流动相乙腈:水，添加40mg/kg角鲨烯的样品）。 [0058] 图20 C18柱检测样品的色谱图（流动相甲醇：乙腈，75:25，流速1. OmL/min，柱温30 °C，波长210nm，5mg/kg角藍稀标样）。
[0059]图21 C18柱检测样品的色谱图（流动相甲醇：乙腈，75:25，流速1. OmL/min，柱温30 。(：，波长210nm，空白对照）。
[0060] 图22 C18柱检测样品的色谱图（流动相甲醇：乙腈，75:25，流速1. OmL/min，柱温30 °C，波长210nm，添加40mg/kg角藍稀的样品）。
[0061 ] 图23 C18柱检测样品的色谱图（流动相甲醇：乙腈，70:30，流速0.8mL/min，柱温20 。(：，波长210nm，空白对照）。
[0062]图24 C18柱检测样品的色谱图（流动相流动相甲醇：乙腈，70:30，流速0.8mL/min， 柱温20°C，波长210nm，添加40mg/kg角藍稀的样品）。
【具体实施方式】
[0063]下面结合附图和具体实施例进一步说明本发明方法。下述实施例和附图仅用于示 例性说明，不能理解为对本发明的限制。除非特别说明，下述实施例中使用的试剂原料为常 规市购或商业途径获得的试剂原料，除非特别说明，下述实施例中使用的方法和设备为本 领域常规使用的方法和设备。为方便说明，本发明实施例中使用的仪器和试剂说明如下，但 并不因此限定本发明。
[0064]仪器：
[0065] (1)高效液相色谱仪HPLCXAgilentllOO)，配备:脱气栗、四元栗、自动进样器、柱温 箱和紫外检测器(美国Agilent公司）
[0066] (2)全温控摇床(江苏金坛市荣华仪器有限公司）
[0067] (3)电子天平(BSA2245，d = 0.1mg，赛多利斯科学仪器有限公司）
[0068] (4)旋转真空蒸发器:ZFQ-3型(上海亚荣生化仪器厂）
[0069] (5)真空抽滤栗:SHZ-Dm型(巩义市予华仪器厂）
[0070] (6) IK.,VMS3baSic涡旋仪(MS3BS25, IKA)
[0071] (7)RM2〇OA 吸烟机(德国）
[0072] (8)固相萃取柱(varian)
[0073] (9)各种实验室通用玻璃器皿
[0074] 试剂：
[0075] (1 )99 · 8%角鲨烯对照品（中国药检所）
[0076] (2)甲醇(色谱纯）
[0077] (3)乙腈(色谱纯）
[0078] (4)正己烷(分析纯）
[0079] (5)三氯甲烷(氯仿，分析纯）
[0080] (6)石油醚(分析纯）
[0081] (7)丙酮(分析纯）
[0082] (8)0·22μπι 有机滤膜
[0083] (9)净化剂:PSA(Welchrom)，硅胶(200-300目，青岛海洋化工厂）
[0084] (10)商品烟(从广西中烟工业有限责任公司产品中随机性抽取）
[0085] 实施例1
[0086] 1.角鲨烯标准溶液的配制
[0087] 准确称取O.lg角鲨烯标准品，精确至O.OOOlg，用乙腈（色谱纯）溶解后定容至 100mL配制成1000mg/L角鲨烯标准溶液，充分振荡摇匀。所配标准溶液置于4°C保存。
[0088] 2.标准曲线的建立
[0089]采用系列稀释法，分别配制浓度为0.5，l，2,5，10mg/L的角鲨烯标准溶液于高效液 相色谱上检测；以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标建立标准曲线，见图1所示。求出角鲨 烯浓度与相应峰面积的线性回归方程，y = 44.61 x-3.2993，R2 = 0.9996。标准角鲨烯色谱图 见图2和图3所示。
[0090] 3.液相色谱条件
[0091] (1)高效液相色谱仪HPLC(AgilentllOO)配紫外检测器
