br>[0052] 1.6样品检测
[0053] 精密量取上述三种对照品溶液各20y1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以对 照品溶液浓度的对数值对相应的峰面积的对数值计算线性回归方程，相关系数（r)应不小 于〇. 99 ;同法测定供试品溶液，用线性回归方程计算供试品中葡萄糖酸的含量。
[0054] 1. 7实验结果
[0055] 对照品线性方程为y= 2. 143x+4. 2872,R2为0. 9996。测得的葡萄糖酸锌颗粒中 葡萄糖酸的含量分别为99. 58%和99. 92%。检测图谱见图1-图4。
[0056] 表1葡萄糖酸含量测定数据处理结果
[0057] I葡萄糖酸浓: 对照品线性 , 峰面积 LogCu職酸 LogA _IS/mg/ml___
[0058]
[0059] 2、线性试验
[0060] 称取葡萄糖酸锌标准品适量，加水溶解并分别稀释制成葡萄糖酸浓度为0. 66， 0. 75,0. 83,0. 91，0. 99mg/ml的系列溶液，分别进样20ul，记录峰面积。以峰面积的对数 值为纵坐标，进样浓度（mg/ml)的对数值为横坐标，进行线性回归，得回归方程为：y= 2. 3534x+4. 3248 ;R2= 0. 9980。试验结果表明，葡萄糖酸在0. 6580~0. 9869mg/ml的浓度 范围内线性关系良好。代表图谱见图5和图6。
[0061] 表2线性试验结果
[0062]
[0063] 3、回收率试验
[0064] 按处方量称取各辅料适量，分别加入标示量80 %、100 %、120 %的葡萄糖酸锌，用 水溶解并稀释成线性范围内高、中、低三种浓度的供试液，各三份，照含量测定方法测定，计 算回收率。试验结果表明，葡萄糖酸平均回收率均为99.87%，RSD为0. 14%，说明本方法 准确度良好。代表图谱见图7。
[0065] 表3回收率试验结果
[0066] L0067」
[0068] 4、重复性试验
[0069] 取葡萄糖酸锌颗粒，配制6份作为供试品溶液，照含量测定项方法进样分析，试验 结果表明，葡萄糖酸含量测定的RSD值为0. 75%，表明本方法重复性良好。
[0070] 表4重复性试验结果
[0071]
[0072] 5、中间精密度试验
[0073] 取葡萄糖酸锌颗粒，配制6份相同浓度的供试液，由两个分析人员分别在不同日 期按含量测定方法进行测定，试验结果表明，葡萄糖酸的平均含量为100.3%，RSD值为 0. 80 %，说明本方法中间精密度良好。
[0074] 表5中间精密度试验结果
[0075]
[0076]
[0077] 6、溶液稳定性试验
[0078] 取供试品溶液，分别于0、2、4、8、12小时进样分析，试验结果表明，葡萄糖酸峰面 积的RSD值（n= 5)为1. 17%，表明供试品溶液在12小时内稳定。
[0079] 表6溶液稳定性试验结果
[0080]
[0081] 7、耐用性试验
[0082] 取葡萄糖酸锌颗粒，将含量测定的色谱条件做微小变动（改变流动相的组成比 例，pH值，柱温，流速），进样测定，试验结果表明：色谱条件（流动相比例，pH值，柱温，流 速）做微小变动，对葡萄糖酸锌颗粒中葡萄糖酸的含量测定的结果没有影响。
[0083] 表7耐用性试验结果
[0084]
[0085] 本方法采用高效液相色谱法，蒸发光检测器，十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱 柱，为常见通用的检测方法，样品检出时间短，分析效率高。
【主权项】
1. 一种葡萄糖酸的检测方法，其特征是包括如下步骤： (1) 系统适应性：称取葡萄糖酸锌对照品，加水溶解并制成每1ml中含葡萄糖酸0. 84mg 的溶液，取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，葡萄糖酸峰与相邻辅料峰的分离度应大于 1. 5,连续进样5次，所得葡萄糖酸峰面积的相对标准偏差不超过2. 0% ; (2) 取葡萄糖酸锌对照品，精密称定，分别加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含葡萄 糖酸0. 67mg、0. 84mg和1.0 lmg的溶液作为对照品溶液；取葡萄糖酸锌颗粒，精密称定，加水 溶解并定量稀释制成每1ml中约含葡萄糖酸0. 84mg的溶液，作为供试品溶液； (3) 量取所述三种对照品溶液各20 y 1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品 溶液浓度的对数值对相应的峰面积的对数值计算线性回归方程，相关系数不小于〇. 99 ;另 取供试品溶液，同法测定，用线性回归方程计算。2. 根据权利要求1所述的葡萄糖酸的检测方法，其特征在于所述液相色谱仪的色谱柱 为十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，柱长150mm-250mm，内径为4. 6mm。3. 根据权利要求2所述的葡萄糖酸的检测方法，其特征在于所述色谱柱为Venusil HILICo4. 根据权利要求1所述的葡萄糖酸的检测方法，其特征在于色谱系统的流动相为甲酸 水溶液和甲醇的混合溶剂。5. 根据权利要求4所述的葡萄糖酸的检测方法，其特征在于甲酸水溶液浓度为 0? 01% ~0? 10%，单位为 g/100ml。6. 根据权利要求4所述的葡萄糖酸的检测方法，其特征在于甲酸水溶液和甲醇的体积 比为（1. 86 ~L 22) :1。7. 根据权利要求6所述的葡萄糖酸的检测方法，其特征在于甲酸水溶液和甲醇的比为 1. 5:1〇8. 根据权利要求1或5所述的葡萄糖酸的检测方法，其特征在于色谱系统的适用的流 速范围在0. 8ml/min和I. 2ml/min之间；适用的柱温范围在25°C和35°C之间。9. 根据权利要求8所述的葡萄糖酸的检测方法，其特征在于所述甲酸水溶液的浓度为 0. 05%，单位为g/100ml ;适用的流速1.0 ml/min ;适用的柱温是30°C。10. 据权利要求1所述的葡萄糖酸的检测方法，其特征在于使用蒸发光检测器，检测条 件是漂移管温度：ll〇°C，载气流速：2. OL/min，增益：8。
【专利摘要】本发明涉及一种葡萄糖酸的检测方法，其解决了现有检测方法复杂、检测时间长的技术问题，其包括如下步骤：系统适应性；取葡萄糖酸锌对照品，加水溶解并定量稀释制成对照品溶液和供试品溶液；量取对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液浓度的对数值对相应的峰面积的对数值计算线性回归方程。本发明可用于葡萄糖酸的测定。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105021731
【申请号】CN201510424389
【发明人】解春文, 杨琳
【申请人】山东达因海洋生物制药股份有限公司
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2015年7月17日