y1/cm喷在2cm宽玻璃纤维素膜金标垫上，37°C烘干18~24小时，即得制成金标垫。
[0217] 2. 1. 2NC膜包被过程为：以0? 01MpH7. 4磷酸盐缓冲液将As全抗原配制成0? 1、 0? 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、3.Omg/mL的溶液，将抗鼠IgG配制成 0? 1、0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、 3.Omg/mL的溶液，用划膜仪以1y1/cm速度分别进行划线包被C、T线，放置在37度烘箱干 燥12小时。
[0218] 2. 1. 3试剂盒的装配：试剂盒装配在温度为20~30°C，湿度为〈40%的室内进行， 取塑料底板，将已包被的NC膜放置在塑料地板中部粘贴，将金标垫搭在NC膜T线一侧，金 标垫搭在NC膜上1mm粘贴，金标垫另一侧搭接粘贴上样品垫，样品垫与试纸下边缘对齐。在 NC膜一侧搭接吸样纸，搭在NC膜上1mm粘贴。最后使用切条机将贴好的塑料板切成5mm宽 试纸条，再装入塑料卡内，形成试剂盒。
[0219] 2. 1.4试纸条工艺参数调试：将浓度不同标记、包被的试剂进行组合配对，制备成 小样，使用As标准样品对试剂进行测试，寻找出最佳组合。
[0220] 2. 2提取剂：为10%的稀硝酸溶液。
[0221] 2. 3稀释液：分别使用0. 01M、0. 02M、0. 04MPBS溶液，加入终浓度分别为0. 5%、 1 %、1. 5、2% 的tween-20,加入终浓度为1X10 9、1X10S、1X10 7、1X10 6、1X10 5、 1X10 4、2X10 3g/mL的络合剂ITCBE配置成稀释液。
[0222] 2. 4标准曲线制备、换算和录入：确定好试纸工艺参数后，分别用浓度为0、50、 100、200、400、600、800、1000yg/kg的As标准样品对试剂盒进行测定，不同浓度的标准样 品显示出不同的强度T线，使用胶体金读数仪测定其强度。将标准添加样品浓度除以As的 回收率55. 6%作为测定样品中As浓度值；使用做特殊软件制作标准曲线，并将相应参数导 入读数仪中，完成仪器曲线参数设置。
[0223] 2. 5检测方法
[0224] 1)使用粉碎机粉碎所需检测样品，并过20目筛网；
[0225] 2)使用小型天平准确称量lg检测待检样品到提取瓶中，加入4mL提取剂，室温下 在震荡频率为2~60cpm条件下反应lOmin;
[0226] 3)使用离心机或过滤装置过滤取清液，用移液器器准确移取40y1清液至160y1 稀释液中混合均匀；
[0227] 4)取出试剂盒将试剂盒和上述混合液放入干式恒温仪中5min，稳定设定为37°C;
[0228] 5)用移液器取120y1上述混合液加入试剂盒加样孔中，继续在37°C恒温环境下 反应20min;
[0229] 6)将反应完的试剂盒放入手持式胶体金读数仪中即可显示出样品中As的浓度。
[0230] 2. 6对在市场上或检测机构获得6份样品使用重金属砷快速定量检测试剂盒进行 检测并与原子吸收光谱法结果检测对比分析其准确性；配制浓度分别为200ppb、400ppb、 800ppb标准样品溶液使用重金属砷快速定量检测试剂盒并分析检测，每个浓度检测6次分 析其精密度。
[0231] 3、结果
[0232] 3. 1传统的方法胶体金标记pH值为8.5;最适标记量为1. 0mg/100mL;复溶液为 20mMPBS含有1%BSA、5%蔗糖、0? 1%tween-20 ;改性胶体金最适标记量为1. 0mg/100mL; 最佳As全抗原包被量1. 0mg/mL;稀释液最佳条件为0. 2MPBS，终浓度为1. 5%tween-20， 1X10 5g/mLITCBE;以上工艺不同批次可能需要适当调整工艺。