[0092] (2)色谱柱：C18 柱，5ym，4.6X25〇mm
[0093] ⑶柱温：2(TC
[0094] (4)流动相类型：甲醇：乙腈(V:V = 70:30)
[0095] (5)流动相流速:0.8mL/min
[0096] (6)检测波长为：210nm
[0097] (7)进样量：10yL
[0098] 4.样品含量计算
[0099] 样品角鲨烯浓度(mg/L)可根据角鲨烯标准曲线及线性回归方程计算得出。
[0101 ] C:卷烟主流烟气粒相物中角藍稀含量，mg/kg;
[0102] Co:样品实际测得角鲨烯浓度mg/L;
[0103] V1:滤片提取液体积，mL;
[0104] V2:移取提取液体积，mL;
[0105] V3:最终定容体积，mL;
[0106] m:抽吸烟支烟丝总重量，kg。
[0108] 5.烟气固粒相物收集
[0109] 按照GB/T 16450标准，抽吸卷烟，每组抽吸10支，每支卷烟烟丝重0.5g，使用 RM200A吸烟机抽吸。Φ92πιπι剑桥滤片放入250mL锥形瓶中，添加1000mg/L角鲨烯标准液 0.2mL，分别加如不同的提取剂200mL，则样品溶液中添加角鲨烯的量为lmg/L，换算为烟丝 含量则为40mg/kg。常温下用摇床以130转/min振荡20min，4°C保存或者待测。按照前述检测 条件进行检测。
[0110] 6.结果与分析
[0111] 6.1不同提取剂提取效率比较
[0112]试验比较了不同的提取剂的提取效果，本实施例以正己烷、石油醚、氯仿和丙酮分 别作为提取剂进行说明，其中正己烷和石油醚回收率相对较低，低于70%，氯仿和丙酮回收 率较高，回收率均大于70%，达到回收率要求，添加量和回收率均以烟丝含量表示。不同提 取剂提取效率见表1所示。
[0113] 表1:不同提取剂的提取效率比较
[0114]
[0115] 丙酮回收率最高，达99.7% ;氯仿次之，回收率有77% ;正己烷和石油醚最低，低于 30% 〇
[0116] 不同提取液烟气添加和未添加角鲨烯的色谱图，见图4~7所示。
[0117] 6.2净化剂净化效果的比较
[0118] 6.2.1样品前处理方法
[0119] (一)未经净化处理提取液作为待测液
[0120]取丙酮提取液10mL，旋转蒸发至干，2mL色谱乙腈定容，过0.22μπι滤膜，待测或4°C 保存。
[0121]未经净化处理测定效果见图8和图9所示。样品未经净化处理杂质较多，对目标物 有干扰，致使目标物不能准确定性和定量，而且对色谱柱污染严重，长时间分析会使色谱柱 柱效降低，严重的会堵塞色谱柱。
[0122](二)提取液经过再处理后作为待测液
[0123] 丙酮和氯仿做提取剂时，分别用氯仿和丙酮淋洗SPE柱，洗脱杂质较多，故选择将 10mL丙酮和氯仿提取液旋转蒸发至干，用3mL正己烷溶解，用10mL正己烷分三次洗涤，得到 正己烷溶液，将正己烷溶液过柱。净化效果见下图12(丙酮提取液直接过柱)和图13(正己烷 溶解后过柱)所示。
[0124] (三)经净化剂处理
[0125] 采用PSA(N_丙基乙二胺固相吸附剂)固相萃取(PSA)柱
[0126] 装柱:称取0.3gPSA，进行装柱，上方加1. Og左右无水硫酸钠(防止溶液冲洗PSA，造 成凹凸不平）。
[0127] 上样:取丙酮提取液10mL，进行过柱。
[0128] 洗脱:用3mL丙酮的提取剂洗脱。
[0129] 收集洗脱液，旋转蒸发至干，2mL色谱乙腈定容，过0.22μπι滤膜，待测或4°C保存。收 集的洗脱液，按前述液相色谱条件进行测定。
[0130] 通过以上净化处理后得出，未净化样品杂质峰较多，杂质与目标物不能完全分离。 样品经PSA柱净化后杂质明显减少，样品分离效果好，可以准确定性，净化效果见图10和11 所示。过柱后正己烷和石油醚回收率较低，丙酮和氯仿回收率可达7