一种利用超高效合相色谱串接QDa同时快速检测白酒中7种生物胺的方法
【专利摘要】本发明公开了一种利用超高效合相色谱串接QDa同时快速检测白酒中7种生物胺的方法，属于检测技术领域，其特征在于：待测酒样经乙腈萃取后，采取BEH C18合相专用色谱柱为分离柱，以二氧化碳(A)+异丙醇(B)为流动相进行梯度洗脱，样品经超高效合相色谱(UPC2)分离后，采用QDa质谱检测器进行检测。本发明方法简单快捷、准确可靠，可用于同时检测白酒中7种生物胺(组胺、腐胺、尸胺、苯乙胺、亚精胺、酪胺以及章鱼胺)的含量。
【专利说明】
一种利用超高效合相色谱串接QDa同时快速检测白酒中7种生 物胺的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及检测技术领域，具体地说是一种利用超高效合相色谱串接QDa检测器 同时快速检测白酒中7种生物胺的方法，属于酒类分析技术领域。
【背景技术】
[0002] 生物胺是生物活性物质，主要包括β-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、章鱼胺、酪胺、亚精 胺等，其存在于多种食品尤其是发酵食品（如奶酪、葡萄酒、啤酒、米酒、发酵香肠、调味品）、 水产品及肉类产品等中。生物胺尤其是组胺，它们本身就有毒性，因此其是衡量肉类食品和 水产品是否新鲜、酒的生产过程中卫生条件好坏的一个主要指标。
[0003] 目前的GB标准采用比色法或者液相色谱-衍生化法检测。其中，比色法只能半定 量，液相色谱-衍生法不稳定，操作费时、麻烦，且衍生化试剂苯甲酰氯有毒，不利于人体健 康。有文献报道采用串联四极杆法测试生物胺，但是由于生物胺分子量小，没有丰度高的碎 片，且碎片太小，检测结果容易受到干扰。
[0004] 此外，酒中的生物胺限量值低，使用原有的高效液相衍生法满足不了出口的低限 量测试要求。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种利用超高效合相色谱仪串接QDa检测器同时快速检测 白酒中7种生物胺(组胺、腐胺、尸胺、苯乙胺、亚精胺、酪胺以及章鱼胺)的方法。本发明可以 为白酒中生物胺检测的准确判定、快速检测提供科学依据。
[0006] 本发明解决技术问题，采用如下技术方案：
[0007] 本发明利用超高效合相色谱串接QDa同时快速检测白酒中7种生物胺的方法，其特 点在于：
[0008] 所述的7种生物胺为组胺、腐胺、尸胺、苯乙胺、亚精胺、酪胺以及章鱼胺；
[0009] 所用仪器为：配有QDa检测器的超高效合相色谱仪、色谱柱为BEH C18色谱柱（3.0 X 100mm，1.7μπι);涡旋仪及移液枪；
[0010]所述方法包括如下步骤：
[0011] (1)对待测白酒酒样进行前处理：
[0012] 准确量取1.0~5 . OmL待测白酒酒样于1 OmL塑料离心管中，加入8~1 OmL体积浓度 为80%的乙腈溶液，祸旋1~5min，1000转/分钟离心5~10min，0.22ym滤膜针头过滤器过 滤，获得待测样品;待进样；
[0013] ⑵条件设定
[0014] 设定超高效合相色谱仪的条件为：
[0015] 色谱柱为册H C18色谱柱（3.0\100臟，1.7以111);柱温为30~50°(：;
[0016] 样品室温度为10~20°C
[0017] 流动相:A相为二氧化碳，B相为异丙醇;流速为2~3mL/min;洗脱方式为梯度洗脱； 进样量为1~3yL;检测所用时间为7~10min;ABPR压力为1885~2200psi;梯度洗脱的具体 程序为:〇min时，流动相B异丙醇的体积分数为5~10% ;由Omin到4.0min，异丙醇的体积分 数从5~10 %升至80~90 %，并保持0.5min;由4.5min到6.5min，异丙醇的体积分数从80~ 90%降至5~10%;由6.5111；[11到8.01]1；[11，异丙醇的体积分数保持5~10%。
[0018] 设定QDa检测器的条件为：
[0019]系统:ACQUITY QDa质谱检测器，Performance模式；
[0020] 离子化方式:ESI+;
[0021]监测方式:选择离子监测(SIR);
[0022] 喷雾电压：1.3kV;
[0023] 离子源温度：550~60(TC;
[0024] 选择离子监测方式的各生物胺的质谱参数表如表1所示。
[0025] 表1:选择离子监测方式的质谱参数表
[0027] (3)7种生物胺的标准曲线的绘制
