00mL所得。
[0074]质控线的包被:
[0075]将兔抗鼠多克隆抗体用包被缓冲液配成0.5mg/mL的包被液；于距检测线10mm的位置，用线喷方式将其横向包被于硝酸纤维素膜上，得质控线，每厘米质控线所需的兔抗鼠多克隆抗体的包被量为300ng，然后于37°C条件下干燥45分钟；
[0076]所述的包被缓冲液为:0.02g叠氮化钠，0.8g氯化钠，0.29g十二水磷酸氢二钠，0.02g氯化钾，0.02g磷酸二氢钾，加水定容至lOOmL所得。
[0077]所述的硝酸纤维素膜长25mm，宽3mm。
[0078](3)样品垫的制备:
[0079]将玻璃纤维膜剪裁成长15mm宽3mm的规格，放入封闭液中浸湿，取出，于37°C条件下干燥6小时，得样品垫，然后置干燥器中室温保存；
[0080]所述的封闭液为2.0g卵清白蛋白，2.5g鹿糖，0.lmL辛基苯基聚氧乙稀醚，0.3g聚乙烯吡咯烷酮-K30，0.02g叠氮化钠，0.8g氯化钠，0.29g十二水磷酸氢二钠，0.02g氯化钾，0.02g磷酸二氢钾，加水定容至lOOmL所得。
[0081](4)试纸条的组装:在纸板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，交叠长度为2_，即得层析试纸条，见图1和图2。
[0082]羧基化氧化石墨烯标记的抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体反应试剂的制备
[0083]取0.4mg羧基化氧化石墨烯，溶解在0.8mL标记反应液中，冰浴超声10分钟；加入20 μ L 15mg/mL的1-(3- 二甲氨基丙基)_3_乙基碳二亚胺盐酸盐水溶液，剧烈振摇15min后；缓慢加入6 yL lmg/mL的抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体水溶液，继续振摇8h ;加入0.lg/mL的牛血清白蛋白水溶液100 yL，继续振摇12h后；13000r/min离心30min，弃去上清液，保留沉淀；加入lmL标记洗涤液，将沉淀重悬，再以13000r/min离心30min，弃去上清液，重复操作3次；加入0.2mL标记保存液，将沉淀重悬，置4°C冰箱备用。
[0084]所述的15mg/mL的1_(3_ 二甲氨基丙基)_3_乙基碳二亚胺盐酸盐水溶液为15mg1_(3- 二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺盐酸盐溶解在lmL纯水中制成；
[0085]所述的lmg/mL抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体水溶液为lmg抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体溶解在lmL纯水中制成；
[0086]所述的0.lg/mL牛血清白蛋白水溶液为10g牛血清白蛋白溶解在100mL纯水中，0.22 μπι滤膜过滤所得；
[0087]所述的标记反应液是按照下述方法配制得到的:硼酸0.3092g，在800mL水溶液中完全溶解，用氢氧化钠调节pH值到8.13，加水定容到1L，0.22 μπι滤膜过滤所得。
[0088]所述的标记洗涤液是按照下述方法配制得到的:硼酸0.03092g，溶解在80mL水溶液中，用氢氧化钠调节pH值到8.13，加水定容到100mL，再加入牛血清白蛋白1.0g，叠氮化钠0.02g，使之充分溶解，0.22 μπι滤膜过滤所得。
[0089]所述的标记保存液是按照下述方法配制得到的:硼酸0.6184g，溶解在80mL水溶液中，用氢氧化钠调节pH值到8.13，加水定容到100mL，再加入牛血清白蛋白lg，叠氮化钠0.02g，使之充分溶解，0.22 μπι滤膜过滤所得。
[0090]上述黄曲霉毒素Β1氧化石墨烯免疫层析试纸条在大米样品检测中的应用:
[0091 ] 称取已磨细的1#和2#待测玉米样品5.0g,加入体积浓度为70 %的甲醇水溶液15mL，混勾，祸旋提取5分钟，在4000rmp离心lOmin，取上层清液lmL，氮吹近干后用lmL体积浓度为10 %的甲醇水溶液复溶，0.22 μ m滤膜过滤得到待测样品溶液。取羧基化氧化石墨烯标记的抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体反应试剂0.4 μ L，用缓释液稀释定容到100 μ L，混匀，得到检测液。取100 μ L待测样品溶液与100 μ L检测液混匀，室温放置半分钟后，逐滴加入一黄曲霉毒素Β1氧化石墨烯免疫层析试纸条的样品垫，其作为检测试纸条，同时取200 μ L水做为阴性对照液，逐滴加入另一黄曲霉毒素Β1氧化石墨烯免疫层析试纸条的样品垫，其作为对照试纸条，15分钟后读取结果；
[0092]检测结果:1#检测试纸条的质控线显示出棕黑色线条，而检测线不显色，见图3-1，由此判定.Λ#待测样品溶液中的黄曲霉毒素Β1含量等于或高于2ng/mL ;经换算可得1#待测样品中黄曲霉毒素B1的含量等于或高于6ng/g。经液相色谱质谱(LC-MS/MS)检测，1#待测样品中黄曲霉毒素B1的含量7.38ng/g。
