专利名称：工业用途的大麻快速繁殖方法
技术领域：
本发明涉及工业用途的大麻快速繁殖方法，属于植物的人工繁殖和栽培方法技术领域。
背景技术：
大麻(Cannabis sativa L.)，工业用途的大麻又称为hemp，属于大麻科大麻属一年生草本植物，植株高大，为雌雄异株。原产于亚洲中部，是人类最早种植的农作物之一，现今已经遍布世界各地。
大麻籽富含蛋白质和多种维生素与微量元素，可以榨油和食用。大麻的根、皮、叶、花、籽皆可入药。此外，大麻纤维还可用来造纸、制绳和各种纺织品。尤其是大麻布料具有良好的保暖性能，并且冬暖夏凉，纤维细软，非常适合做贴身衣料；还可以屏蔽紫外线，具有遮光消音、避电耐热的功能；干燥的大麻纤维制品绝缘性能也非常好，不会出现尘粒吸附、起毛起球或放电等现象；大麻纤维还具有抗霉抑菌的保健特性。大麻纸张的质量也非常好，可用来作为纸币用纸。因此，大麻产业正在受到越来越多的国家和人们的重视。
在世界范围内，大麻主要靠种子进行繁殖，占地面积较大，繁殖速率相对较低。利用组织培养方法进行大麻的快速繁殖是比较理想的繁殖途径。然而，目前有关大麻组织培养再生体系建立方面的报道较少，并且没有关于茎尖繁殖的报道。因而，一定程度上制约了大麻在各研究领域的深入研究，制约了其发展。
发明内容
本发明的目的在于提供一种大麻快速繁殖方法，进行工业化生产以及以大麻组培为基础的其他学科的研究工作的需要。
本发明的技术方案是这样实现的，该种大麻快速繁殖方法的主要特点是A种子消毒取籽粒均匀的大麻种子，先用洗涤液在摇床上震荡洗涤、流水冲洗，再在超净工作台上用酒精漂洗，漂洗后用无菌水清洗，清洗后再用含有效氯的消毒液或升汞灭菌，再用无菌水冲洗至水体澄清，最后用无菌滤纸吸干种子表面水分；B发芽培养将消毒好的大麻种子直接接种到以下培养基中1/2MS或MS基本培养基，食用糖5～30g/L，调节pH值5～7.5，培养温度24～26℃，光照强度1000～3000lx，光照时间10～16h，进行光照培养；C侧芽培养将发芽培养20～30天的无菌苗茎尖接种到如下培养基中MS基本培养基，植物生长激素0.05～0.5mg/L，食用糖20～40g/L，进行光照培养20～40天；D生根培养选取健壮的试管苗，经过修剪后，接种到如下培养基中1/2MS或MS基本培养基，植物生长激素0.01～0.5mg/L，食用糖20～40g/L，进行光照培养50～60天。
其中，步骤A中的酒精漂洗时间为25～35s；所述的洗涤液为0.1～0.5％的安利洗涤液；所述的含有效氯的消毒液为含5％有效氯的“84”消毒液；所述的升汞的浓度为0.1％；所述的灭菌时间控制在5～15min；所述的震荡洗涤时间控制在15～20mm。
将步骤B中的pH值调节至5～7.5。
所述的工业用途大麻快速繁殖方法的延伸技术方案包括步骤C中所涉及到的植物生长激素包括苯基噻二唑基脲(TDZ)0.1～0.5mg/L，萘乙酸(NAA)0.05～0.3mg/L，并且前者是后者的1～2倍效果较好。
所述的工业用途大麻快速繁殖方法的延伸技术方案包括步骤D中所涉及到的植物生长激素包括吲哚丁酸(IBA)0.1～0.5mg/L、萘乙酸(NAA)0.01～0.25mg/L，并且前者是后者的1～2倍效果较好。
本发明的优点为采用植物组织培养的方法繁殖大麻，不仅可以摆脱外界条件的影响，四季都能进行生产，而且可以节约育苗占地，降低生产成本。植物组织培养技术是利用细胞的全能性，采取植物体上的细胞团伙一块组织，通过人为条件的控制，使这些组织形成千百万植株，并且保存了母体的全部优良性状，且遗传性状稳定。这种方法可在短期内形成大量优良试管苗，进行规模化、工厂化生产。
