0%。
[0131] 实施例2不同检测条件的比较实验
[0132] 为了提高分析效率，实验中设计了不同色谱柱不同流动相及不同比例对分离效果 的影响。为免一一赘述，以下为C18柱和C8柱为例进行说明。
[0133] -、C8 柱：
[0134] (一）、甲醇：乙腈不同比例有：
[0135] (1)、甲醇：乙腈比例为70:30，流速1. OmL/min，柱温30°C，波长210nm。
[0136] 甲醇和乙腈做流动相，目标物出峰时间在9min左右，出峰时间过早，杂质干扰严 重，分离效果不理想。
[0137] (2)、调整流动相比例及色谱条件
[0138] 甲醇：乙腈比例为5:95,流速(h7mL/min，柱温35°C，波长210nm。
[0139] 分析结果显示，在目标物出峰时间内杂质影响严重，杂质峰与目标峰重叠，未达到 分离要求，影响目标物定量。分析结果见图14、15、16所示。
[0140](二）、用C8柱分离甲醇和乙腈作为流动相及不同比例时，目标峰的分离效果不理 想，杂质干扰严重。现以乙腈和水做流动相并调整比例进行分离。
[0141] 乙腈:水，不同比例有:96:4,95:5,94:6,93 :7,92:8，流速1.〇1111711^11，柱温30°(：。
[0142] 流动相乙腈:水，比例94:6，流速1. OmL/min，柱温30°C。
[0143] 以乙腈和水做流动相，目标物峰面积明显增大，空白对照组与样品添加组峰面积 差异不明显。经分离分析验证得知，以乙腈和水做流动相，杂质和目标物同时出峰，色谱峰 重叠。
[0144] 代表性色谱图见图17、18、19所示。
[0145] 经过大量实验对比分析总结，发现使用C8柱，乙腈和水作为流动相且不同比例时， 空白对照和添加样品峰面积均比C18柱异常高。相同样品用C18柱，甲醇和乙腈做流动相，在 目标物出峰处出现两个重叠峰，不能完全分离，两峰峰面积与C8柱测得峰面积几乎相同。所 以，用C8柱，乙腈和水做流动相，目标物和杂质可能同时出峰，色谱峰完全重叠。
[0146] 二、C18 柱：
[0147] 用C8柱分离目标物未达到分离要求，不能将杂质峰和目标峰完全分离开来，由于 杂质干扰，目标物不能准确定性和定量。本实施例采用C18柱以乙腈:水、甲醇：乙腈做流动 相进行分离的实施例进行说明本发明方法。
[0148] (一）、乙腈:水，不同比例有:95:5,流速1.5mL/min，柱温30°C。
[0149] C18柱使用乙腈和水作为流动相，目标物出峰时间大于90min，分析时间过长。
[0150] (二）、甲醇：乙腈不同比例对出峰时间的影响，设计有：75: 25，70 :30，60:40，40 : 60,30:70 等。
[0151] 1、甲醇和乙腈做流动相，流速1.0mL/min，柱温30°C，波长210nm。
[0152] 甲醇和乙腈做流动相，以多种比例在流速1.0mL/min，柱温30°C，波长210nm下，进 行分离，目标物分离效果都未达到要求，杂质峰干扰目标物定性和定量。
[0153] 分离效果见表2:
[0154] 表2.甲醇和乙腈做流动相，不同比例分离效果比较：
[0157] 代表性色谱图，见图20、图21、图22所示。
[0158] 2、调整流速和柱温：
[0159] 经过大量实验总结发现，在流动相甲醇：乙腈=70:30，流速0.8mL/min，柱温20°C， 波长210nm的条件下，分离效果明显提高，目标物能够与杂质分离，分离度R>0.9,已可以对 目标物进行准确定性和定量。代表性色谱图见图23和图24所示。
[0160] 本发明针对卷烟烟气中的角鲨烯的检测建立了完整系统的检测方法，首先建立了 丙酮或氯仿提取+正己烷溶解和洗涤的样品前处理方法，在保证超过77 %的提取率前提下， 科学去除杂质，所得样品处理物经过柱处理后，杂质影响明显下降，目标峰不受杂质影响， 目标物达到分离要求，具有准确、快速、高灵敏、重现性好、回收率高等优点，不仅符合定性 要求，而且符合定量要求。
【主权项】
