条件下，分别对不同浓度的S-和R-布洛芬混合溶液进行检测。混 合溶液中一定浓度的S-布洛芬使纳米金-s-适配体探针粒子发生团聚，纳米金溶液的颜色 有红色变为蓝色；混合液中的R-布洛芬不会对手性识别产生干扰，纳米金溶液颜色变化趋 势基本同无R-布洛芬溶液存在情况。在加入不同浓度的S-布洛芬时，纳米金的吸光度比 值（A650/A520)成梯度变化，在加入不同浓度的R-布洛芬时，纳米金的吸光度比值（A650/ A520)值与之前无R-布洛芬干扰物存在时基本一致。建立紫外吸收峰强度与手性布洛芬 浓度之间的线性关系，确定S-布洛芬快速检测的线性回归方程为：y= 0. 0069X+0. 4504，R2 =0.9007。
[0054] (4)以S-布洛芬适配体为S-布洛芬的识别探针，在2mL离心管中加入200yL上述 的金纳米颗粒溶液，100yL上述的S-布洛芬适配体溶液，10yL1M氯化钠溶液，50yL浓度 为100ymol/L的S-布洛芬溶液，用超纯水定容至500yL，得到待测液，常温下反应30min 后，通过紫外分光光度计检则检测体系在650nm和520nm处的吸光值A650和A520,根据标 准曲线计算待测样本中R-布洛芬的浓度为9. 483ymol/L。
[0055] 实施例4以R-布洛芬适配体探针复合物分别对S、R_布洛芬混合物进行定性定量 手性识别
[0056] (1):制备金纳米颗粒溶液：具体步骤与实施例1相同。
[0057] (2):制备R-布洛芬适配体，具体步骤与实施例2相同。
[0058] (3)以R-布洛芬适配体为R-布洛芬的识别探针，在2mL离心管中加入200yL上述 的金纳米颗粒溶液，100yL上述的R-布洛芬适配体溶液，10yL1M氯化钠溶液，分别加入 0、20、40、60、80、100、120yL浓度为 100ymol/L的R-布洛芬溶液并对应加入 120、100、80、 60、40、20、0yL浓度为100ymol/L的的S-布洛芬溶液成混合液，用超纯水定容至500yL， 常温下反应30min后，在190-800nm波长范围内用UV-vis扫描，根据金纳米粒子聚沉引起 其溶液变色程度的不同，通过紫外分光光度计检则检测体系在650nm和520nm处的吸光值 A650和A520,并以布洛芬浓度为横坐标，A640/A520为纵坐标得到标准曲线。
[0059] 在优化的实验条件下，分别对不同浓度的S-和R-布洛芬混合溶液进行检测。混 合溶液中一定浓度的R-布洛芬使纳米金-R-适配体探针粒子发生团聚，纳米金溶液的颜色 有红色变为蓝色；混合液中的S-布洛芬不会对手性识别产生干扰，纳米金溶液颜色变化趋 势基本同无S-布洛芬溶液存在情况。纳米金的吸光度比值（A650/A520)变化趋势图中可 以看到，在加入不同浓度的R-布洛芬时，纳米金的吸光度比值（A650/A520)成梯度变化，在 加入不同浓度的S-布洛芬时，纳米金的吸光度比值（A650/A520)值与之前无S-布洛芬干 扰物存在时基本一致。如图3所示，建立紫外吸收峰强度与手性布洛芬浓度之间的线性关 系，确定S-布洛芬快速检测的线性回归方程为：y= 0. 0074x+0. 164,R2= 0. 9823。
[0060] (4)以R-布洛芬适配体为R-布洛芬的识别探针，在2mL离心管中加入200yL上 述的金纳米颗粒溶液，100yL上述的R-布洛芬适配体溶液，10yL1M氯化钠溶液，50yL 的浓度为100umol/L的R-布洛芬溶液，用超纯水定容至500yL，得到待测液，常温下反应 30min后，通过紫外分光光度计检则检测体系在650nm和520nm处的吸光值A650和A520， 根据标准曲线计算待测样本R-布洛芬的浓度为9. 475ymol/L。
【主权项】