具体实施例方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的描述实施例11取籽粒均匀的大麻种子，用0.1％的安利洗涤液在摇床上震荡洗涤15min，流水冲洗30min后，再在超净工作台上用75％的酒精漂洗25s，无菌水清洗4遍后，用含5％有效氯的“84”消毒液灭菌10min，无菌水冲洗至水体澄清，最后用无菌滤纸吸干种子表面水分。
2将消毒好的大麻种子直接接种到以下培养基中1/2MS基本培养基，蔗糖5g/L，调节pH值至5；培养温度24℃，光照强度1000lx，光照时间10h，进行光照培养。
3将发芽培养20天的无菌苗茎尖用剪刀剪下，接种到本发明的培养侧芽的培养基中，具体配方为在MS基本培养基中添加植物激素TDZ0.1mg/L和NAA0.05mg/L，蔗糖20g/L，进行光照培养。培养30天后，大部分材料出现3±2个侧芽。将侧芽切割下来后，重新接种到侧芽生长培养中，继续进行培养增值。
4选取健壮的试管苗，经过修剪后，接种到本发明的生根培养基中，生根培养基是以MS培养基为基本培养基，并添加植物生长激素IBA0.1mg/L和NAA0.01mg/L，蔗糖20g/L，进行生根培养。培养50天，生根率达到80％，大部分生根数达到3～5条。
实施例21取籽粒均匀的大麻种子，用0.5％的安利洗涤液在摇床上震荡洗涤20min，流水冲洗60min后，再在超净工作台上用75％的酒精漂洗35s，无菌水清洗4遍后，用0.1％升汞灭菌15min，无菌水冲洗至水体澄清，最后用无菌滤纸吸干种子表面水分。
2将消毒好的大麻种子直接接种到以下培养基中MS基本培养基，蔗糖(食用糖)10g/L，控制pH值为7.5；培养温度25℃，光照强度3000lx，光照时间10～16h，进行光照培养。
3将发芽培养30天的无菌苗茎尖用剪刀剪下，接种到本发明的培养侧芽的培养基中，具体配方为在MS基本培养基中添加植物激素TDZ0.5mg/L和NAA0.5mg/L，蔗糖40g/L，进行光照培养。培养40天后，大部分材料出现3±2个侧芽。将侧芽切割下来后，重新接种到侧芽生长培养中，继续进行培养增值。
4选取健壮的试管苗，经过修剪后，接种到本发明的生根培养基中，生根培养基是以1/2MS培养基为基本培养基，并添加植物生长激素IBA0.5mg/L和NAA0.25mg/L，蔗糖40g/L，进行生根培养。培养60天，生根率达到80％，大部分生根数达到3～5条。
实施例31取籽粒均匀的大麻种子，用0.3％的安利洗涤液在摇床上震荡洗涤17min，流水冲洗50min后，再在超净工作台上用75％的酒精漂洗30s，无菌水清洗4遍后，用含5％有效氯的“84”消毒液灭菌12min，无菌水冲洗至水体澄清，最后用无菌滤纸吸干种子表面水分。
2将消毒好的大麻种子直接接种到以下培养基中1/2MS基本培养基，蔗糖10g/L，调节pH值至5.8；培养温度25℃，光照强度2000lx，光照时间13h，进行光照培养。
3将发芽培养22天的无菌苗茎尖用剪刀剪下，接种到本发明的培养侧芽的培养基中，具体配方为在MS基本培养基中添加植物激素TDZ0.25mg/L和NAA0.2mg/L，蔗糖30g/L，进行光照培养。培养35天后，大部分材料出现3±2个侧芽。将侧芽切割下来后，重新接种到侧芽生长培养中，继续进行培养增值。
4选取健壮的试管苗，经过修剪后，接种到本发明的生根培养基中，生根培养基是以MS培养基为基本培养基，并添加植物生长激素IBA0.4mg/L和NAA0.2mg/L，蔗糖30g/L，进行生根培养。培养52天，生根率达到80％，大部分生根数达到3～5条。
实施例41取籽粒均匀的大麻种子，用0.4％的安利洗涤液在摇床上震荡洗涤19min，流水冲洗45min后，再在超净工作台上用75％的酒精漂洗28s，无菌水清洗4遍后，用含5％有效氯的“84”消毒液灭菌14min，无菌水冲洗至水体澄清，最后用无菌滤纸吸干种子表面水分。
