大型藻类周围群落生物样品处理方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种生物样品的处理方法，特别是一种大型藻类周围群落生物样品处理方法。
【背景技术】
[0002]大型藻类是非常重要的初级生产力系统，为整个生态系统提供了大量的能量和有机质，藻类经过光合作用固定无机碳转换为有机碳，对大气的C02循环具有重要意义，有很多浮游生物和附着生物(附着在大型藻类上的生物)在大型藻类群落周围，因此分析大型藻类生态系统的附着生物对分析生态系统的能量流动和物质流动具有十分重要意义。因此如何对采集到的藻类生态系统中的附着生物样品进行处理也是一个有待研究的课题。
【发明内容】
[0003]本发明是为了解决现有技术所存在的上述不足，提出一种能够准确、快速地对采集到的大型藻类周围群落生物的样品进行处理、计数的方法。
[0004]本发明的技术解决方案是:一种大型藻类周围群落生物样品处理方法，其特征在于:所述的方法按照以下步骤进行:
将收集到的生物样品放入清洗干净的第一样品瓶中，并向第一样品瓶中注入浓度为5%的甲醛固定液，静置第一样品瓶，将第一样品瓶中的上清液转移到清洗干净的第二样品瓶中，然后分别利用40目、60目、80目、100目、120目、140目、160目、180目和200目的标准检验筛对第一样品瓶中残留的泥沙手动过筛，进行泥沙和水体中生物的分离，过筛过程中用蒸馏水冲洗泥沙，并将遗留在筛孔中的水体生物挑拣到第二样品瓶中，
静置第二样品瓶，利用过滤装置吸取上层清液，浓缩样品体积，并用量筒测量第二样品瓶中浓缩后水体的体积，同时记录该体积数值，再次静置第二样品瓶，并吸取第二样品瓶中的上层清液冲洗量筒，并将冲洗量筒的水体重新转移到第二样品瓶中，然后分别进行生物样品中植物计数和动物计数，
植物的计数:充分摇匀第二样品瓶，用移液枪吸取样品水体，注入到浮游植物计数板上，并盖上盖玻片，在10倍或40倍显微镜下鉴定计数，每瓶样品观看3片，每片约2750个视野，取其平均值，如每个视野下的生物为2个以下，则进行第4片或更多片数的观看，计数时以单个细胞个体数表示数量，对于以链状群体存在的藻类，需要计算出每个群体的细胞数，动物的计数:充分摇匀第二样品瓶，用移液枪吸取样品水体，注入到浮游动物计数板上，不需要加盖盖玻片，在10倍或40倍显微镜下鉴定计数，每瓶样品观看3片，每片约640个视野，取其平均值，如每个视野下的生物为2个以下，则进行第4片或更多片数的观看，水样中能够用肉眼看到的生物，需要在解剖镜下观看其外观和结构，对其进行鉴定和计数，如无法确定生物的种类，则记录其在计数框内的位置，在观看完整个计数框后借助解剖针单独鉴别，判断出能够用肉眼看到的生物属于浮游生物还是附着生物，对于不同发育阶段、生活方式不同的生物，需要确定其生长阶段，然后判断其为浮游生物还是附着生物，对于在大型藻类丛中生活的生物则按照附着生物计算。
[0005]本发明同现有技术相比，具有如下优点:
本发明所公开的大型藻类周围群落生物样品处理方法，相比于传统的生物样品处理方法，能够快速、有效地从大型藻类周围群落生物样品中将泥沙分离出去，并按照植物和动物两个种类分别进行计数，它能够让科研人员掌握大型藻类周围群落生物的种类、数量等信息，进而为分析大型藻类生态系统的研究打下基础，因此可以说这种方法具备了多种优点，特别适合于在本领域中推广应用，其市场前景广阔，科研意义重大。
【具体实施方式】
[0006]下面将说明本发明的【具体实施方式】。
[0007]一种大型藻类周围群落生物样品处理方法，按照以下步骤进行:
将收集到的生物样品放入清洗干净的第一样品瓶中，并向第一样品瓶中注入浓度为5%的甲醛固定液，此时第一样品瓶中的生物包括浮游植物、浮游动物，同时还包括附着在藻类上的附着生物；由于采集到的藻类的根部和叶片上可能会附有泥沙，而如果在采集藻类的过程中用抖动的方式来清除这部分泥沙，则有可能会使部分附着生物与藻类分离，影响计数的准确性，因此需要在采集后分离泥沙，分离泥沙的原则是尽可能的去除泥沙，同时保证水样中的生物不会流失；首先静置第一样品瓶，让大部分泥沙沉淀到第一样品瓶的底部，然后将第一样品瓶中的上清液转移到清洁的第二样品瓶中，此时第一样品瓶中仅留有分离出的泥沙，由于这部分底层泥沙中会包含一部分采集到的生物，因此需要利用标准检验筛将泥沙中的生物分离出来，由于此时的泥沙为湿泥沙，因此分离的过程中要手动操作，分别利用40目、60目、80目、100目、120目、140目、160目、180目和200目的标准检验筛对第一样品瓶中残留的泥沙手动过筛，将泥沙均匀的摊放在检验筛上，轻轻晃动检验筛的同时用蒸馏水缓慢冲洗泥沙，进行泥沙和水体中生物的分离，并将遗留在筛孔中的水体生物挑拣到第二样品瓶中，需要注意的是，一部分与泥沙粒径差不多尺寸的个体会与泥沙一同截留在某一层检验筛中，遇到这种情况时，就需要再次进行筛分(如截留在80目的检验筛中时，则需要将泥沙转移到60目的检验筛中再次分离)，有时有的生物会卡在检验筛的网孔中，此时需要用蒸馏水冲洗、或用手轻轻拍打筛框，将这些生物尽可能的收集起来。
