施例所述的对10批霍山石斛药材建立的HPLC指纹图谱。
【具体实施方式】
[0042] 如图1-19所示，本发明实施例所述的一种石斛特征指纹图谱的建立方法。下面以 具体实验案例为例来说明【具体实施方式】，应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解 释本发明，并不用于限定本发明。
[0043] 仪器和试剂：仪器：Agilentl200series高效液相色谱仪（包括低压二元梯度栗 G1312A，柱温箱G1316A，二极管阵列检测器G1315B，Chemstation化学工作站，美国Agilent 科技有限公司），100g手提式粉碎机（广州旭朗机械设备有限公司）Milli-Q Synthesis 超纯水纯化系统（Millipore公司），RQ-250B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公 司），PB303-N电子天平（MEETTLER TOLEDO, 0· OOlg)，0· 45 μ m微孔滤头（津腾公司）。试 剂：试剂：乙腈、甲醇（色谱纯，美国Fisher scientific公司）；其它试剂为分析纯；超纯水 (MilliQ超纯水，过0. 45 μ m微孔滤膜）；乙酸（北京东方精细化工品有限公司）。
[0044] 实施例1 :铁皮石斛特征指纹图谱的建立
[0045] (1)供试品溶液（即标准品溶液）的制备：取铁皮石斛干燥样品，用粉碎机粉碎， 过药典筛（孔径〇. 335mm)，精密称取铁皮石斛粉末I. 000g，置于100mL锥形瓶中，分别加入 50mL 75%甲醇（V水：V甲醇=25:75)，室温下超声30min后取出，过滤，滤液旋蒸浓缩至 干，用75%甲醇溶剂（V水：V甲醇=25:75)溶解，最后转移至5ml容量瓶中定容，摇匀，以 0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得标准品溶液。
[0046] (2)对照品溶液的制备：精密称取夏佛托苷对照品0. 164mg，用75 %甲醇（V水：V 甲醇=25:75)溶解稀释，制备成浓度为16. 4 μ g/ml夏佛托苷对照品溶液。
[0047] (3)标准指纹图谱的测定：分别精密吸取标准样品溶液和对照品溶液，分别注入 高效液相色谱仪进行测定，以对照品夏佛托苷色谱峰作为指纹图谱的参照峰，夏佛托苷色 谱峰如图1所示，计算标准样品各特征峰的相对保留时间和保留峰面积，制定得到标准指 纹图谱；
[0048] 表1流动相的梯度洗脱变化表
[0050] (4)采用高效液相色谱仪进行测定的色谱条件与系统适用性实验为：色谱分离柱 填料Alltima C18色谱柱（250mmX4. 6mm，5um)，流动相：包括流动相A和流动相B，流动相A 为0. 4%乙酸+20mmol/L乙酸铵水溶液，流动相B为乙腈，；流速lml/min，检测波长280nm， 柱温 30°C;采用梯度洗脱方式：Omin - 12min - 35min - 45min - 60min - 80min，乙腈 2% -15%- 24%- 36%- 75%- 95% (即米用梯度洗脱方如表1所不），后运彳丁 IOmin ;在 此条件下分析标准品溶液，得到铁皮石斛的指纹图谱，图3为铁皮石斛的HPLC指纹图谱。
[0051] (5)按照本发明提供的方法，对10批铁皮石斛药材建立了 HPLC指纹图谱（如图2 所示），表2为10批石斛相似度结果，根据10批次样品的指纹图谱，制定铁皮石斛的特征指 纹图谱。
[0052] 表2 10批铁皮石斛相似度结果
[0054] 实施例2 :金钗石斛特征指纹图谱的建立
[0055] (1)供试品溶液（即标准品溶液）的制备：取金钗石斛干燥样品，用粉碎机粉碎， 过药典筛（孔径〇. 335mm)，精密称取金钗石斛粉末I. 000g，置于100mL锥形瓶中，分别加入 50mL 75%甲醇（V水：V甲醇=25:75)，室温下超声30min后取出，过滤，滤液旋蒸浓缩至 干，用75%甲醇溶剂（V水：V甲醇=25:75)溶解，最后转移至5ml容量瓶中定容，摇匀，以 0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得标准品溶液。
[0056] 步骤（2)~⑷同实施例1所示，便得到金钗石斛的指纹图谱，图4为铁皮石斛的 HPLC指纹图谱。
[0057] (5)按照本发明提供的方法，对10批金钗石斛药材建立了 HPLC指纹图谱（如图5 所示），表3为10批金钗石斛相似度结果，根据10批次样品的指纹图谱，制定金钗石斛的特 征指纹图谱。
[0058] 表3 10批金钗石斛指纹图谱相似度评价结果
[0060] 实施例3 :齿瓣石斛特征指纹图谱的建立