1. 一种卷烟烟气中角鲨烯的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：51. 样品经前处理得到样品液；52. 配制标准溶液，建立标准曲线；53. 检测:取样品液注入高效液相色谱仪检测；54. 采用外标法，根据吸收峰面积计算角鲨烯含量； 所述检测的检测条件为： (1) 高效液相色谱仪HPLC(Agi lent 1100)配紫外检测器； (2) 色谱柱:C18 柱，5ym，4.6X250mm; (3) 柱温：20 °C; (4) 流动相类型：甲醇：乙腈的体积比为70:30; (5) 流动相流速:0.8 mL/min; (6) 检测波长为：210 nm; (7) 进样量：10 uL; 其中，步骤S1包括以下步骤：511. 收集烟气固粒相物并提取:抽吸卷烟，采用滤片收集烟气固粒相物；512. 提取:将收集了烟气固粒相物剑桥滤片放入锥形瓶中，加入提取剂，常温下振荡提 取，得提取液；513. 净化:取步骤S12所得提取液，经过再处理后得到的溶液再经过柱，丙酮洗脱，收集 洗脱液，旋转蒸发至干，用色谱乙腈定容，过〇. 22μπι滤膜即得待测样品液； 步骤S12所述提取剂为丙酮或氯仿； 步骤S13所述再处理指的是将步骤S12所得提取液旋转蒸发至干，用正己烷溶解，再用 正己烷洗涤； 步骤S13所述过柱是采用Ν-丙基乙二胺固相萃取柱。2. 根据权利要求1所述基于高效液相色谱法检测卷烟烟气中角鲨烯的方法，其特征在 于，步骤S2所述配制标准溶液的方法是准确称取O.lg角鲨烯标准品，精确至0.0001 g，用 乙腈溶解后定容至100 mL配制成1000 mg/L的角鲨烯标准溶液，充分振荡摇匀，所配标准溶 液置于4°C保存，待用。3. 根据权利要求1所述基于高效液相色谱法检测卷烟烟气中角鲨烯的方法，其特征在 于，步骤S2所述角鲨烯标准曲线的建立的方法是：采用系列稀释法，分别配制成浓度为 0.002，0.01，0.05，0.2，0.5 mg/mL的角鲨烯标准溶液于高效液相色谱进样检测；以进样浓 度为横坐标，峰面积为纵坐标建立标准曲线，求出角鲨烯浓度与相应峰面积的线性回归方 程。4. 根据权利要求1所述基于高效液相色谱法检测卷烟烟气中角鲨烯的方法，其特征在 于，步骤S11所述抽吸卷烟是按照GB/T 16450标准操作。5. 根据权利要求1所述基于高效液相色谱法检测卷烟烟气中角鲨烯的方法，其特征在 于，步骤SI 1所述滤片为Φ 92mm的剑桥滤片。6. 根据权利要求1所述基于高效液相色谱法检测卷烟烟气中角鲨烯的方法，其特征在 于，步骤S12所述振荡提取是用摇床以130转/min振荡20min。7. 根据权利要求1所述基于高效液相色谱法检测卷烟烟气中角鲨烯的方法，其特征在 于，步骤S13所述洗涤的次数为3次。8.根据权利要求1所述基于高效液相色谱法检测卷烟烟气中角鲨烯的方法，其特征在 于，步骤S13所述N-丙基乙二胺固相固相萃取柱的装柱方法为称取0.3gN-丙基乙二胺固相 吸附剂装柱，其上方加1. 〇g无水硫酸钠。
【专利摘要】本发明公开了一种卷烟烟气中角鲨烯的检测方法。收集烟气固粒相物用丙酮提取，将所得提取液再处理和过N-丙基乙二胺固相萃取柱处理后进行高效液相色谱检测。本发明建立了一种高效液相色谱法检测卷烟烟气中角鲨烯的检测方法，科学的前处理方法保障了较高的提取效率，再经硅胶吸附剂科学净化，很好地去除杂质，获得的样品液在本发明整体优化的检测条件下，角鲨烯色谱峰分离较好，具有准确、快速、高灵敏、重现性好、回收率高等优点，不仅符合定性要求，而且符合定量要求。
【IPC分类】G01N30/06, G01N30/74
【公开号】CN105699560
【申请号】CN201610107650
【发明人】王全, 韦建玉, 金亚波, 胡亚杰, 张纪利, 孙建生, 农李政, 万树青, 陈泽鹏
【申请人】广西中烟工业有限责任公司, 华南农业大学, 中国烟草总公司广东省公司
【公开日】2016年6月22日
【申请日】2016年2月29日