1. 一种基于核酸适配体修饰纳米金的检测手性化合物的方法，其特征在于，具体步骤 包括： 第一步：制备金纳米颗粒溶液； 第二步：制备S-布洛芬适配体和R-布洛芬适配体中的至少一种，； 第三步：以S-布洛芬适配体为S-布洛芬的识别探针，将金纳米颗粒溶液，S-布洛芬 适配体溶液、氯化钠溶液和S-布洛芬标准溶液混合，定容，得到标准检测液，反应30min后， 根据金纳米粒子聚沉引起其溶液变色程度的不同，通过紫外分光光度计检则检测体系在 650nm和520nm处的吸光值A650和A520,绘制标准曲线；利用该标准曲线检测待测样品中 的S-布洛芬浓度；或者，以R-布洛芬适配体为R-布洛芬的识别探针，将金纳米颗粒溶液， R-布洛芬适配体溶液、氯化钠溶液和R-布洛芬标准溶液混合，定容，得到标准检测液，反应 30min后，根据金纳米粒子聚沉引起其溶液变色程度的不同，通过紫外分光光度计检则检测 体系在650nm和520nm处的吸光值A650和A520,绘制标准曲线，利用该标准曲线检测待测 样品中的R-布洛芬浓度。2. 如权利要求1所述的基于核酸适配体修饰纳米金的检测手性化合物的方法，其特征 在于，所述的S-布洛芬适配体为含有TTGAGCCCT序列、长度为40bp的单链DNA探针，5'端 修饰了巯基；所述的R-布洛芬适配体为含有TTGAGCCCT序列、长度为40bp的单链DNA探 针，5'端修饰了巯基。3. 如权利要求1所述的基于核酸适配体修饰纳米金的检测手性化合物的方法，其特征 在于，所述的S-布洛芬适配体的序列为： 5' -SHACAGCGTGGGCGGTGTCGGATTTTCGTATGGATGGGGATG-3'。4. 如权利要求1所述的基于核酸适配体修饰纳米金的检测手性化合物的方法，其特征 在于，所述的R-布洛芬适配体的序列为： 5'-SHGCGAACGACTTCATAAAATGCTATAAGGTTGCCCTCTGTC-3'。5. 如权利要求1所述的基于核酸适配体修饰纳米金的检测手性化合物的方法，其特 征在于，所述的金纳米颗粒溶液的制备方法为：将0.01 % (w/v)氯金酸水溶液此溶液在 油浴中加热恒温于92±4°C，在搅拌条件下，加入1 %柠檬酸三钠溶液，氯金酸与柠檬酸 三钠的摩尔比为1 : 300-400,继续搅拌，至溶液变成清亮透明的橙红色或紫红色，得到 20-30nmol/L的金纳米颗粒溶液。6. 如权利要求5所述的基于核酸适配体修饰纳米金的检测手性化合物的方法，其特征 在于，所述的金纳米颗粒溶液的制备过程中所用到的玻璃器皿均经过彻底清洁，所述的清 洁步骤包括清洗后，用铬酸洗液或王水充分浸泡24h，后用清水将铬酸洗液冲洗干净，最后 用超纯水冲洗3-4遍，放入烘箱充分干燥，待用。7. 如权利要求1所述的基于核酸适配体修饰纳米金的检测手性化合物的方法，其特 征在于，所述的利用该标准曲线检测待测样品中的S-布洛芬浓度的具体步骤包括将金纳 米颗粒溶液，S-布洛芬适配体溶液、氯化钠溶液和待测样本混合，定容，得到待测液，反应 30min后，通过紫外分光光度计检则检测体系在650nm和520nm处的吸光值A650和A520， 根据标准曲线计算待测样本中S-布洛芬的浓度。8. 如权利要求1所述的基于核酸适配体修饰纳米金的检测手性化合物的方法，其特 征在于，所述的利用该标准曲线检测待测样品中的R-布洛芬浓度的具体步骤包括：将金纳 米颗粒溶液，R-布洛芬适配体溶液、氯化钠溶液和待测样本混合，定容，得到待测液，反应 30min后，通过紫外分光光度计检则检测体系在650nm和520nm处的吸光值A650和A520， 根据标准曲线计算待测样本中R-布洛芬的浓度。9.如权利要求1所述的基于核酸适配体修饰纳米金的检测手性化合物的方法，其特征 在于，所述的待测样品含有S-布洛芬和R-布洛芬中的至少一个。
【专利摘要】本发明提供了一种基于核酸适配体修饰纳米金的检测手性化合物的方法，其特征在于，具体步骤包括：第一步：制备金纳米颗粒溶液；第二步：制备S-布洛芬适配体和R-布洛芬适配体中的至少一种；第三步：以S-布洛芬适配体为S-布洛芬的识别探针，将金纳米颗粒溶液，S-布洛芬适配体溶液、氯化钠溶液和S-布洛芬标准溶液混合，定容，反应30min后，通过紫外分光光度计检则检测体系在650nm和520nm处的吸光值A650和A520，并以布洛芬浓度为横坐标，A640/A520为纵坐标得到标准曲线；利用该标准曲线检测待测样品中的S-布洛芬浓度。本发明可在较短时间内完成并得到定性和定量检测结果，具有特异性高，稳定性好，应用范围广，成本低廉等优点，易于推广手性识别的常规应用。
【IPC分类】G01N21/78, G01N21/33
【公开号】CN104897596
【申请号】CN201510271764
【发明人】平婧, 柳建设, 沈忱思, 刘娜, 娄晓祎, 陈名明, 于海波
【申请人】东华大学
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年5月25日