[0233] 3. 2准确度检测结果
[0234]
[0235]对本组数据做配对样本T检验法，t=0?255,t双尾临界(。.。5,5；) = 2. 571，t〈t双尾临wa(K, 5)，说明重金属砷快速定量检测试剂盒检测结果与原子吸收光谱法检测结果无显著结果差 异。
[0236] 3. 3精密度检测结果
[0237]
[0238] 由结果及分析可知，重金属砷快速定量检测试剂盒重复检测结果变异系数为 13. 8~14. 4之间，平均变异系数小于15%
[0239] 检测结果表明本发明重金属砷的检测试剂盒以及检测系统性能良好，可以快速、 准确的检测待检样品中砷含量，适用于实验室和取样现场的快速定量检测，满足客户对食 品中重金属砷快速定量检测要求。
[0240] 实施例7重金属铬快速定量检测试剂盒制备
[0241] 1、主要材料
[0242] 1. 1铬（Cr)标准样品：国家有色金属及电子材料分析测试中心产品；Cr特异性单 克隆抗体、Cr全抗原，羊抗鼠IgG:成都安普诺生物科技有限公司产品；氯金酸：Sigma公司 产品；硝酸纤维素膜：MILLIP0RE(美国），M135 ;牛血清白蛋白（BSA)、聚乙二醇2000:Sigma 产品；玻璃纤维素膜、吸水垫、底板：上海杰一生物产品；其它常用试剂均为分析纯试剂。
[0243] 1. 2含有重金属Cr粮食样品在市场上或检测机构获得，共5份，使用国标GB/ T5009. 123-2003的第一法测定其含量，其中Cr含量分布区间为0~200yg/kg3份Cr含 量分布区间为200~400yg/kg1份、Cr含量分布区间为400~1000yg/kg1份。
[0244] 1. 3干式恒温仪购干式恒温仪，购自杭州瑞诚仪器有限公司；手持式胶体金读数 仪，购自深圳拓能达科技有限公司。
[0245] 2、方法
[0246] 2. 1试剂盒的制备
[0247] 2. 1. 1Cr单克隆抗体胶体金标记
[0248] 以氯金酸一柠檬酸三钠还原法制备直径为40nm的胶体金溶液，制备完成的胶体 金100份加入〇? 5份浓度为1 %的二（三乙醇胺）钛酸二异丙酯（TMC-TE)溶液，在200r/ min下混合搅拌2h。用氨水调节溶液pH值至8. 5,加入0. 5份钛酸正丁酯，在室温下继续反 应24小时，在12000r/min条件下离心15min，吸出上清液加入超纯水或缓冲液清洗，重复1 次，即制备得表面含有活性-0H的钛酸酯改性的胶体金颗粒。取上述表面含有活性-0H的 钛酸酯改性的胶体金3份，按每100mL加入0. 2、0. 5、1. 0、1. 5、2mgCr单克隆抗体，反应2h。 在12000r/min条件下离心15min，去上清液，用复溶液定溶至胶体金溶液体积的1/20。按 4yL/cm喷在2cm宽玻璃纤维素膜金标垫上，37°C烘干18~24小时，即得制成金标垫。
[0249] 2. 1. 2NC膜包被过程为：以0. 01MpH7. 4磷酸盐缓冲液将Cr全抗原配制成0. 1、 0? 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、3.Omg/mL的溶液，将抗鼠IgG配制成 0? 1、0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、 3.Omg/mL的溶液，用划膜仪以1yL/cm速度分别进行划线包被C、T线，放置在37度烘箱干 燥12小时。
