一种葡萄糖酸的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种检测方法，尤其是涉及一种葡萄糖酸的检测方法。
【背景技术】
[0002] 葡萄糖酸锌在临床上除了用于治疗缺锌引起的生长发育迟缓、营养不良、厌食症 等，还可用来治疗口腔溃疡、胃溃疡、尘肺、普通感冒，提高机体免疫力，促进智力发育等。
[0003] 葡萄糖酸是葡萄糖的醛基经氧化生成的糖酸，是一种有机弱酸，其分子式中含有 五个羟基，是一种五羟基己酸。葡萄糖酸无毒，无腐蚀性，与锌离子通过络合作用形成水溶 性的络合物。
[0004] 中国药典2010年版二部葡萄糖酸锌颗粒质量标准中采用滴定法测定锌离子的含 量。测试方法规定如下：取装量差异项下的内容物，研细，混合均匀，精密称取本品适量（约 相当于葡萄糖酸锌〇. 5g)，加水100ml，微热使溶解，加氨-氯化铵缓冲液（pH= 10. 0) 10ml， 加氟化铵lg与铬黑T指示剂少许，用乙二胺四醋酸二钠液（0.05mol/L)滴定至溶液自紫红 色变为蓝绿色，并持续30秒不褪色。每lml的乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05mol/L)相当 于22. 78mg的C12H22014Zn。该方法用于测定锌元素的含量。虽然锌元素在自然界中是稳 定的，但在特定条件下葡萄糖酸根可能会降解成其他物质，致使锌盐中葡萄糖酸的含量降 低，这不仅会影响到与其络合的锌离子，而且也会对产品的质量带来影响。
[0005][0006] 上述方法中离子交换色谱法受淋洗液水质影响较高，要求用二次去离子的超纯 水才能准确测定。采用梯度淋洗条件复杂，检测时间长。
【发明内容】
[0007]本发明就是为了解决现有检测方法复杂、检测时间长的技术问题，提供一种方法 简单、检测时间短的葡萄糖酸的检测方法。
[0008]本发明所提供的葡萄糖酸的检测方法，其包括如下步骤：（1)系统适应性：称取葡 萄糖酸锌对照品，加水溶解并制成每lml中含葡萄糖酸0. 84mg的溶液，取20ul注入液相色 谱仪，记录色谱图，葡萄糖酸峰与相邻辅料峰的分离度应大于1. 5,连续进样5次，所得葡萄 糖酸峰面积的相对标准偏差不超过2. 0%; (2)取葡萄糖酸锌对照品，精密称定，分别加水溶 解并定量稀释制成每lml中约含葡萄糖酸0. 67mg、0. 84mg和1.Olmg的溶液作为对照品溶 液；取葡萄糖酸锌颗粒，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每lml中约含葡萄糖酸0. 84mg 的溶液，作为供试品溶液；（3)量取所述三种对照品溶液各20y1，分别注入液相色谱仪，记 录色谱图，以对照品溶液浓度的对数值对相应的峰面积的对数值计算线性回归方程，相关 系数不小于〇. 99 ;另取供试品溶液，同法测定，用线性回归方程计算。
[0009]优选地，液相色谱仪的色谱柱为十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，柱长 150mm-250mm，内径为 4. 6mm。
[0010] 优选地，色谱柱为VenusilHILIC。
[0011] 优选地，色谱系统流动相为甲酸水溶液和甲醇的混合溶剂。
[0012] 优选地，甲酸水溶液（浓度单位g/100ml)0. 01%~0? 10%。
[0013] 优选地，甲酸水溶液和甲醇的体积比为（1. 86~1. 22) :1。
[0014] 优选地，甲酸水溶液和甲醇的比为1. 5:1。
[0015] 优选地，色谱系统适用的流速范围在0. 8ml/min和1. 2ml/min之间；适用的柱温范 围在25°C和35°C之间。
[0016] 优选地，甲酸水溶液的浓度（浓度单位g/100ml)为0? 05% ;适用的流速1. 0ml/ min;适用的柱温是30°C。
[0017] 优选地，使用蒸发光检测器，检测条件是漂移管温度：110°C，载气流速：2.0L/ min，增益：8。
[0018] 本发明中，根据蒸发光散射检测器的原理，样品浓度和检测器响应之间呈指数关 系，经对数转换后可呈线性。因线性方程的截距不为零，含量测定宜采用随行标曲法，根据 线性方程，可获得准确的结果。
【附图说明】
[0019] 图1葡萄糖酸锌对照品的HPLC图谱；
[0020] 图2葡萄糖酸锌颗粒供试品的HPLC图谱；
[0021] 图3葡萄糖酸锌对照品线性标准曲线图；
[0022] 图4葡萄糖酸锌空白颗粒的HPLC图谱；
[0023] 图5线性试验代表HPLC图谱；
[0024] 图6线性试验标准曲线图；
[0025] 图7回收率试验代表HPLC图谱；
[0026] 图8A、图8B、图8C、图8D分别为本发明耐用性试验HPLC谱图；其中，
[0027] 图8A耐用性考察-流动相比例改变谱图；
[0028] 图8B耐用性考察-pH改变谱图；
[0029] 图8C耐用性考察-流速改变谱图；
[0030] 图8D耐用性考察-柱温改变谱图。
【具体实施方式】
[0031] 下面结合具体实例说明本发明，而不是限制本发明的范围。
[0032] 实施例
[0033] 1、葡萄糖酸锌颗粒中葡萄糖酸的含量测定
[0034] 1. 1仪器与试药
[0035] Agielnt1200高效液相色谱仪（配备蒸发光散射检测器）；
[0036] MEITLERXP205 电子天平
[0037] 葡萄糖酸锌颗粒
[0038] 葡萄糖酸锌对照品
[0039] 1. 2系统适用性
[0040] 称取葡萄糖酸锌对照品适量，加水溶解并制成每1ml中约含葡萄糖酸0. 84mg的溶 液，取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，葡萄糖酸峰与相邻辅料峰的分离度应符合要求， 连续进样5次，所得葡萄糖酸峰面积的相对标准偏差不得过2. 0%。
[0041] 1.3对照品溶液配制
[0042] 分取称取葡萄糖酸锌对照品21. 49mg，26. 66mg和31. 88mg，加水溶解并定量稀释 至25ml，摇匀，作为对照品溶液（1)、（2)、（3)。
[0043] 1. 4供试品溶液配制
[0044] 分别称取葡萄糖酸锌颗粒1. 4019g和1. 4145g，加水溶解并稀释至10ml，摇匀作为 供试品溶液。
[0045] 1. 5色谱条件
[0046] 色谱柱：VenusilHILIC
[0047] 蒸发光散射检测器（参考条件：漂移管温度：11(TC，载气流速：2.OL/min，增益： 8)
[0048] 流动相：0? 05 %的甲酸水溶液-甲醇（60:40)
[0049] 流速：1.Oml/min
[0050] 柱温：3(TC
[0051] 进样量：20ul<