未致敏胶乳试剂的劣化防止方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及防止使用了未致敏胶乳的免疫测定试剂的性能的劣化的方法。
【背景技术】
[0002] 免疫测定试剂盒中的所谓胶乳试剂中，通常预先使与测定目标物质特异性反应的 抗体或者与测定目标抗体反应的抗原物质固相化、担载于胶乳表面。为了提高这种胶乳试 剂的保存稳定性，添加糖类和/或表面活性剂，尝试冷冻干燥（专利文献1、2)。根据这种手 法，能够实现胶乳试剂的稳定保存。但是，利用进行这种冷冻干燥的手法时，在使用前需要 胶乳液的复原处理，对于用户而言，方便性不好。
[0003] 若考虑到用户的方便性则理想的是可以直接使用的液态的胶乳试剂。作为不需 要使用前的复原处理的液态的胶乳试剂，为了冷冻劣化保护，通常添加有糖类、表面活性剂 等。但是，经固相化的抗原、抗体蛋白自胶乳表面剥离的问题没有得到完全解决，仍然不存 在即使冷冻也没有问题的胶乳试剂。
[0004] 使用了未致敏胶乳的血红蛋白Alc的免疫测定试剂的情况下，胶乳液的冷冻保护 对策主要通过全面实施保管运输时的温度管理来进行，胶乳试剂量也有20mL以上的容量， 因此过去冷冻所导致的试剂的劣化实质上没有成为问题。
[0005] 但是近年在一般医院利用诊断等待的时间，在诊断之前实施采血、检查，使该结果 反映到诊断的尝试得到广泛进行。这种现场使用的是用小型的专用仪器测定的试剂，试剂 也将一试验份提前小份分注到盒（cartridge)内。该试剂量为0.1 mL左右。利用标准品得 到的标准曲线预先作为数据存储，因此若试剂的反应性变化则测定值变化，比以往更严格 要求试剂的性能稳定性。如此若试剂量减少则容易受到运输时的温度变化，有可能损害试 剂的性能。例如若在将产品冷藏运输时由于向低温侧变动而变得过冷，则少量分注的试剂 在短时间内冷冻的可能性升高。实际上对于使用了未致敏胶乳的血红蛋白Alc的免疫凝集 测定试剂盒而言实质上产生下述事例：小份分注的胶乳试剂在冷藏运输中被过度冷却，胶 乳液冷冻，作为其结果，产生胶乳的凝集沉淀，不能作为试剂使用。因此近年胶乳试剂的冷 冻劣化保护成为紧急问题。
[0006] 专利文献2中记载了将未致敏胶乳冷冻干燥时添加的防冻剂，列举了分子量大的 多糖类、PVP、TWeen20等表面活性剂的名称。
[0007] 专利文献3提供，通过使用某种胺化合物，在不产生载体颗粒的自然凝集的情形 下促进基于特异反应的凝集的凝集测定用试剂和测定方法，该胺化合物包含甜菜碱盐酸 盐。但是，若观察其实施例示出的数据则可知，将甜菜碱盐酸盐加入到150mM致敏胶乳的情 况与未添加的对照进行比较，对于4°C、3天静置后的上清液而言，添加甜菜碱时成绩良好 的在3个项目中仅为2个项目，搅拌后在3个项目中仅为1个项目，并不能说明通过添加甜 菜碱而维持了致敏胶乳的分散状态，防止了自然凝集等所导致的沉降。也并未说明通过添 加甜菜碱而防止了冷冻所导致的凝集。
[0008] 虽然技术领域与免疫测定试剂盒不同，但是已知通过向喷墨油墨的组合物中加入 甜菜碱来防止冷冻·解冻所导致的油墨的凝集沉淀（专利文献4)。但是，对于胶乳试剂而 言，尚未知晓为了实现冷冻劣化保护而将甜菜碱添加到胶乳液来使用的例子。
[0009] 现有技术文献 专利文献 专利文献1 :日本特开平11-258241号公报 专利文献2 :日本特开昭61-222531号公报 专利文献3 :国际公开公报W02007/074860 专利文献4 :日本特开2001-271013号公报。
【发明内容】
[0010] 发明要解决的问题 本发明的目的在于，提供良好地维持免疫测定试剂盒中的胶乳试剂的分散状态，防止 温度变化所导致的凝集沉淀的产生而保护试剂不会发生测定性能的劣化的，即使对于少量 分注胶乳试剂的方式的免疫凝集测定试剂盒也可以适用的新方法。