[0093]2#检测试纸条的质控线显示出棕黑色线条，而检测线颜色比对照试纸条检测线颜色浅，见图3-2，由此判定:2#待测样品溶液中的黄曲霉毒素B1含量高于或等于0.6ng/mL并低于2ng/mL ;经换算可得2#待测样品中黄曲霉毒素B1的含量高于或等于1.8ng/g并低于6ng/g。经液相色谱质谱(LC-MS/MS)检测，2#待测样品中黄曲霉毒素B1的含量3.78ng/g°
[0094]所述的缓释液是按照下述方法配制得到的:硼酸1.2368g，溶解在80mL水溶液中，用氢氧化钠调节pH值到8.13，加水定容到100mL，再加入2.0g牛血清白蛋白，0.lmL吐温20，1.0g聚乙二醇-6000和0.02g叠氮化钠，使之充分溶解，0.22 μπι滤膜过滤。
[0095]实施例2
[0096]快速检测黄曲霉毒素Β1氧化石墨烯免疫层析试纸条的制备方法，包括以下步骤:
[0097]层析试纸条的制备:
[0098](1)吸水垫的制备
[0099]将吸水纸剪裁成长40mm宽4mm的规格，即得吸水垫；
[0100](2)检测垫的制备
[0101]检测线的包被:
[0102]将黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白的偶联物AFB1-BSA用包被缓冲液配制成0.8mg/mL的包被液；于距样品垫上沿7mm的位置，用线喷方式将其横向包被于硝酸纤维素膜上，得到检测线，每厘米检测线所需的黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白的偶联物的包被量为480ng，然后于37°C条件下干燥30分钟；
[0103]所述的包被缓冲液为:1.0g牛血清白蛋白，0.02g叠氮化钠，0.8g氯化钠，0.29g十二水磷酸氢二钠，0.02g氯化钾，0.02g磷酸二氢钾，加水定容至100mL所得；
[0104]质控线的包被:
[0105]将兔抗鼠多克隆抗体用包被缓冲液配成0.6mg/mL的包被液；于距检测线8mm的位置，用线喷方式将其横向包被于硝酸纤维素膜上，得到质控线，每厘米质控线所需的兔抗鼠多克隆抗体的包被量为360ng，然后于37°C条件下干燥30分钟；
[0106]所述的包被缓冲液为:0.02g叠氮化钠，0.8g氯化钠，0.29g十二水磷酸氢二钠，0.02g氯化钾，0.02g磷酸二氢钾，加水定容至100mL所得；
[0107]所述的硝酸纤维素膜长25mm，宽4臟。
[0108](3)样品垫的制备:
[0109]将玻璃纤维膜剪裁成长14mm宽4mm的规格，放入封闭液中浸湿，取出，于37°C条件下干燥4小时，得样品垫，然后置干燥器中室温保存；
[0110]所述的封闭液为:2.0g卵清白蛋白，2.5g鹿糖，0.lmL辛基苯基聚氧乙稀醚，0.3g聚乙烯吡咯烷酮-K30，0.02g叠氮化钠，0.8g氯化钠，0.29g十二水磷酸氢二钠，0.02g氯化钾，0.02g磷酸二氢钾，加水定容至lOOmL所得；
[0111](4)试纸条的组装:在纸板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，交叠长度为3_，即得层析试纸条，见图1和图2。
[0112]羧基化氧化石墨烯标记的抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体反应试剂的制备，基本同实施例2，只是:
[0113]取0.4mg羧基化氧化石墨烯，溶解在0.8mL标记反应液中，冰浴超声10分钟；加入20 μ L 15mg/mL的1-(3- 二甲氨基丙基)_3_乙基碳二亚胺盐酸盐水溶液，剧烈振摇15min后；缓慢加入40 μ L lmg/mL的抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体水溶液，继续振摇8h ;加入0.lg/mL的牛血清白蛋白水溶液100 yL，继续振摇12h后；13000r/min离心30min，弃去上清液，保留沉淀；加入lmL标记洗涤液，将沉淀重悬，再以13000r/min离心30min，弃去上清液，重复操作3次；加入0.2mL标记保存液，将沉淀重悬，置4°C冰箱备用。
[0114]所述的15mg/mL的1_(3_ 二甲氨基丙基)_3_乙基碳二亚胺盐酸盐水溶液为15mg1_(3- 二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺盐酸盐溶解在lmL纯水中制成；
[0115]所述的lmg/mL抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体水溶液为lmg抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体溶解在lmL纯水中制成；
[0116]所述的0.lg/mL牛血清白蛋白水溶液为10g牛血清白蛋白溶解在lOOmL纯水中，0.22 μπι滤膜过滤所得；
[0117]所述的标记反应液是按照下述方法配制得到的:硼酸0.3092g，在800mL水溶液中完全溶解，用氢氧化钠调节pH值到8.13，加水定容到1L，0.22 μπι滤膜过滤所得。
[0118]所述的标记洗涤液是按照下述方法配制得到的:硼酸0.03092g，溶解在80mL水溶液中，用氢氧化钠调节pH值到8.13，加水定容到100mL，再加入牛血清白蛋白1.0g，叠氮化钠0.02g，使之充分溶解，0.22 μπι滤膜过滤所得。
[0119]所述的标记保存液是按照下述方法配制得到的:硼酸0.6184g，溶解在80mL水溶液中，用氢氧化钠调节pH值到8.1