2将消毒好的大麻种子直接接种到以下培养基中1/2MS基本培养基，蔗糖10g/L，调节pH值至7.0；培养温度24℃，光照强度2500lx，光照时间14h，进行光照培养。
3将发芽培养28天的无菌苗茎尖用剪刀剪下，接种到本发明的培养侧芽的培养基中，具体配方为在MS基本培养基中添加植物激素TDZ0.35mg/L和NAA0.3mg/L，蔗糖33g/L，进行光照培养。培养38天后，大部分材料出现3±2个侧芽。将侧芽切割下来后，重新接种到侧芽生长培养中，继续进行培养增值。
4选取健壮的试管苗，经过修剪后，接种到本发明的生根培养基中，生根培养基是以MS培养基为基本培养基，并添加植物生长激素IBA0.2mg/L和NAA0.15mg/L，蔗糖36g/L，进行生根培养。培养57天，生根率达到80％，大部分生根数达到3～5条。
权利要求
1.工业用途的大麻快速繁殖方法，其特征在于A种子消毒取籽粒均匀的大麻种子，先用洗涤液在摇床上震荡洗涤、流水冲洗，再在超净工作台上用酒精漂洗，漂洗后用无菌水清洗，清洗后再用含有效氯的消毒液或升汞灭菌，再用无菌水冲洗至水体澄清，最后用无菌滤纸吸干种子表面水分；B发芽培养将消毒好的大麻种子直接接种到以下培养基中1/2MS或MS基本培养基，食用糖5～30g/L，调节pH值5～7.5，培养温度24～26℃，光照强度1000～3000lx，光照时间10～16h，进行光照培养；C侧芽培养将发芽培养20～40天的无菌苗茎尖接种到如下培养基中MS基本培养基，植物生长激素0.05～0.5mg/L，食用糖20～40g/L，进行光照培养30～40天；D生根培养选取健壮的试管苗，经过修剪后，接种到如下培养基中1/2MS或MS基本培养基，植物生长激素0.01～0.5mg/L，食用糖20～40g/L，进行光照培养50～60天。
2.根据权利要求1所述的工业用途大麻的快速繁殖方法，其特征在于步骤A中的酒精漂洗时间为25～35s。
3.根据权利要求1所述的工业用途大麻的快速繁殖方法，其特征在于步骤A中所述的洗涤液为0.1～0.5％的安利洗涤液。
4.根据权利要求1所述的工业用途大麻的快速繁殖方法，其特征在于步骤A中所述的含有效氯的消毒液为含5％有效氯的“84”消毒液。
5.根据权利要求1所述的工业用途大麻的快速繁殖方法，其特征在于步骤A中所述的升汞的浓度为0.1％。
6.根据权利要求1所述的工业用途大麻的快速繁殖方法，其特征在于步骤A中所述的灭菌时间控制在5～15min。
7.根据权利要求1所述的工业用途大麻的快速繁殖方法，其特征在于步骤A中所述的震荡洗涤时间控制在15～20min。
8.根据权利要求1所述的工业用途大麻的快速繁殖方法，其特征在于将步骤B中的pH值调节至5～7.5。
9.根据权利要求1所述的工业用途大麻的快速繁殖方法，其特征在于步骤C中所述的植物生长激素为0.1～0.5mg/L的苯基噻二唑基脲(TDZ)和0.05～0.3mg/L的萘乙酸(NAA)。
10.根据权利要求1所述的工业用途大麻的快速繁殖方法，其特征在于步骤D中所述的植物生长激素为吲哚丁酸(IBA)0.1～0.5mg/L和0.01～0.25mg/L的萘乙酸(NAA)。
全文摘要
本发明提供一种工业用途的大麻快速繁殖方法，进行工业化生产以满足市场需要。工业用途的大麻组织培养步骤包括A.种子消毒，B.无菌苗获得，C.侧芽培养，D.生根培养。采用植物组织培养的方法繁殖工业用途的大麻，不仅不受外界条件的影响，四季皆可进行，节约苗木占地，降低生产成本，而且可以保存母体的全部优良性状，遗传性状稳定。这种方法可在短时间内形成大量的优良试管苗，进行规模化、工厂化生产，为造纸、织布等工业提供大量的原材料。
文档编号A01C1/00GK1887043SQ20061008835
公开日2007年1月3日 申请日期2006年7月13日 优先权日2006年7月13日
发明者夏冰, 李凝, 佟金凤, 高南 申请人:江苏省中国科学院植物研究所