[0011] 用于解决问题的方法 作为向胶乳试剂加入作为冷冻保护剂的物质，如上所述已知糖类、表面活性剂。但是， 使用未致敏胶乳的血红蛋白AlC的免疫测定试剂中，将试样中的血红蛋白稀释而成的样品 加入到胶乳试剂，由此使血红蛋白Alc物理吸附于胶乳表面。这种免疫测定试剂的情况下， 作为冷冻保护剂，不能使用阻碍物理吸附的表面活性剂。进而，极其少量封入到盒中的胶乳 试剂，虽然取决于其结构，但是需要在微小结构内自由流动。即存在下述问题：若由于添加 物而使胶乳试剂的粘性升高、流动性变差，则对试剂的性能造成影响。因此，也难以使用分 子量大的物质。
[0012] 本申请发明人等基于以上进行深入研究，结果发现，通过向胶乳试剂添加适当量 的甜菜碱（三甲基甘氨酸），即使经过冷冻解冻之后，也可以防止胶乳颗粒的凝集沉淀而 维持作为免疫测定试剂的性能，从而完成了本申请发明。
[0013] 即，本发明提供一种免疫测定试剂，其在溶剂中含有未致敏的胶乳颗粒和三甲基 甘氨酸。另外，本发明提供一种免疫测定试剂的劣化防止方法，其包括使三甲基甘氨酸共存 于含有未致敏胶乳颗粒的免疫测定试剂中。
[0014] 发明的效果 通过本发明，提供防止胶乳试剂的冷冻解冻所导致的性能劣化的新方法。根据本发 明，即使胶乳试剂冷冻也不会产生凝集，可以维持作为免疫测定试剂的性能，因此即使在运 输时的温度管理差的地区，也能够性能不劣化地进行运输。甜菜碱为低分子的物质，即使以 数％的浓度使用，也不会如糖类那样提高试剂的粘性，因此即使适用于试剂量少的盒式的 免疫测定试剂盒，也不会造成由于流动性降低所导致的不良影响。另外，不会如表面活性剂 那样阻碍测定对象蛋白质在未致敏胶乳颗粒上的吸附。
【附图说明】
[0015] 图1为表示对添加有甜菜碱6w/v%的胶乳试剂Rl实施0次~6次的冷冻解冻处 理时的信号的数值的变化的图。
[0016] 图2为使用添加有甜菜碱6w/v%的胶乳试剂Rl (冷冻解冻0次~3次）、测定HbAlc 标准品的信号而制成的标准曲线。也同时示出使用添加作为表面活性剂的Tween 20来替 代甜菜碱的Rl试剂（冷冻解冻1次）同样地制成的标准曲线。
【具体实施方式】
[0017] 本发明的免疫测定试剂，为胶乳颗粒漂浮于溶剂中的形态的试剂（胶乳试剂），其 特征在于，使用未致敏的颗粒作为胶乳颗粒，以及含有甜菜碱。
[0018] "未致敏"指的是抗原或抗体等蛋白质没有实质上担载于胶乳颗粒表面的状态。作 为利用胶乳凝集法的免疫测定方法之一，已知胶乳试剂使用未致敏的胶乳颗粒的手法（日 本专利第2677753号）。该手法中，通过使未致敏胶乳颗粒与检样试样接触，使测定对象蛋 白质吸附于颗粒表面，使其与对象蛋白质的抗体反应，产生颗粒的凝集，通过反应液的浊度 测定对象蛋白质的量。本发明可以优选适用于利用这种手法的免疫测定法。需要说明的是， 本发明中，"测定"这一用语包含定性的检测、定量、半定量。
[0019] 胶乳颗粒自身可以使用与公知的免疫凝集测定试剂盒中使用的胶乳颗粒相同的 胶乳颗粒。具体而言，胶乳颗粒的平均粒径可以为0. 04~0. 8 μ m左右、例如0. 08~0. 2 μ m 左右。对胶乳的材质没有特别限定，但是优选使用聚苯乙烯胶乳等苯乙烯系胶乳、丙烯酸系 胶乳等。使用表面的疏水性强的胶乳（例如聚苯乙烯胶乳）在使检样试样中的测定对象蛋 白质的吸附顺利进行方面优选。进而，可以根据需要使用各种改性胶乳（例如羧酸改性胶 乳）、磁性胶乳（内包有磁性颗粒的胶乳）等。
[0020] 溶剂可以是在利用胶乳凝集法的免疫测定试剂盒的胶乳试剂中通常用作使胶乳 漂浮的液体的缓冲液。例如可以使用甘氨酸缓冲液、硼酸缓冲液、Good缓冲液等，但是不限 于此。试剂中的胶乳浓度通常为〇. 05~0. 5w/v%左右。
[0021] 本发明中使用的甜菜碱指的是三甲基甘氨酸（N, N, N-trimethylglycine)。为了在 含有未致敏胶乳的溶剂中含有三甲基甘氨酸，可以将三甲基甘氨酸的酸酐、水合物或盐添 加到溶剂中。作为三甲基甘氨酸的盐的具体例，可列举出盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐等，但是不 限于此。
[0022] 免疫测定试剂中的甜菜碱的含量优选为5~30w/v%，例如可以为5~25w/v%、5~ 20w/v%、5~10w/v%、5. 5~8. 5w/v%、或5