[0250] 2. 1. 3试剂盒的装配：试剂盒装配在温度为20~30°C，湿度为〈40%的室内进行， 取塑料底板，将已包被的NC膜放置在塑料地板中部粘贴，将金标垫搭在NC膜T线一侧，金 标垫搭在NC膜上1mm粘贴，金标垫另一侧搭接粘贴上样品垫，样品垫与试纸下边缘对齐。在 NC膜一侧搭接吸样纸，搭在NC膜上1mm粘贴。最后使用切条机将贴好的塑料板切成5mm宽 试纸条，再装入塑料卡内，形成试剂盒。
[0251] 2. 1.4试纸条工艺参数调试：将浓度不同标记、包被的试剂进行组合配对，制备成 小样，使用Cr标准样品对试剂进行测试，寻找出最佳组合。
[0252] 2. 2提取剂：为10%的稀硝酸溶液。
[0253]2. 3分别使用0. 01M、0. 02M、0. 04MPBS溶液，加入终浓度分别为0. 5 %、1 %、 1. 5、2 % 的tween-20,加入终浓度为 1X10 9、1X10 8、1X10 7、1X10 6、1X10 5、1X10 4、 2X10 3g/mL的络合剂ITCBE配置成稀释液。
[0254] 2. 4标准曲线制备、换算和录入：确定好试纸工艺参数后，分别用浓度为0、50、 100、200、400、600、800、1000yg/kg的Cr标准样品对试剂盒进行测定，不同浓度的标准样 品显示出不同的强度T线，使用胶体金读数仪测定其强度。将标准添加样品浓度除以Cr的 回收率69%作为测定样品中Cr浓度值；使用做特殊软件制作标准曲线，并将相应参数导入 读数仪中，完成仪器曲线参数设置。
[0255] 2. 5检测方法
[0256] 1)使用粉碎机粉碎所需检测样品，并过20目筛网；
[0257] 2)使用小型天平准确称量lg检测待检样品到提取瓶中，加入4mL提取剂，室温下 在震荡频率为2~60cpm条件下反应5min;
[0258] 3)使用离心机或过滤装置过滤取清液，用移液器器准确移取40y1清液至160y1 稀释液中混合均匀；
[0259] 4)取出试剂盒将试剂盒和上述混合液放入干式恒温仪中5min，稳定设定为37°C;
[0260] 5)用移液器取120y1上述混合液加入试剂盒加样孔中，继续在37°C恒温环境下 反应20min;
[0261] 6)将反应完的试剂盒放入手持式胶体金读数仪中即可显示出样品中Cr的浓度。
[0262] 2. 6对在市场上或检测机构获得6份样品使用重金属铬快速定量检测试剂盒进行 检测并与原子吸收光谱法结果检测对比分析其准确性；配制浓度分别为200ppb、400ppb、 800ppb标准样品溶液使用重金属铬快速定量检测试剂盒并分析检测，每个浓度检测6次分 析其精密度。
[0263] 3、结果
[0264] 3. 1传统的方法胶体金标记pH值为8.5;最适标记量为1. 0mg/100mL;复溶液为 20mMPBS含有1%BSA、5%蔗糖、0? 1%tween-20 ;改性胶体金最适标记量为1. 0mg/100mL; 最佳Cr全抗原包被量0. 5mg/mL;稀释液最佳条件为0. 2MPBS，终浓度为1 %tween-20， 1X10 6g/mLITCBE;以上工艺不同批次可能需要适当调整工艺。
[0265] 3. 2准确度检测结果
[0266]
[0267]对本组数据做配对样本T检验法，t= 0. 649,t双尾临wQ.Q5,4) = 2. 776,t〈t双尾临wa(K, 4)，说明重金属铬快速定量检测试剂盒检测结果与原子吸收光谱法检测结果无显著结果差 异。
[0268] 3. 3精密度检测结果
[0269]
[0270]由结果及分析可知，重金属铬快速定量检测试剂盒重复检测结果变异系数为 10. 9~14. 1之间，平均变异系数小于15%
[0271] 检测结果表明本发明重金属铬的检测试剂盒以及检测系统性能良好，可以快速、 准确的检测待检样品中铬含量，适用于实验室和取样现场的快速定量检测