，在600r/min下，将辣根过氧化物酶添加至壳聚糖聚多巴胺悬浮液中，随后在200W的超声辅助振荡lOmin，随后将其置于4°C冰箱中静置10h，制备得辣根过氧化物酶固定壳聚糖聚多巴胺溶液;将玻碳电极分别用0.3和0.4μπι的Al2O3粉末进行抛光，并用无水乙醇和去离子水分别洗涤3次，随后用氮气吹干制备得抛光电极，用上述制备的辣根过氧化物酶固定壳聚糖聚多巴胺溶液滴加至抛光电极中，在3°C下冷冻干燥20h，随后继续滴加质量浓度为0.1%的Naf 1n溶液滴加至上述处理完的电极上，在3?5 °C下冷冻干燥6?8h，即可制备得一种聚磷酸酯复合聚多巴胺生物传感器。
[0008]实例2
首先按重量份数计，选取20份壳聚糖粉末、20份质量分数为20%的醋酸溶液、35份的环氧大豆油和25份的聚山梨酯搅拌混合12min后，用0.8mol/L的NaOH溶液调节pH至9，加热升温至60°C反应2.5h，制备得壳聚糖溶液;待升温反应完成后，在400r/min下通入氮气12min，随后继续搅拌并添加壳聚糖溶液总质量1%的盐酸多巴胺，搅拌反应27min后将其置于250W的超声振荡处理1min，随后继续搅拌反应22h;待反应完成后，停止加热并使其自然冷却至25°C，随后将其置于700r/min下离心处理12min，收集混合物并用蒸馏水洗涤4次，并按固液质量比1:5，重新分散至蒸馏水中，制备得壳聚糖聚多巴胺悬浮液;按壳聚糖聚多巴胺悬浮液和辣根过氧化物酶质量比为8:1，在700r/min下，将辣根过氧化物酶添加至壳聚糖聚多巴胺悬浮液中，随后在250W的超声辅助振荡12min，随后将其置于5°C冰箱中静置llh，制备得辣根过氧化物酶固定壳聚糖聚多巴胺溶液;将玻碳电极分别用0.3和0.4μπι的Al2O3粉末进行抛光，并用无水乙醇和去离子水分别洗涤4次，随后用氮气吹干制备得抛光电极，用上述制备的辣根过氧化物酶固定壳聚糖聚多巴胺溶液滴加至抛光电极中，在4°C下冷冻干燥22h，随后继续滴加质量浓度为0.1%的Naf 1n溶液滴加至上述处理完的电极上，在4 °C下冷冻干燥7h，即可制备得一种聚磷酸酯复合聚多巴胺生物传感器。
[0009]实例3
首先按重量份数计，选取35份壳聚糖粉末、15份质量分数为20%的醋酸溶液、30份的环氧大豆油和20份的聚山梨酯搅拌混合15min后，用0.8mol/L的NaOH溶液调节pH至10，加热升温至60°C反应3h，制备得壳聚糖溶液;待升温反应完成后，在500r/min下通入氮气15min，随后继续搅拌并添加壳聚糖溶液总质量1%的盐酸多巴胺，搅拌反应30min后将其置于300W的超声振荡处理1min，随后继续搅拌反应24h;待反应完成后，停止加热并使其自然冷却至30°C，随后将其置于800r/min下离心处理15min，收集混合物并用蒸馏水洗涤5次，并按固液质量比1:5，重新分散至蒸馏水中，制备得壳聚糖聚多巴胺悬浮液;按壳聚糖聚多巴胺悬浮液和辣根过氧化物酶质量比为8:1，在800r/min下，将辣根过氧化物酶添加至壳聚糖聚多巴胺悬浮液中，随后在300W的超声辅助振荡15min，随后将其置于4?5°C冰箱中静置12h，制备得辣根过氧化物酶固定壳聚糖聚多巴胺溶液;将玻碳电极分别用0.3和0.4μπι的Al2O3粉末进行抛光，并用无水乙醇和去离子水分别洗涤5次，随后用氮气吹干制备得抛光电极，用上述制备的辣根过氧化物酶固定壳聚糖聚多巴胺溶液滴加至抛光电极中，在5°C下冷冻干燥24h，随后继续滴加质量浓度为0.1%的Naf 1n溶液滴加至上述处理完的电极上，在5 °C下冷冻干燥8h，即可制备得一种聚磷酸酯复合聚多巴胺生物传感器。
【主权项】
1.一种聚磷酸酯复合聚多巴胺生物传感器的制备方法，其特征在于具体制备步骤为: (1)按重量份数计，选取5?35份壳聚糖粉末、15?30份质量分数为20%的醋酸溶液、30?40份的环氧大豆油和20?25份的聚山梨酯搅拌混合10?15min后，用0.8mol/L的NaOH溶液调节pH至8?10，加热升温至60°C反应2?3h，制备得壳聚糖溶液； (2)待升温反应完成后，在300?500r/min下通入氮气10?15min，随后继续搅拌并添加壳聚糖溶液总质量1%的盐酸多巴胺，搅拌反应25?30min后将其置于200?300W的超声振荡处理1min，随后继续搅拌反应20?24h; (3)待反应完成后，停止加热并使其自然冷却至20?30°C，随后将其置于600?800r/min下离心处理10?15min，收集混合物并用蒸馈水洗涤3?5次，并按固液质量比1:5，重新分散至蒸馏水中，制备得壳聚糖聚多巴胺悬浮液； (4)按壳聚糖聚多巴胺悬浮液和辣根过氧化物酶质量比为8:1，在600?800r/min下，将辣根过氧化物酶添加至壳聚糖聚多巴胺悬浮液中，随后在200?300W的超声辅助振荡10?15min，随后将其置于4?5°C冰箱中静置10?12h，制备得辣根过氧化物酶固定壳聚糖聚多巴胺溶液； (5)将玻碳电极分别用0.3和0.4μπι的Al2O3粉末进行抛光，并用无水乙醇和去离子水分别洗涤3?5次，随后用氮气吹干制备得抛光电极，用上述制备的辣根过氧化物酶固定壳聚糖聚多巴胺溶液滴加至抛光电极中，在3?5°C下冷冻干燥20?24h，随后继续滴加质量浓度为0.1%的Naf 1n溶液滴加至上述处理完的电极上，在3?5°C下冷冻干燥6?8h，即可制备得一种聚磷酸酯复合聚多巴胺生物传感器。
【专利摘要】本发明涉及一种聚磷酸酯复合聚多巴胺生物传感器的制备方法，属于生物传感器制备领域。针对生物传感器制备过程中，需要大量的溶剂，且制备的生物器与生物相容性较差，不能与细胞进行有效的粘附的问题，通过壳聚糖生物材料作为基层，复合固定辣根过氧化物酶，再在碱性条件下，聚多巴胺可在各种材料的表面迅速成膜，其中含有大量亲水的羟基和氨基官能团，提高材料表面的亲水性和化学多功能性，本发明制备的生物传感器与生物相容性较好，植入后无明显排异反应；通过壳聚和聚多巴胺制备生物传感器，绿色环保无污染。
【IPC分类】G01N27/327
【公开号】CN105628766
【申请号】CN201510997506
【发明人】高玉梅, 高力群
【申请人】常州亚环环保科技有限公司
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2015年12月28日