[0061] (1)供试品溶液（即标准品溶液）的制备：取齿瓣石斛干燥样品，用粉碎机粉碎， 过药典筛（孔径〇. 335mm)，精密称取齿瓣石斛粉末I. 000g，置于100mL锥形瓶中，分别加入 50mL 75%甲醇（V水：V甲醇=25:75)，室温下超声30min后取出，过滤，滤液旋蒸浓缩至 干，用75%甲醇溶剂（V水：V甲醇=25:75)溶解，最后转移至5ml容量瓶中定容，摇匀，以 0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得标准品溶液。
[0062] 步骤（2)~（4)同实施例1所示，便得到齿瓣石斛的指纹图谱，图6为齿瓣石斛的 HPLC指纹图谱。
[0063] (5)按照本发明提供的方法，对10批齿瓣石斛药材建立了 HPLC指纹图谱（如图7 所示），表4为10批齿瓣石斛相似度结果，根据10批次样品的指纹图谱，制定齿瓣石斛的特 征指纹图谱。
[0064] 表4 10批齿瓣石斛指纹图谱相似度评价结果
[0066] 实施例4 :兜唇石斛特征指纹图谱的建立
[0067] (1)供试品溶液（即标准品溶液）的制备：取兜唇石斛干燥样品，用粉碎机粉碎， 过药典筛（孔径〇. 335mm)，精密称取兜唇石斛粉末I. 000g，置于100mL锥形瓶中，分别加入 50mL 75%甲醇（V水：V甲醇=25:75)，室温下超声30min后取出，过滤，滤液旋蒸浓缩至 干，用75%甲醇溶剂（V水：V甲醇=25:75)溶解，最后转移至5ml容量瓶中定容，摇匀，以 0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得标准品溶液。
[0068] 步骤⑵~⑷同实施例1所示，便得到兜唇石斛的指纹图谱，图8为兜唇石斛的 HPLC指纹图谱。
[0069] (5)按照本发明提供的方法，对10批兜唇石斛药材建立了 HPLC指纹图谱（如图9 所示），表5为10批齿瓣石斛相似度结果，根据10批次样品的指纹图谱，制定兜唇石斛的特 征指纹图谱。
[0070] 表5 10批兜唇石斛指纹图谱相似度评价结果
[0072] 实施例5 :霍山石斛特征指纹图谱的建立
[0073] (1)供试品溶液（即标准品溶液）的制备：取霍山石斛干燥样品，用粉碎机粉碎， 过药典筛（孔径〇. 335mm)，精密称取霍山石斛粉末I. 000g，置于100mL锥形瓶中，分别加入 50mL 75%甲醇（V水：V甲醇=25:75)，室温下超声30min后取出，过滤，滤液旋蒸浓缩至 干，用75%甲醇溶剂（V水：V甲醇=25:75)溶解，最后转移至5ml容量瓶中定容，摇匀，以 0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得标准品溶液。
[0074] 步骤⑵~⑷同实施例1所示，便得到霍山石斛的指纹图谱，图18为霍山石斛 的HPLC指纹图谱。
[0075] (5)按照本发明提供的方法，对10批霍山石斛药材建立了 HPLC指纹图谱（如图 19所示），表6为10批齿瓣石斛相似度结果，根据10批次样品的指纹图谱，制定霍山石斛 的特征指纹图谱。
[0076] 表6 10批齿瓣石斛指纹图谱相似度评价结果
[0078] 实施例6 :流苏石斛特征指纹图谱的建立
[0079] (1)供试品溶液（即标准品溶液）的制备：取流苏石斛干燥样品，用粉碎机粉碎， 过药典筛（孔径〇. 335mm)，精密称取流苏石斛粉末I. 000g，置于100mL锥形瓶中，分别加入 50mL 75%甲醇（V水：V甲醇=25:75)，室温下超声30min后取出，过滤，滤液旋蒸浓缩至 干，用75%甲醇溶剂（V水：V甲醇=25:75)溶解，最后转移至5ml容量瓶中定容，摇匀，以 0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得标准品溶液。
[0080] 步骤（2)~（4)同实施例1所示，便得到流苏石斛的指纹图谱，图10为流苏石斛 的HPLC指纹图谱。
[0081] (5)按照本发明提供的方法，对10批流苏石斛药材建立了 HPLC指纹图谱（如图 11所示），表7为10批流苏石斛相似度结果，根据10批次样品的指纹图谱，制定流苏石斛 的特征指纹图谱。
[0082] 表7 10批流苏石斛指纹图谱相似度评价结果
[0084] 实施例7 :鼓槌石斛特征指纹图谱的建立
[0085] (1)供试品溶液（即标准品溶液）的制备：取鼓槌石斛干燥样品，用粉碎机粉碎， 过药典筛（孔径〇. 335mm)，精密称取鼓槌石斛粉末I. 000g，置于100mL锥形瓶中，分别加入 50mL 75%甲醇（V水：V甲醇=25:75)，室温下超声30min后取出，过滤，滤液旋蒸浓缩至 干，用75%甲醇溶剂（V水：V甲醇=25:75)溶解，最后转移至5ml容量瓶中定容，摇匀，以 0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得标准品溶液。
[0086] 步骤（2)~⑷同实施例1所示，便得到鼓槌石斛的指纹图谱，图12为鼓槌石斛 的HPLC指纹图谱。
[0087] (5)按照本发明提供的方法，对10批鼓槌石斛药材建立了 HPLC指纹图谱（如图 13所示