利用复合修饰剂负载热解石墨电极电致化学发光行为测定药物中苦参碱含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种测定药物中苦参碱含量的方法，特别设及一种利用复合修饰剂负 载热解石墨电极电致化学发光行为测定药物中苦参碱含量的方法。
【背景技术】
[0002] 苦参碱是由豆科植物苦参的根、株及果实经乙醇等有机溶剂提取制成的，是生物 碱。苦参碱具有清热、利尿、杀虫、桂湿等功效，同时还具有抗病毒、抗肿瘤、抗过敏等多种作 用，各类制剂已被广泛用于临床，因此测定药物中苦参碱的含量，对临床用药安全具有重要 意义。目前，有关苦参碱的测定方法主要有高效液相色谱法（胖LC)、高效液相-质谱法 (HPLC-MS)、反相高效色谱法(RP-HPLC)、离子对色谱法、毛细管电泳法、薄层扫描法、气相色 谱法(GC)、气相色谱-质谱法、巧光泽灭法等。但运些方法或操作烦琐或使用贵重的仪器设 备或灵敏度不高，不能完全满足临床痕量分析的要求。因此，建立简单、快速、灵敏的分析新 方法具有重要的意义。
[0003] 目前公开的文献中，W下2篇论文是本发明最接近的现有技术： (1)李利军，罗应，李彦青等前期关于"联化晚钉体系电化学发光法测定苦参碱的研究" 中，采用裸电极(金电极)为工作电极，在联化晚钉浓度为4.0Xl(T4mol/L的苦参碱测定体系 中，其线性范围为1.5 X 10-7~1.5 X l(T4mol/L，检出限为7.3X l(T9mol/L。该技术不足之处 一方面在于每次测定均需要添加昂贵的联化晚钉，测量成本高，同时易造成环境污染;另一 方面与修饰电极体系相比，苦参碱测定操作相对复杂，且易造成因操作引起测量误差。
[0004] (2)罗应，李利军，李彦青等在"娃溶胶-纳米金修饰金电极电化学发光法测定苦参 碱的研究"中，采用W纳米金为增敏材料，通过联化晚钉固定技术，实现了联化晚钉的高效 利用，但娃溶胶成膜时易龟裂，需添加合适的助膜剂聚乙締醇和心半脫氨酸，而该成膜技术 相对传统，所W在电极修饰技术方面缺乏足够创新，且在苦参碱检出限方面也较本技术处 于劣势。
【发明内容】
[0005] 本发明要解决的技术问题是:提供一种利用复合修饰剂负载热解石墨电极电致化 学发光行为测定药物中苦参碱含量的方法，该方法利用娃溶胶(Silica sol)、二氧化铁溶 胶(Ti〇2 sol)的成膜性、纳米氧化锋-银(Zn@Ag)的大比表面积及碳纳米管(MWCNTs)良好的 电学性能，制备了Silica sol / MWCNTs- ZnO@Ag / Ti〇2 sol复合修饰剂，并通过传感器 修饰技术将联化晚钉(Ru(bpy)32+)负载在热解石墨电极表面，制备出稳定性好、灵敏度高的 用于测定苦参碱的电致化学发光传感器，实现了对苦参碱的简单、快速测定，该方法用于苦 参碱栓的测定具有较高的选择性和灵敏度，且实现了联化晚钉的重复使用。
[0006] 解决上述技术问题的技术方案是:一种利用复合修饰剂负载热解石墨电极电致化 学发光行为测定药物中苦参碱含量的方法，包括W下步骤： A、 将纯化后的多壁碳纳米管配制成0.001mol/l~1.0mol/L的多壁碳纳米管溶液； B、 纳米二氧化铁溶胶的制备:将Tick通入乙醇中配制体积分数为3.5~4.5%的TiCU- 化OH溶液，取Tick-化OH溶液并用氨水调节pH=8.5~9.0，抽滤，滤饼用去离子水洗涂至中 性，用出化溶解，再加入娃溶胶和水，于92~98°C回流3.5~4.化得到纳米二氧化铁溶胶； 此〇2、娃溶胶、水的用量按Tick-化0H溶液:此〇2:娃溶胶：水的体积比为1:1.4~1.6:0.2~ 0.3:3.2 ~3.4 计算； C、 纳米氧化锋-银核壳量子点的制备： C-1、按0.1 g硝酸银:28~32mL乙醇计，将硝酸银加入快速揽拌的乙醇溶液中，并在38~ 43 °C下分散5~15min，得到硝酸银溶液； C-2、按Ig聚乙締化咯烧酬:48~53mL乙醇计，将聚乙締化咯烧酬加入乙醇中并于58~ 63 °C溶解5~15min，得到聚乙締化咯烧酬溶液； C-3、将硝酸银溶液逐滴加入到聚乙締化咯烧酬溶液中，硝酸银溶液与聚乙締化咯烧酬 溶液的体积比为1:1~1.1，反应1.8~2.