[0008]经过上述处理后，静置第二样品瓶，让第二样品瓶中的生物都沉淀到水体的下层，然后利用过滤装置吸取上层清液，浓缩样品体积，便于观测，并用量筒测量第二样品瓶中浓缩后水体的体积，同时记录该体积数值，再次静置第二样品瓶，并吸取第二样品瓶中的上层清液冲洗量筒，以防止少量生物粘附在量筒壁上，并将冲洗量筒的水体重新转移到第二样品瓶中，这样就能够将粘附在量筒壁上的生物也收集到第二样品瓶中，最后分别对第二样品瓶中的植物和动物进行计数。
[0009]植物的计数:将浓缩后的水样充分摇均，迅速用0.1ml标准的移液枪吸取0.1ml的样品2次(由于样品中包含浮游生物和附着生物，其生物量比常规浮游生物水样生物量明显要多，显微镜下观看时间长，0.1ml的样品计数板中水样容易干，产生气泡，影响计数)，注入0.1ml的浮游植物计数板(计数板表面积20mm*20mm，100个方格)上，盖上盖玻片，不能产生气泡，水样不能溢出计数板。
[0010]在10倍或40倍显微镜下鉴定计数，每瓶样品观看3片，每片约2750个视野，求其平均值。如果每个视野下的生物过少(I到2个或者没有)，则需要视情况观看第4片甚至更多片数。
[0011]计数时采样单个细胞个体数表示数量，对于类似于直链藻的以链状群体存在的藻类，要计算出每个群体的细胞数。
[0012]动物的计数:将浓缩后的水样充分摇匀，迅速用Iml标准的移液枪吸取Iml样品，注入Iml的浮游动物计数板(50mm*20mm，40个方格)上，不需要盖玻片，注意水样不能溢出计数板。
[0013]在10倍或40倍显微镜下鉴定计数，每瓶样品观看3片，每片约640个视野，求其平均数。如果每个视野下的生物过少(I到2个或者没有)，则需要视情况观看第4片甚至更多片数。
[0014]水样中能够用肉眼看到的生物(如螺类、虾类等)，需要在解剖镜下观看其外观和结构，对其进行鉴定和计数，由于在解剖镜下只能看到生物身体的某一侧，因此如无法确定生物的种类，则记录其在计数框内的位置，在观看完整个计数框后借助解剖针单独鉴别，根据其生活环境、生活习性等判断出能够用肉眼看到的生物属于浮游生物还是附着生物；
对于不同发育阶段、生活方式不同的生物，需要确定其生长阶段，然后判断其为浮游生物还是附着生物，对于在大型藻类丛中生活的生物则按照附着生物计算。
【主权项】
1.一种大型藻类周围群落生物样品处理方法，其特征在于:所述的方法按照以下步骤进行: 将收集到的生物样品放入清洗干净的第一样品瓶中，并向第一样品瓶中注入浓度为5%的甲醛固定液，静置第一样品瓶，将第一样品瓶中的上清液转移到清洗干净的第二样品瓶中，然后分别利用40目、60目、80目、100目、120目、140目、160目、180目和200目的标准检验筛对第一样品瓶中残留的泥沙手动过筛，进行泥沙和水体中生物的分离，过筛过程中用蒸馏水冲洗泥沙，并将遗留在筛孔中的水体生物挑拣到第二样品瓶中， 静置第二样品瓶，利用过滤装置吸取上层清液，浓缩样品体积，并用量筒测量第二样品瓶中浓缩后水体的体积，同时记录该体积数值，再次静置第二样品瓶，并吸取第二样品瓶中的上层清液冲洗量筒，并将冲洗量筒的水体重新转移到第二样品瓶中，然后分别进行生物样品中植物计数和动物计数， 植物的计数:充分摇匀第二样品瓶，用移液枪吸取样品水体，注入到浮游植物计数板上，并盖上盖玻片，在10倍或40倍显微镜下鉴定计数，每瓶样品观看3片，每片约2750个视野，取其平均值，如每个视野下的生物为2个以下，则进行第4片或更多片数的观看，计数时以单个细胞个体数表示数量，对于以链状群体存在的藻类，需要计算出每个群体的细胞数，动物的计数:充分摇匀第二样品瓶，用移液枪吸取样品水体，注入到浮游动物计数板上，不需要加盖盖玻片，在10倍或40倍显微镜下鉴定计数，每瓶样品观看3片，每片约640个视野，取其平均值，如每个视野下的生物为2个以下，则进行第4片或更多片数的观看，水样中能够用肉眼看到的生物，需要在解剖镜下观看其外观和结构，对其进行鉴定和计数，如无法确定生物的种类，则记录其在计数框内的位置，在观看完整个计数框后借助解剖针单独鉴别，判断出能够用肉眼看到的生物属于浮游生物还是附着生物，对于不同发育阶段、生活方式不同的生物，需要确定其生长阶段，然后判断其为浮游生物还是附着生物，对于在大型藻类丛中生活的生物则按照附着生物计算。
【专利摘要】本发明公开的大型藻类周围群落生物样品处理方法，相比于传统的生物样品处理方法，能够快速、有效地从大型藻类周围群落生物样品中将泥沙分离出去，并按照植物和动物两个种类分别进行计数，它能够让科研人员掌握大型藻类周围群落生物的种类、数量等信息，进而为分析大型藻类生态系统的研究打下基础，因此可以说这种方法具备了多种优点，特别适合于在本领域中推广应用，其市场前景广阔，科研意义重大。
【IPC分类】G01N1/28
【公开号】CN105158040
【申请号】CN201510568471
【发明人】刘永虎, 张皓宇, 陈勇, 田涛, 刘汉超, 杨军
【申请人】大连海洋大学
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年9月9日