专利名称：核转运调节剂及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及可作为核转运调节剂的化合物。本发明还提供了包含本发明所述化合物的药学上可接受的组合物，以及用所述组合物治疗各种疾病的方法。
发明背景
大多数主要的人类实体及血液系统恶性肿瘤的细胞呈现出多种致瘤蛋白、肿瘤抑制蛋白、及细胞周期调节子的异常的细胞定位(Cronshaw等人,2004, Falini等人2006)。例如，某些P53突变可导致细胞基质定位，而非细胞核定位。这导致了正常生长调节的缺失， 尽管肿瘤抑制功能是完整的。在其他肿瘤中，野生型P53被隐蔽在细胞质细胞质中或被迅速降解，再次导致该野生型P53的抑制剂功能的丧失。功能性p53蛋白的恰当的细胞核定位的恢复，可使肿瘤细胞的一些特性正常化(Cai等人,2008 ；Hoshino等人,2008 ；Lain等人, 1999a ；La in等人，1999b ；Smart等人，1999),可恢复癌细胞对DNA损伤试剂的敏感度(Cai et al,2008),可导致长成的肿瘤的退化(Sharpless&DePinho 2007,Xue 等人，2007)。从其他肿瘤抑制蛋白如叉头(Turner和Sullivan 2008)和c_AbI (Vignari和Wang 2001)中也获得了类似的数据。此外，一些肿瘤抑制剂和生长调节蛋白的异常定位可能与自身免疫性疾病的发病机理有关(Davis 2007, Nakahara 2009)。Crml抑制可在家族性癌症综合征中提供特别有意义的应用(例如，由p53等位基因缺失引起的L1-Fraumeni综合征、BRCAl 或BRCA2癌症综合征)，其中特异的肿瘤抑制蛋白(TSP)被清除或具有功能障碍，并且其中通过系统的(或局部的)Crml抑制剂的服用实现的TSP水平的提高能够帮助恢复正常的肿瘤抑制功能。
特异的蛋白和RNA由特异的转运分子输入或输出细胞核，若它们将分子输入细胞核，则这被分类为输入蛋白，若它们将分子输出细胞核，则被分类为输出蛋白(Terry等人 2007 ;Sorokin等人2007)。被输入或输出细胞核的蛋白质包含核定位信号(NLS)或核输出信号(NES)序列，使它们与相关的转运因子相互作用。染色体区域稳定蛋白I (Crml)，也称作输出蛋白-1或Xpol，为主要的输出蛋白。
根据报道，在几种肿瘤中Crml过表达，这些肿瘤包括人类卵巢癌(Noske等人， 2008)、宫颈癌(van der Watt 等人,2009)、胰腺癌(Huang 等人,2009)、肝癌(Pascale 等人，2005)、及成骨肉瘤(Yao et al，2009)，并且Crml的过表达也独立的与这些肿瘤类型的贫乏的临床结果相互关联。
Crml的抑制肿瘤抑制蛋白和/或生长调节因子如p53、c_Abl、p21、p27、pRB、 BRCAl、IkB、ICp27、E2F4、KLF5、YAPl、ZAP、KLF5、HDAC4、HDAC5 或叉头蛋白(如 F0X03a)的核输出，该核输出与基因表达、细胞增殖、血管生成、和表现遗传相关。有结果表明Crml抑制剂可诱导癌细胞的凋亡，甚至是在致癌激活信号或生长激励信号存在的情况下，而不影响正常的(未被转化的)细胞。大多数关于Crml抑制的研究应用了天然产物Crml抑制剂来普霉素B(LMB)。LMB本身对赘生性细胞具有很高的毒性，但因显著的胃肠毒性很难被动物(Roberts等人，1986)和人(Newlands等人，1996)接受。衍生LMB来改善类药特性可得到既可保留抗肿瘤活性也又可被动物肿瘤模型更好的耐受的化合物(Yang等人，2007， Yang等人，2008，Mutka等人，2009)。因此，核输出抑制剂对赘生性性疾病及其他增生性疾病可具有有益效果。然而至今，用于体外和体内的小分子的类药Crml抑制剂仍不常见。