[0028]取组胺、腐胺、尸胺、苯乙胺、亚精胺、酪胺和章鱼胺配制质量浓度范围在5~ 1000ng/mL的混合系列标准工作溶液，然后按照步骤(2)所设定的条件取1~1.5mL各标准工 作溶液进样，用UPC 2(串接QDa检测器)检测，以待测物的峰面积对其所相应的质量浓度进行 线性回归，获得7种生物胺的线性回归方程，各线性回归方程所对应的曲线，即为相应生物 胺的标准曲线；
[0029] 所述的7种生物胺对应的线性回归方程及相关系数r2见表2。
[0030] 表2:7种生物胺的线性回归方程、相关系数、检出限、定量限
[0031]
[0032] (4)待测白酒酒样的检测
[0033] 将待测白酒酒样按步骤（1)的方式进行前处理后，取1.0~2.OmL样品按步骤(2)的 条件作UPC 2检测，通过使用QDa扫描检测，获得待测样品的色谱图，对待测白酒酒样根据选 择离子进行定性分析，然后根据7种生物胺的标准曲线对待测白酒酒样进行定量分析。
[0034] 对本发明方法作如下灵敏度测试：灵敏度测试包括仪器的灵敏度与方法的灵敏 度，仪器的灵敏度用仪器的检出限表示，取信噪比2 3的生物胺的混合标准溶液的最小浓度 为仪器检出限;方法的灵敏度用方法的定量限表示，取信噪比2 9的生物胺混合标准溶液的 最小浓度为方法定量限。所得的相关数据见表1。
[0035] 对本发明方法作如下准确性及重现性实验:选用同一个白酒样品经前处理后作为 空白样品，分为3份，分别加入混合标准工作溶液进行加标回收实验，计算回收率;选取1个 白酒样品按照同一前处理方法处理6个，分别进行实验，通过计算其相对标准偏差(RSD)的 范围来判断分析方法的重现性。方法的准确性用回收率来表示，见表3，方法的重现性用相 对标准偏差(RSD)来表示，见表4。可以看出回收率在80~120 %，RSD < 10 %。
[0036]表3:7种生物胺的加标回收率实验
[0037]
[0038]
[0039] 表4:7种生物胺的重现性实验
[0040]
[0041] 本发明使用QDa质谱检测器检测，采用选择离子扫描模式(SIR)，灵敏度满足酒类 样品低限量检测要求，同时该检测器使用方便，即插即用，不需要进行调谐，能够快速的检 测白酒中7种生物胺。七种生物胺的检出限量完全能够满足酒类样品的低含量测定要求，各 化合物回收率、重现性均满足定量测试要求。
[0042] 本发明的有益效果体现在：
[0043] 1、本发明建立了一种利用超高效合相色谱串接QDa检测器同时快速检测白酒中7 种生物胺的方法，能够准确地对白酒中的生物胺进行定性、定量，为白酒中生物胺的准确判 定、快速检测提供科学依据。
[0044] 2、本发明超高效合相色谱串接QDa质谱检测器操作简单快捷、准确可靠、重复性 好。
[0045] 3、本发明BEH (：18合相专用色谱柱(3.0父10〇111111，1.7以111)与0)2和异丙醇流动相的选 择对白酒中7种生物胺达到了优异的分离效果。
[0046] 4、本发明通过使用QDa检测器，不需要衍生，直接进样测试生物胺。
[0047] 5、本发明的检测方法是一项环保的"绿色"技术。分析中采用的主要流动相二氧化 碳来自于其它工业释放的回收二氧化碳，实验中使用的二氧化碳不会再产生新的温室气 体。使用此方法时，每次进样所消耗的改性剂(异丙醇)仅为0.9~l.OmL，与同类检测方法相 比，降低了85~90%的有机溶剂使用量。
[0048] 6、本发明通过减少实验室消耗品的使用可以节约成本。
【附图说明】
[0049] 图1为7种生物胺标准工作溶液的液相色谱图。
【具体实施方式】
[0050] 下面结合实例对本发明做进一步的阐述。
[0051] 本实施例按如下步骤对某白酒中7种生物胺进行测定：
[0052]所用仪器为:超高效合相色谱仪(配有QDa检测器）；BEH (：18合相专用色谱柱(3.0X 100mm，1.7μπι);涡旋仪;移液枪。
[0053] 具体步骤为：
[0054] (1)对待测白酒酒样进行前处理：
[0055] 准确量取1 .OmL待测白酒酒样于10mL塑料离心管中，加入9mL体积浓度为80%的乙 腈溶液，祸旋5min，1000转/分钟离心10min，0.22μηι滤膜针头过滤器过滤，获得待测样品；待 进样；
[0056] (2)条件设定
[0057]设定超高效合相色谱仪的条件为：
[0058] 色谱柱为BEH C18色谱柱(3.0\100臟，1.7以111);柱温为45°(：;
[0059] 样品室温度为20Γ
