发生免疫学反应的鼠源IgG抗体，该抗体可w 是基因工程表达、化学修饰、通过免疫小鼠、融合后细胞培养等多种途径获得。
[0010] 所述抗鼠IgG抗体，为可与鼠源IgG抗体发生免疫学反应的抗体，该抗体可W是基 因工程表达、化学修饰、通过免疫小鼠、融合后细胞培养等多种途径获得。
[0011] 进一步地，所述鼠抗肥V抗体和抗鼠IgG抗体利用免疫学方法制备。
[0012] 更进一步地，所述阳性对照的制备方法包括如下步骤：
[0013] (1)制备鼠抗HCV抗体和抗鼠IgG抗体；
[0014] 似阳性对照的获得；取鼠抗肥V抗体和抗鼠IgG抗体混合并加入小牛血清和硫 柳隶后用生理盐水稀释作为阳性对照。
[0015] 作为优选，所述步骤（2)取鼠抗肥V抗体Img和抗鼠IgG抗体4mg混合并加入50ml 小牛血清和10ml 10%的硫柳隶后用生理盐水稀释至1000ml作为阳性对照。
[0016] 所述鼠抗HCV抗体可为单抗或多抗，在本发明的【具体实施方式】中，优选所述鼠抗 HCV抗体为鼠抗HCV单抗。由于单抗与多抗相比，批间差小，更有利于质控，制备的试剂盒更 稳定。
[0017] 所述抗鼠IgG抗体可为单抗或多抗，在本发明的【具体实施方式】中，优选所述抗鼠 IgG抗体为兔抗鼠IgG多抗。
[0018] 本发明还提供了含有前述阳性对照的丙型肝炎间接法酶免诊断试剂盒。
[0019] 进一步地，所述试剂盒还包括：阴性对照、包被板、酶标二抗、样品稀释液、洗液等 常规试剂盒的组成成分。
[0020] 作为优选，试剂盒组成：
[0021]
【主权项】
1. 一种用于丙型肝炎酶联免疫诊断的无害化阳性对照，其特征在于，所述阳性对照由 鼠抗HCV抗体和抗鼠 IgG抗体按2:1-1:32的比例混合制成，优选1:4。
2. 根据权利要求1所述的阳性对照，其特征在于，所述鼠抗HCV抗体和抗鼠 IgG抗体利 用免疫学方法制备。
3. 根据权利要求1或2所述的阳性对照，其特征在于，所述阳性对照的制备方法包括如 下步骤： (1) 制备鼠抗HCV抗体和抗鼠 IgG抗体； (2) 阳性对照的获得：取鼠抗HCV抗体和抗鼠 IgG抗体混合并加入小牛血清和硫柳汞 后用生理盐水稀释作为阳性对照。
4. 根据权利要求3所述的阳性对照，其特征在于，所述步骤（2)取鼠抗HCV抗体Img和 抗鼠 IgG抗体4mg混合并加入50ml小牛血清和IOml 10%的硫柳采后用生理盐水稀释至 IOOOml作为阳性对照。
5. 根据权利要求3所述的阳性对照，其特征在于，所述鼠抗HCV抗体为鼠抗HCV单抗。
6. 根据权利要求3所述的阳性对照，其特征在于，所述抗鼠 IgG抗体为兔抗鼠 IgG多 抗。
7. 含有权利要求1-6任一项所述阳性对照的丙型肝炎间接法酶免诊断试剂盒。
8. 根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：阴性对照、包被板、 酶标二抗、样品稀释液和洗液。
9. 根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照的浓度为0. 5mg/ml。
10. 权利要求1-6任一项所述阳性对照在制备丙型肝炎酶联免疫诊断试剂盒中的应 用。
【专利摘要】本发明涉及酶联免疫试剂盒，具体提供了一种用于丙型肝炎酶联免疫诊断的无害化阳性对照，所述阳性对照由鼠抗HCV抗体和抗鼠IgG抗体按2:1-1:32比例混合制成。本发明利用免疫学方法解决丙型肝炎间接法酶免诊断试剂阳性对照材料的来源并避免使用人血清潜在的风险。
【IPC分类】G01N33-577
【公开号】CN104569403
【申请号】CN201410779669
【发明人】李银生, 李勇莉, 杨杰, 周薇, 张东芳, 胡亚男, 刘辉
【申请人】新乡医学院
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月15日