除肿瘤抑制蛋白外，Crml还输出若干与很多炎性过程相关的关键蛋白。这些蛋白包括 IkB、NF-kB、Cox-2, RXRa、Commdl、HIFU HMGBU FOXO, FOXP、及其他。因为能够引发免疫球蛋白k基因的表达而得名的核因子kB(NF-kB/rel)族的转录激活因子，可调控各种与炎症、增殖、免疫与细胞生存相关的基因的mRNA的表达。在基本情况下，一个称为IkB的 NF-kB的蛋白抑制剂，在核内与NF-kB结合，且IkB-NF-kB复合物使NF_kB的转录功能失活。 在炎症刺激的应答中，IkB从IkB-NF-kB复合物中解离，释放NF_kB，同时恢复其潜在的转录活性。很多激活NF-kB的信号就是通过靶向IkB蛋白水解实现它的(IkB的磷酸化可“标记”它进行泛素化并且然后蛋白水解)。核IkBa-NF-kB复合物可被Crml输出到细胞质，在细胞质中该复合物解离，从而使NF-kB重新活化。泛素化的IkB还可以从NF-kB复合物上解离，恢复NF-kB的转录活性。通过LMBCrml的诱导的介导的人嗜中性细胞和类巨噬细胞 (U937)的输出的抑制不仅导致无转录活性的核IkBa-NF-kB复合物的聚积，还防止了初始的NF-kB活化，甚至是在细胞刺激下(Ghosh 2008，Huang2000)。在不同的研究中，用LMB处理抑制了 IL-1 β诱导的NF-kB与DNA的结合(NF_kB转录活化的第一步)、IL_8表达、和细胞内粘附分子在肺微血管内皮细胞中的表达(Walsh 2008)。COMMDl是另一个NF_kB和缺氧诱导因子I(HIFl)的转录活性的抑制剂。通过抑制Crml阻断COMMDl的核输出可导致对 NF-kB和HIFl的转录活性的抑制的增加(Muller 2009)。
抑制CRMl可通过抑制/激活一系列转录因子如ICp27、E2F4、KLF5、YAPU ZAP来影响基因表达。
抑制Crml对很多眼科适应症具有潜在的治疗效果，这些眼科适应症包括黄斑水肿(糖尿病型和非糖尿病型黄斑水肿)、年龄相关性湿/干型黄斑变性、老年盘状黄斑变性、 囊样黄斑水肿、眼睑水肿、视网膜水肿、糖尿病性视网膜病、视网膜脉络膜病变、新生血管性黄斑病变、新生血管性青光眼、眼色素层炎、虹膜炎、视网膜脉管炎、内眼炎、眼周炎、转移性眼炎、脉络膜炎、视网膜色素上皮炎、结膜炎、睫状体炎、巩膜炎、巩膜外层炎、视神经炎、球后视神经炎、角膜炎、睑炎、渗出性视网膜脱离、角膜溃疡、结膜溃疡、慢性钱币状角膜炎、缺氧或局部缺血相关眼病、早产儿视网膜病、增殖型糖尿病视网膜病、息肉状脉络血管病变、 视网膜血管瘤增殖、视网膜动脉阻断、视网膜静脉闭塞、冠茨氏病、家族性渗出性玻璃体视网膜病变、无脉症(高安氏病)、伊尔斯病、抗磷脂抗体综合征、白血病性视网膜病、血液高粘滞综合征、巨球蛋白血症、干扰素相关视网膜病、高血压性视网膜病、放射性视网膜病、角膜上皮干细胞缺乏症或白内障。
抑制Crml对很多皮肤科综合征有潜在的治疗效果，这些皮肤科综合征包括炎性皮肤病(过敏症、变应性皮炎、化学性皮炎、银屑病)、阳光损伤(紫外/UV损伤)和感染。 在LMB中研究的最充分的C RMI抑制，对正常的角质化细胞呈现很小的作用，且对在UV、 TNFa或其他炎症刺激下的角质化细胞呈现显著的抗炎活性(Kobayashi&Shinkai 2005,Kannan&Jaiswal 2006)。抑制Crml还可以上调NRF2 (核因子E2相关因子2)的活性，其中NRF2可保护角质化细胞(Schafer等人,2010, Kannan&Jaiswal 2006)及其他细胞类型 (Wang et al，2009)的氧化损伤。LMB诱导被致癌性人乳头瘤病毒(HPV)毒株如HPV16感染的角质化角质化细胞的凋亡，但不诱导未被感染的角质化细胞的凋亡(Jolly等人，2009)。 综上，这些数据显示抑制Crml可以