[0060]流动相:Α相为二氧化碳，Β相为异丙醇;流速为2. OmL/min;洗脱方式为梯度洗脱； 进样量为2μΜ检测所用时间为8min;ABPR压力为1885psi;洗脱方式为梯度洗脱;洗脱程序 如下：Omin，异丙醇的体积分数为10 % ;由Omin到4. Omin，异丙醇的体积分数从10 %升至 90%，并保持0.5111；[11;由4.5111；[11到6.5111；[11，异丙醇的体积分数从90%降至10%;由6.5111；[11到 8.Omin，异丙醇的体积分数保持10%。具体的，梯度洗脱各阶段的变化曲线均选择所用仪器 中的曲线6。
[0061]设定QDa检测器的条件为：
[0062]系统:ACQUITY QDa质谱检测器，Performance模式；
[0063] 离子化方式:ESI+;
[0064] 监测方式:选择离子监测（SIR);
[0065] 喷雾电压：1.3kV;
[0066] 离子源温度:600 Γ;
[0067] (3) 7种生物胺的标准曲线的绘制
[0068]取组胺、腐胺、尸胺、苯乙胺、亚精胺、酪胺以及章鱼胺，配制1~2mg/L的储备液，然 后分别将其稀释5个不同的混合系列标准工作溶液，然后按照（2)所设定的条件取1.0~ 2.OmL混合系列标准工作溶液进样，用超高效合相色谱仪串接QDa质谱仪检测(谱图如图1所 示），以待测物的峰面积对其所相应的质量浓度进行线性回归，获得7种生物胺的线性回归 方程，各线性回归方程所对应的曲线，即为相应生物胺的标准曲线；
[0069] (4)待测白酒酒样的检测
[0070] 将待测白酒酒样按步骤（1)的方式进行前处理后，取1.0~2.OmL处理好的样品按 步骤⑵的条件作UPC2检测，通过使用QDa扫描检测，获得待测样品的色谱图，对待测白酒酒 样根据选择离子进行定性分析，然后根据7种生物胺的标准曲线对待测白酒酒样进行定量 分析。
【主权项】
1. 一种利用超高效合相色谱串接QDa同时快速检测白酒中7种生物胺的方法，其特征在 于： 所述的7种生物胺为组胺、腐胺、尸胺、苯乙胺、亚精胺、酪胺以及章鱼胺； 所用仪器为：配有QDa检测器的超高效合相色谱仪，色谱柱为3.0 X 100mm，1.7μπι的BEH C18合相专用色谱柱； 所述方法包括如下步骤： (1) 对待测白酒酒样进行前处理： 准确量取1. 〇~5 . OmL待测白酒酒样于1 OmL塑料离心管中，加入8~1 OmL体积浓度为 80%的乙腈溶液，涡旋1~5min，1000转/分钟离心5~10min，0.22ym滤膜针头过滤器过滤， 获得待测样品;待进样； (2) 条件设定 设定超高效合相色谱仪的条件为： 色谱柱为3.0 X 100mm，1.7μπι的BEH &8色谱柱;柱温为30~50°C ; 样品室温度为10~20 °C 流动相:A相为二氧化碳，B相为异丙醇;流速为2~3mL/min;洗脱方式为梯度洗脱;进样 量为1~3yL;检测所用时间为7~10min;ABPR压力为1885~2200psi; 设定QDa检测器的条件为： 系统:ACQUITY QDa质谱检测器，Performance模式； 离子化方式:ESI+; 监测方式:选择离子监测（SIR); 喷雾电压：1.3kV; 离子源温度:550~600 °C; (3) 7种生物胺的标准曲线的绘制 取组胺、腐胺、尸胺、苯乙胺、亚精胺、酪胺和章鱼胺配制质量浓度范围在5~1000ng/mL 的混合系列标准工作溶液，然后按照步骤(2)所设定的条件取各标准工作溶液进样，用超高 效合相色谱检测，以待测物的峰面积对其所相应的质量浓度进行线性回归，获得7种生物胺 的线性回归方程，各线性回归方程所对应的曲线，即为相应生物胺的标准曲线； (4) 待测白酒酒样的检测 将待测白酒酒样按步骤(1)的方式进行前处理后，再按步骤(2)的条件作UPC2检测，通过 使用QDa扫描检测，获得待测样品的色谱图，对待测白酒酒样根据选择离子进行定性分析， 然后根据7种生物胺的标准曲线对待测白酒酒样进行定量分析。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于:步骤(2)中所述的梯度洗脱的程序为:0min 时，流动相B异丙醇的体积分数为5~10% ;由Omin到4.Omin，异丙醇的体积分数从5~10% 升至80~90 %，并保持0.5min;由4.5min到6.5min，异丙醇的体积分数从80~90 %降至5~ 10% ;由6.5min到8.0min，异丙醇的体积分数保持5~10%。
【文档编号】G01N33/14GK105866302SQ201610447198
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年6月17日
【发明人】王银辉, 刘国英, 汤有宏, 沈小梅, 马雷, 李安军
【申请人】安徽古井贡酒股份有限公司, 安徽瑞思威尔科技有限公司