专利名称：软枣猕猴桃组织培养方法
技术领域：
本发明涉及到东北地区的一种浆果的无性繁殖方法，即软枣猕猴桃的组织培养法。本发明属于植物 组织培养技术和森林培育领域。
背景技术：
软枣猕猴桃果实是一种珍稀的、天然的、绿色的可食用浆果，因其潜在的营养价值和商用价值，是一 种世界珍稀的、纯天然的、绿色的可食用浆果，是极具有开发前景的第三代水果之一。然而由于无计划掠 夺式的采摘，致使软枣猕猴桃资源遭到严重破坏，自然修复能力降低，蕴藏量和可采量锐减，供需矛盾日 益加剧。
我国软枣猕猴桃的育苗技术主要是无性繁殖(即分株、压条、硬枝扦插、绿枝扦插)等技术，利用组 培技术繁育软枣猕猴桃的资料极少。査阅大量相关资料发现，只有刘瑞林曾于2001年发表过组织培养方 面的简报。但软冬猕猴桃组织培养体系尚未建立，优良品种的推广普及尚未完成，苗木供求矛盾日益加剧， 严重影响了软枣猕猴桃深加工业的发展。2007年我所对软枣猕猴桃组织培养体系进行了系统地研究。
发明内容
本发明对软枣猕猴桃采用组织培养技术，以休眠枝条水培后萌发的嫩枝为外植体，经外植体灭菌、嫩 芽接种、分化增殖培养基筛选、生根培养基筛选等步骤，研究培养过程中试管苗的营养需求、激素对苗木 生长分化的调控，解决软枣猕猴桃的微体快速增殖、诱导生根的重要技术问题，建立了完善的软枣猕猴桃 组织培养体系，达到了高效诱导外植体分化增殖和高质量保证幼苗成活的目的，并且保存了母体的全部优 良性状，遗传性状稳定。这种方法可在短期内形成大量优良试管苗，进行规模化、工厂化生产。
图l软枣猕猴桃水培嫩芽接种IO天的长势情况，叶片展开，叶色浓绿
图2 a部分处理继代增殖培养25天分化的试管苗数 b不同处理继代增殖培养25天试管苗苗高 图3 a软枣猕猴桃四种生根处理培养30天，只有处理l未见生根，其余3个处理均已生根，其中处理4 的生根状况为最好，生根率达87.0%。
具体实施例方式
以软枣猕猴桃休眠枝条经水培后萌发的嫩枝为外植体，具体由以下四个步骤组成-
(1) 外植体灭菌首先采用常规法将水培抽出的嫩芽用洗衣粉溶液洗净，然后用0. 1%升汞灭菌5 分钟，以无菌水浸泡40分钟；
(2) 接种在无菌的条件下将嫩芽接种在初代培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了 0. 5mg/L的6-节基腺嘌呤(6-BA) 、 lmg/L的赤霉素(GA3) ， PH5.8,培育基础苗。培养温度为25土2'C， 光照周期12h/d，光强度为20001ux，待培养20天后，苗高约3 4cm，即开始下一个阶段；
(3) 继代增殖将基础苗转移到继代增殖培养基上进行增殖培养。以MS+6-BA (0.5mg/L、 lmg/L) +ZT (0.5mg/L、 lmg/L)或IAA (0. 5mg/L、 lmg/L ) 8种培养基进行筛选，培养温度为25土2'C,光照周期 12h/d，光强度为20001ux，培养30天。结果最佳增殖培养基是在MS常规培养基中添加了 0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤(6-BA) 、 lmg/L的玉米素(ZT);培养25天，增殖倍数达4.0;
(4) 生根剪取增殖培养中长度为1. 5 2. Ocm的健壮苗接种到四种生根培养基上，采用单因素试验 设计进行生根培养筛选。培养温度为25士2'C，光照周期12h/d，光强度为20001ux。结果在MS培养基中 添加了0.2mg/L的吲哚丁酸(IBA)的培养基生根效果最好，在培养30天生根率达87. 0% 。
权利要求
软枣猕猴桃(Actinidia arguta)的组织培养方法，其特征在于由以下四个步骤组成1.外植体灭菌 采用常规法将水培抽出的嫩芽用洗衣粉溶液洗净，然后在超静工作台中用0.1％升汞灭菌5分钟，以无菌水浸泡40分钟；2.接种 在无菌的条件下将嫩芽接种在初代培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了0.5mg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、1mg/L的赤霉素(GA3)，PH 5.8，培养温度为25±2℃，光照周期12h/d，光强度为2000lux，待培养20天后，苗高约3～4cm，即开始下一个阶段；3.继代增殖 将所得的苗木转移到增殖培养基上进行增殖，该培养基是在MS常规培养基中添加了0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤(6-BA)、1mg/L的玉米素(ZT)，PH 5.8，培养温度为25±2℃，光照周期12h/d，光强度为2000lux，培养25天，增殖倍数达4.0；4.生根 剪取增殖培养中长度为1.5～2.0cm的健壮苗接种到生根培养基，该培养基是在MS培养基中，添加了0.2mg/L的吲哚丁酸(IBA)，PH 5.8，培养温度为25±2℃，光照周期12h/d，光强度为2000lux，30天生根率达87.0％。
1. 外植体灭菌采用常规法将水培抽出的嫩芽用洗衣粉溶液洗净，然后在超静工作台中用0. 1%升汞灭 菌5分钟，以无菌水浸泡40分钟；
2. 接种在无菌的条件下将嫩芽接种在初代培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了 0.5mg/L 的6-苄基氨基嘌呤(6-BA) 、 lmg/L的赤霉素(GA3) ， ffl5.8，培养温度为25士2。C，光照周期12h/ d，光强度为20001ux,待培养20天后，苗高约3 4cm，即开始下一个阶段；
3. 继代增殖将所得的苗木转移到增殖培养基上进行增殖，该培养基是在MS常规培养基中添加了 0. 5mg/L的6-苄基腺嘌呤(6-BA) 、 lmg/L的玉米素(ZT) ， PH 5.8，培养温度为25士2。C，光照周 期12h/d，光强度为20001ux，培养25天，增殖倍数达4. 0;
4. 生根剪取增殖培养中长度为1. 5 2. Ocm的健壮苗接种到生根培养基，该培养基是在MS培养基中， 添加了 0. 2mg/L的吲哚丁酸(IBA)， PH 5. 8，培养温度为25土2。C，光照周期12h/ d ,光强度为20001ux, 30天生根率达87.0% 。
全文摘要
本发明属于植物组织培养技术和森林培育领域，涉及软枣猕猴桃(Actinidia arguta)的高效繁殖方法。该方法分为外植体灭菌、接种、继代增殖、生根四个阶段。该方法解决了软枣猕猴桃的微体快速增殖、诱导生根的重要技术问题，达到了高效诱导外植体分化增殖和高质量保证幼苗成活的目的，并且保存了母体的全部优良性状，遗传性状稳定。这种方法可在短期内形成大量优良试管苗，进行规模化、工厂化生产。
文档编号A01H4/00GK101574056SQ20081006446
公开日2009年11月11日 申请日期2008年5月8日 优先权日2008年5月8日
发明者兰世波, 周志军, 李海霞, 田新华, 邢亚娟 申请人:黑龙江省林业科学研究所