Crml还介导类视黄质X受体a (RXRa)的转运。RXRa在肝脏中高度表达，并在胆汁酸、胆固醇、脂肪酸、类固醇和异生素的代谢和内环境稳定的调控中起到重要作用。在肝炎中，核RXR a水平显著降低，主要由于炎症介导的Crml对RXR a的核输出。L印B可防止IL-1 β诱导的人类肝衍生细胞的细胞质中RXRa水平的增高(Zimmerman 2006)。注 该结果强烈表明炎症本身可以激活Crml介导的核输出，因此，阻断核输出对于很多跨多组织和器官的炎症过程有潜在的益处，这些炎症过程包括脉管系统(血管炎、动脉炎、风湿性多肌痛、动脉硬化)、皮肤病(见上文)、风湿病(类风湿及相关关节炎、银屑病关节炎、脊椎关节病、结晶性关节病、系统性红斑狼疮、混合性结缔组织病、肌炎、皮肌炎、包涵体肌炎、未分化结缔组织病、干燥综合征、修格連氏症候群、重叠综合征等)。
Crml还介导关键神经保护蛋白的转运，这些神经保护蛋白可能对神经变性疾病包括帕金森氏综合征(ro)、阿尔茨海默病、和肌萎缩性侧索硬化症有用。例如，(I)对关键神经保护调节因子如NRF2 (Wang 2009)、F0XA2 (Kittappa等人，2007)、神经细胞的parkin蛋白进行强制核阻留，和/或(2)通过将IkB隐蔽于神经胶质细胞的细胞核实现NF κΒ的转录活性的抑制，Crml抑制可减缓或防止这些疾病中的神经细胞死亡。还有证据表明，异常的神经胶质细胞增殖与CRMl水平或CRl功能的异常相关(Shen 2008)。
很多病毒的完整的成熟也要求主要由Crml介导的完整的核输出。生命周期里牵涉到核输出和/或Crml自身的病毒包括人免疫缺陷病毒(HIV)、腺病毒、猴I型逆转录病毒、波尔纳病病毒、流感病毒(常规株以及HlNl和禽H5N1株)、乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)、人乳头瘤病毒(HPV)、呼吸道合胞体病毒(RSV)、Dungee、严重急性呼吸器官综合征冠状病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、单纯性疱疹病毒(HSV)、巨细胞病毒(CMV)、默克尔细胞多瘤病毒(MCV) ο (Bhuvanakantham 2010, Cohen 2010, Whittaker 1998)。预计， 在不久的将来，可以发现更多依赖完整的核输出的病毒感染。
穿过核仁并穿梭于细胞核与细胞质之间的HIV-1Rev蛋白，促使未剪接的和单剪接的含有Rev应答元件(RRE)RNA的HIV转录物的通过Crml输出通路的输出。通过Crml 抑制剂如L印B或PKF050-638实现的Rev-介导的RNA转运的抑制，可以阻止HIV-1的转录过程，抑制新的HIV-1病毒粒子的生成，从而降低HIV-1的水平(Pollard 1998，Daelemans 2002)。
登革热病毒(DENV)为常见的节肢动物传播的病毒疾病、登革热(DF)、及其更严重的和潜在致命的登革出血热(DHF)的致病致病因素。DHF似乎是由对DENV的过旺的炎症应答导致的。NS5是DENV的最大的也是最保守的蛋白。Crml调控NS5从细胞核到细胞质的转运，其中NS5的大部分功能是被介导的。抑制Crml介导的NS5的输出，可导致病毒生成的动力学的改变，减少炎性趋化因子白细胞介素-8 (IL-8)的诱导，为治疗DENV以及其他医学上重要的黄病毒包括丙型肝炎病毒引发的疾病提供了一个新的途径(Rawlinson 2009)。
其他使用Crml输出细胞核的病毒编码的RNA结合蛋白包括I型HSV间层蛋白(VP13/14或hUL47)、人CMV蛋白pp65、SARS冠状病毒ORF 3b蛋白、以及RSV基质(M)蛋白 (Williams 2008，Sanchez 2007, Freundt 2009, Ghildyal 2009)。
