。
[0023] 所述sulfo-LC-SPDP交联法包括以下步骤： 将乙酰胆碱酯酶的磷酸盐缓冲液、sulfo-LC-SPDP水溶液和二硫苏糖醇的乙酸钠溶液 按体积比1 :〇. 5~1. 5 :0. 5~1. 5混合均匀，并滴到玻璃基底上，4°C下静置lh，再用磷酸盐缓 冲液冲洗2~4次，室温晾干或吹干，其中二硫苏糖醇的乙酸钠缓冲液的PH值为4. 5,其中的 二硫苏糖醇的摩尔浓度为1~50禮，乙酸钠的摩尔浓度为0. 1M，sulfo-LC-SPDP水溶液的摩 尔浓度为5~50mM。
[0024] 乙酰胆碱酯酶的磷酸盐缓冲液、sulfo-LC-SPDP水溶液和二硫苏糖醇的乙酸钠溶 液优化体积比为1 :1 :1。
[0025] 所述乙酰胆碱酯酶浓度为50 ~500u/ml，u是活性单位。
[0026] 所述步骤（2)中有机磷样品为挥发性有机磷气体如神经毒气沙林，塔崩，梭曼，维 埃克斯等，或为有机磷液体，如对硫磷，马拉硫磷，乐果，敌百虫，敌敌畏等。
[0027] 所述步骤步骤（5)中的基准LSPR图谱通过以下步骤获得： (1) 制备酶传感芯片：清洁玻璃基底，将乙酰胆碱酯酶固定在玻璃基底上成酶传感芯 片； (2) 将酶传感芯片室温下浸入到硫代乙酰胆碱和氯金酸混合液中反应，反应时间为0. 5 ~2. 5h，在传感芯片上获得金纳米颗粒。
[0028] (3 )以可见光或红外光照射步骤（3 )中处理后的传感芯片，再用光谱测试仪探测透 射光，得到基准LSPR图谱。
[0029] 步骤（3)中所述的金纳米颗粒是指HAuCl4被硫代胆碱（TCh)还原所获得的金纳米 颗粒，伴随生成氯化硫代胆碱（TCl)，具体反应方程式为：
【主权项】
1. 一种基于局域表面等离子体共振技术的有机磷检测方法，其特征在于，包括以下步 骤： (1) 制备酶传感芯片：清洁玻璃基底，将乙酰胆碱酯酶固定在玻璃基底上成酶传感芯 片； (2) 将有机磷样品滴涂到酶传感芯片上； (3) 将步骤（2)中处理后的传感芯片室温下浸入到硫代乙酰胆碱和氯金酸混合液中反 应，反应时间为〇. 5 ~2. 5h，在传感芯片上获得金纳米颗粒； (4) 以可见光或红外光照射步骤（3)中处理后的传感芯片，再用光谱测试仪探测透射 光，得到测量LSPR图谱； (5) 将LSPR图谱与基准LSPR图谱进行比较，根据吸收峰是否有偏移，确定所述有机磷 样品中是否含有有机磷，并根据吸收峰的位移量，确定有机磷的浓度，当吸收峰有偏移确定 样品中含有有机憐，偏移量越大，有机憐浓度越_。
2. 根据权利要求1所述的基于局域表面等离子体共振技术的有机磷检测方法，其特 征在于：所述步骤（1)中的玻璃基底为K9玻璃。
3. 根据权利要求1所述的基于局域表面等离子体共振技术的有机磷检测方法，其 特征在于：所述步骤（2)硫代乙酰胆碱和氯金酸混合液中含有摩尔浓度的硫代乙酰胆碱 0. 5~20mM，质量百分比的氯金酸0. 01~0. 5%，其余为磷酸盐缓冲液。
4. 根据权利要求1所述的基于局域表面等离子体共振技术的有机磷检测方法，其特 征在于：所述步骤（1)中的固定方法为吸附法、包埋法、共价键结合法或交联法。