化得银溶胶； C-4、按O.Olg NaOH:22~28mL乙醇计，将化0H在48~53°C下加入乙醇中分散15~ 25min，得到NaOH溶液； C-5、按0.1 g无水醋酸锋:20~25mL乙醇计，将无水醋酸锋加入乙醇中，在58~63°C下持 续揽拌15~25min溶解，得到无水醋酸锋溶液； C-6、将无水醋酸锋溶液和银溶胶混合均匀得混合溶液，无水醋酸锋溶液与银溶胶体积 比为1:1.9~2.2,混合溶液由最初的黄色逐步变为深灰色，最终稳定在灰色，此时加入混合 溶液体积分数3.0~3.6%的聚乙二醇，在48~53 °C条件下揽拌5~15min后，于30s内迅速加 入步骤C-4制备好的化0田容液，化0H溶液的加入量为混合溶液体积分数64~70%，在38~43 °C下反应0.8~1.化，得到^@Ag核壳量子点； D、 传感器的制备： D-1、热解石墨电极经过打磨、抛光、清洗后，室溫惊干待用； 0-2、将0.001111〇1/1~1.0111〇1/1的多壁碳纳米管溶液与0.0025 111〇1/1的化0@4旨核壳量 子点按体积比为1:19~21超声分散25~35min，制备出MWCNTs-化0@Ag复合材料，再与娃溶 胶、纳米二氧化铁溶胶按MWCNTs-ZnO@Ag复合材料:娃溶胶:纳米二氧化铁溶胶体积比1:1:2 超声混合均匀得到均一、稳定的Silica sol / MWCNTs-化0@Ag / Ti化sol复合溶液，按 联化晚钉溶液:娃溶胶:MWCNTs-ZnO@Ag复合材料:纳米二氧化铁溶胶体积比为1:1:1:2向该 Silica sol / MWCNTs- ZnO@Ag / Ti〇2 sol复合溶液中加入O.OOlmol/L联化晚钉溶液，超 声振荡使其混匀，然后取1~4化加入联化晚钉溶液的Silica sol / MWCNTs- ZnO@Ag / Ti化sol复合溶液，滴加在步骤D-1得到的热解石墨电极表面，于23~28°C下惊干，即可得 至化ilica sol / MWCNTs-ZnO@Ag / Ti〇2 sol - Ru(bpy)32+修饰的热解石墨电极； E、 测定药物中苦参碱含量:使用步骤D制备得到的Silica sol /丽CNTs-ZnO@Ag / TiO2 sol - Ru(bpy)32+修饰的热解石墨电极，按照常规方法测定药物中苦参碱含量。
[0007]本发明的进一步技术方案是:步骤A的具体操作为:取部分多壁碳纳米管置于浓硫 酸与浓硝酸体积比为3:1的溶液中，于60°C回流反应12h，使用0.22μπι微孔滤膜过滤，滤饼用 去离子水洗涂至中性，烘干后W二甲基甲酯胺为溶剂配制成Imol/L多壁碳纳米管溶液。
[000引所述聚乙二醇为PEG200的聚乙二醇。
[0009] 步骤A配制的多壁碳纳米管溶液和步骤D-2所述的多壁碳纳米管溶液的浓度为 0.008mol/X~0.012mol/L。
[0010] 电致化学发光(Electrochemiluminescence，E化)分析法具有线性范围宽、灵敏度 高及仪器简单、可控性强、便于检测等优点，已被广泛应用于药物检测、分析，而化学修饰电 极技术因可通过改变电极表面微结构，改善电化学发光分析特性，提高修饰电极表面对测 定物质的选择性和仪器检测的灵敏度，所W将化学修饰电极技术与电化学发光分析方法相 结合，有利于拓宽电致化学发光法在药物分析、测定中的研究深度和应用范围。
[0011] 纳米氧化锋(ZnO)因具有独特的表面效应、体积效应、量子尺寸效应和宏观隧道效 应，在催化、磁学、光学等方面展现出许多特殊功能。而金属Ag纳米粒子具有等离子体共振 效应，当与ZnO结合为超微小ZnO@Ag核壳量子点时，能够直接影响界面电子的转移，使Zn0@ Ag具有独特的电学、催化等性能。同时，利用多壁碳纳米管(丽CTs)良好的导电性能和特殊 的电学性质，将MWCTs与化0@Ag复合制备出高活性复合修饰剂MWCTs-ZnO@Ag。而在成膜剂方 面，娃溶胶(Silica sol)为二氧化硅胶体粒子在水中均匀扩散形成Ξ维网络结构的乳白色 半透明胶体溶液，具有较高的粘结性、吸附性、化学惰性W及较好的生物相容性、催化活性 及在水中几乎不溶胀等特点，已成为重要的电极修饰成膜剂，