一种丝瓜络的高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱和用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种丝瓜络指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱和用途。
【背景技术】
[0002] 丝瓜络，即萌芦科植物丝瓜Luffa cylindrica(L. )Roem.的干燥成熟果实的维管 束。主要含有留醇、皂苷、黄酮、酚类、蛋白质、氨基酸及有机酸等成分，具有祛风、通络、活 血、下乳的功效，用于痹痛拘挛，胸胁胀痛，乳汁不通，乳痈肿痛等症。现代研究表明，丝瓜络 具有保护心肌缺血的作用，而且在降血脂、抑制体重增加、抗炎、镇痛镇静及抗过敏等方面 也取得了良好的效果。在质量控制方面，2010版《中华人民共和国药典》一部收载了丝瓜络 药材，但仅仅进行了粉末鉴别。由于中药的产地、来源、采收季节等情况复杂，需要采用更科 学、合理的方法控制其质量，这对保证临床用药的安全有效是十分必要的。指纹图谱作为从 整体上对中药进行质量控制的一种技术目前已被广泛认可，其优势比起单一组分甚至多组 分定性定量方法更加明显。目前文献中尚未见到关于丝瓜络指纹图谱的研究报道，因此，为 科学有效地控制其内在质量，有必要建立丝瓜络的指纹图谱。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是提供一种丝瓜络的高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其标准 指纹图谱和用途。
[0004] 本发明丝瓜络的高效液相色谱指纹图谱的建立方法，是按以下步骤进行：
[0005] -、供试品溶液的制备：a、取丝瓜络药材，加10倍质量的质量百分浓度为75%乙 醇，浸泡12h，超声30min，过滤，分别收集固相物A和液相物A，将固相物A加入10倍质量的 质量百分浓度为75%乙醇中浸泡8h，超声30min，过滤，收集液相物B，然后将液相物A和B 混合，得到浸提液，将浸提液减压浓缩得浸膏；
[0006] b、将浸膏用少量蒸馏水溶解后上到聚酰胺色谱柱上，先用蒸馏水洗涤4个柱体 积，再用质量浓度为30%的乙醇洗脱4个柱体积，收集洗脱液，然后减压浓缩洗脱液至干， 得到干燥固体C;
[0007] c、将步骤b得到的干燥固体C，用甲醇溶解成浓度为2mg/mL的溶液，用微孔滤膜进 行过滤，滤液即为供试品溶液；
[0008] 二、指纹图谱的制作：将步骤一得到的供试品溶液注入高效液相色谱仪，以体积比 为1:1的甲醇和乙腈的混合溶液为A相，质量百分浓度为0. 5 %的乙酸水溶液为B相进行梯 度洗脱；其中，高效液相色谱条件为：色谱柱填料Thermo C18,规格为250 X 4. 6mm，5 y m ;柱 温为35°C;流速0. 8mL/min，检测波长280nm，进样量20 y L ;在此条件下分析供试品溶液，得 到丝瓜络的指纹图谱。
[0009] 三、标准指纹图谱的确定：确定了 7个共有特征峰；以7号峰为对照峰，共有特 征峰的相对保留时间分别为：1号共有特征峰相对保留时间为0. 368±0. 003%，2号峰相 对保留时间为0. 433±0. 01%，3号峰相对保留时间为0. 462±0. 025%，4号峰相对保留 时间为〇. 613±0. 016%，5号峰相对保留时间为0. 667±0. 02%，6号峰相对保留时间为 0.881±0.028%，7号峰相对保留时间为1.000,上述共有特征峰构成了丝瓜络的指纹特 征，可作为丝瓜络的标准指纹图谱。
[0010] 本发明丝瓜络标准指纹图谱的用途是指丝瓜络指纹图谱作为标准指纹图谱用于 丝瓜络质量控制中。
[0011] 本发明的有益效果：