5. 根据权利要求4所述的基于局域表面等离子体共振技术的有机磷检测方法，其特征 在于：所述吸附法包括以下步骤： 将乙酰胆碱酯酶的磷酸盐缓冲液滴在玻璃基底上，4°C下静置lh ;再用磷酸盐缓冲液 冲洗2~4次，室温晾干或吹干。
6. 根据权利要求4所述的基于局域表面等离子体共振技术的有机磷检测方法，其特征 在于：所述交联法为戊二醛交联法或sulfo-LC-SPDP交联法。
7. 根据权利要求6所述的基于局域表面等离子体共振技术的有机磷检测方法，其特征 在于：所述戊二醛交联法包括以下步骤： 将乙酰胆碱酯酶、质量百分比的戊二醛0. 1~1〇%和牛血清蛋白0. 1~1〇%的混合溶液滴 到玻璃基底上，4°C下静置8~12h ;再用质量百分比的甘氨酸1%的磷酸盐缓冲液冲洗2~4 次，室温晾干或吹干。
8. 根据权利要求6所述的基于局域表面等离子体共振技术的有机磷检测方法，其特征 在于：所述sulfo-LC-SPDP交联法包括以下步骤 ： 将乙酰胆碱酯酶的磷酸盐缓冲液、sulfo-LC-SPDP水溶液和二硫苏糖醇的乙酸钠溶液 按体积比1:0. 5~1. 5:0. 5~1. 5混合均匀，并滴到玻璃基底上，4°C下静置lh，再用磷酸盐缓 冲液冲洗2~4次，室温晾干或吹干，其中二硫苏糖醇的乙酸钠缓冲液的PH值为4. 5,其中的 二硫苏糖醇的摩尔浓度为1~50禮，乙酸钠的摩尔浓度为0. 1M，sulfo-LC-SPDP水溶液的摩 尔浓度为5~50mM。
9. 根据权利要求5或6-8中任一项所述的基于局域表面等离子体共振技术的有机磷检 测方法，其特征在于：所述乙酰胆碱酯酶浓度为50~500u/ml，u是活性单位。
10.根据权利要求1所述的基于局域表面等离子体共振技术的有机磷检测方法，其特 征在于：所述步骤步骤（5)中的基准LSPR图谱通过以下步骤获得： (1) 制备酶传感芯片：清洁玻璃基底，将乙酰胆碱酯酶固定在玻璃基底上成酶传感芯 片； (2) 将酶传感芯片室温下浸入到硫代乙酰胆碱和氯金酸混合液中反应，反应时间为0. 5 ~2. 5h，在传感芯片上获得金纳米颗粒； (3) 以可见光或红外光照射步骤（3)中处理后的传感芯片，再用光谱测试仪探测透射 光，得到基准LSPR图谱。
【专利摘要】本发明涉及生物化学检测领域，特别涉及一种基于局域表面等离体共振的有机磷检测方法。本发明中，通过将有机磷样品与固定化了乙酰胆碱酯酶的传感芯片充分接触，在传感芯片表面形成有机磷抑制酶膜；将上述含有有机磷抑制酶膜的传感芯片浸入硫代乙酰胆碱和氯金酸的混合液进行充分反应，在传感芯片表面形成金纳米颗粒；以可见光或红外光照射上述含有金纳米颗粒的传感芯片，测量透射光的消光光谱，获得LSPR图谱；将LSPR图谱与基准LSPR图谱进行比较，根据吸收峰是否偏移，确定有机磷样品中是否含有有机磷；根据吸收峰的位移量，确定有机磷的浓度。本发明在固定乙酰胆碱酯酶膜之前无需制作金属纳米颗粒，简化检测过程，实现低成本。
【IPC分类】G01N21-552
【公开号】CN104677863
【申请号】CN201510100740
【发明人】马文英, 姚尧, 魏耀华, 唐雨竹, 王海时
【申请人】成都信息工程学院
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2015年3月6日