[0012] 本发明的丝瓜络标准指纹图谱有7个共有特征峰，这些共有特征峰构成了丝瓜络 的指纹特征，可作为丝瓜络的标准指纹图谱。本发明的丝瓜络标准指纹图谱作为标准指纹 图谱经多批样品验证后可用于丝瓜络质量控制中，用于从整体上评价和控制丝瓜络药材的 质量，既避免了因只测定一、二个化学成分而判定丝瓜络整体质量的片面性，又减少了为 质量达标而人为添加对照成分的可能性。本发明丝瓜络的高效液相色谱指纹图谱的建立方 法具有可重复性强、精密度高和稳定可靠、易于掌握的优点，适用于丝瓜络药材的真伪、产 地和品质的鉴别和质量控制。
【附图说明】
[0013] 图1为试验1提供的丝瓜络标准指纹图谱；其中1至7为丝瓜络的7个共有特征 峰；
[0014] 图2为S1-S10是10批丝瓜络药材指纹图谱。
【具体实施方式】
[0015] 本发明技术方案不局限于以下所列举【具体实施方式】，还包括各【具体实施方式】间的 任意组合。
【具体实施方式】 [0016] 一：本实施方式丝瓜络的高效液相色谱指纹图谱的建立方法，是按 以下步骤进行：
[0017] -、供试品溶液的制备：a、取丝瓜络药材，加10倍质量的质量百分浓度为75%乙 醇，浸泡12h，超声30min，过滤，分别收集固相物A和液相物A，将固相物A加入10倍质量的 质量百分浓度为75%乙醇中浸泡8h，超声30min，过滤，收集液相物B，然后将液相物A和B 混合，得到浸提液，将浸提液减压浓缩得浸膏；
[0018] b、将浸膏用少量蒸馏水溶解后上到聚酰胺色谱柱上，先用蒸馏水洗涤4个柱体 积，再用质量浓度为30%的乙醇洗脱4个柱体积，收集洗脱液，然后减压浓缩洗脱液至干， 得到干燥固体C;
[0019] c、将步骤b得到的干燥固体C，用甲醇溶解成浓度为2mg/mL的溶液，用微孔滤膜进 行过滤，滤液即为供试品溶液；
[0020] 二、指纹图谱的制作：将步骤一得到的供试品溶液注入高效液相色谱仪，以体积比 为1:1的甲醇和乙腈的混合溶液为A相，质量百分浓度为0. 5 %的乙酸水溶液为B相进行梯 度洗脱；其中，高效液相色谱条件为：色谱柱填料Thermo C18,规格为250 X 4. 6mm，5 y m ;柱 温为35°C;流速0. 8mL/min，检测波长280nm，进样量20 y L ;在此条件下分析供试品溶液，得 到丝瓜络的指纹图谱。
【具体实施方式】 [0021] 二：本实施方式与一不同的是：步骤一中的微孔滤膜 过滤是采用0. 45 ym微孔滤膜进行过滤的。其它与一相同。
【具体实施方式】 [0022] 三：本实施方式与一或二不同的是：步骤二中梯度 洗脱顺序为：〇min - 20min - 50min - 80min，体积比为1:1的甲醇和乙腈混合溶液5 % - 16%-25%-40%。其它与一或二相同。
【具体实施方式】 [0023] 四：本实施方式采用一种丝瓜络高效液相色谱指纹图谱的建立方法 得到的丝瓜络标准指纹图谱。
[0024] 本实施方式的丝瓜络标准指纹图谱有7个共有特征峰，这些共有特征峰构成了丝 瓜络的指纹特征，可作为丝瓜络的标准指纹图谱。
【具体实施方式】 [0025] 五：本实施方式与四不同的是：丝瓜络的标准指纹图 谱有7个共有特征峰；以7号峰为对照峰，共有特征峰的相对保留时间分别为：1号共有特 征峰相对保留时间为0. 368±0. 003%，2号峰相对保留时间为0. 433±0. 01%，3号峰相对 保留时间为0.462±0.025%，4号峰相对保留时间为0.613±0.016%，5号峰相对保留时间 为0. 667±0. 02%，6号峰相对保留时间为0. 881 ±0. 028%，7号峰相对保留时间为1. 000， 这7个共有特征峰构成了丝瓜络的指纹特征，可作为丝瓜络的标准指纹图谱。其它与具体 实施方式四相同。
【具体实施方式】 [0026] 六：本实施方式丝瓜络标准指纹图谱的用途是指丝瓜络指纹图谱作 为标准指纹图谱用于丝瓜络质量控制中。
[0027] 本实施方式的丝瓜络标准指纹图谱作为标准指纹图谱经多批样品验证后可用于 丝瓜络质量控制中，用于从整体上评价和控制丝瓜络药材的质量，既避免了因只测定一、二 个化学成分而判定丝瓜络整体质量的片面性，又减少了为质量达标而人为添加对照成分的 可能性。
[0028] 通过以下试验验证本发明的有益效果：