有趣的是，很多这些病毒与特定类型的人类癌症相关，这些癌症包括由慢性HBV 或HCV感染引起的肝癌(HCC)、HPV引起的子宫颈癌、MCV相关的默克尔细胞癌。因此Crml 抑制剂对病毒感染过程及这些病毒引起的赘生性转化过程均有益。
Crml控制细胞核定位，从而控制多个DNA代谢酶的活性，这些酶包括组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)、组蛋白乙酰转移酶(HAT)、组蛋白甲基转移酶(HMT)。
已被证明和公认的是，不可逆的Crml抑制剂对心肌细胞肥大的抑制与HDAC 5的核阻留(和激活)相关，其中HDAC 5为一个已知的抑制肥大遗传程序的酶((Monovich等人，2009)。因此，Crml抑制可对肥大综合征，包括特定形式的充血性心力衰竭和肥厚性心肌病，有有益效果。
CRMl也与其他疾病相关。一种以视网膜神经节细胞的退化为特征的遗传疾病-莱伯病，与CRMl开关的无效相关(Gupta N 2008)。还有证据表明，神经退行性疾病与异常的细胞核转运相关。
发明概述
已经发现，本发明的化合物及其药学上可接受的组合物是有效的核转运调节剂。 此类化合物具有通式1:
权利要求
1.具有化学式I’的化合物
2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物是化学式II’的化合物
3.根据权利要求2所述的化合物，其中A’是可任选被一个或者多个R1’取代基取代的苯基。
4.根据权利要求3所述的化合物，其中A’是可被R1在间位取代的苯基并且每个WG’独立地是-CO2Et、-CO2CH (CH3) 2、-CO2C (CH3) 3 或者-CO2Ph。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有化学式III’或者IV’
6.如权利要求1所述的化合物，其中WG’选自-CO2Et、-CO2CH (CH3) 2、-CO2C (CH3) 3、CONH-苯基、
7.根据权利要求4所述的化合物，其中R1是-Cl。
8.根据权利要求7所述的化合物，其中WG是CO2CH(CH3)215
9.根据权利要求2所述的化合物，其中一个WG’是氢并且另一个的WG’是-C02Et、-C02CH (CH3) 2 > -CO2C (CH3) 3、CONH-苯基、
10.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有化学式V’或者VI’
11.根据权利要求1所述的化合物，其选自下组，该组由以下各项组成实例结构名称
12. —种组合物，其包含化学式I’的化合物以及药学上可接受的载体、辅助剂或者运 载体
13.用于调节CRMl的方法，其包括将CRMl与根据权利要求12所述的治疗有效量的组合物接触。
14.用于治疗、调节和/或预防与CRMl相关的紊乱的方法，其包括将根据权利要求12所述的治疗有效量的组合物进行给药。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述紊乱选自癌症以及其他的赘生性疾病，炎性疾病，包括心肌病、肺纤维化、肝纤维化、肾小球肾炎、以及其他的肾病症的异常组织生长以及纤维化，以及病毒感染(急性的和慢性的)。
全文摘要
本发明总体上涉及核转运调节剂领域，例如，CRM1抑制剂，并且更具体地说，涉及新的经取代的杂环的唑类化合物，这些化合物以及它们的药用组合物的合成及其在治疗、调节和/或预防与CRM1活性相关的生理学紊乱如在治疗癌症以及其他的赘生性疾病，炎性疾病，包括心肌病、肺纤维化、肝纤维化、肾小球肾炎、以及其他的肾病症的异常组织生长以及纤维化中的用途，以及用于病毒感染(急性的和慢性的)的治疗的用途。
文档编号A01N57/00GK103002742SQ201180022653
公开日2013年3月27日 申请日期2011年3月5日 优先权日2010年3月5日
发明者S·沙查姆, M·考夫曼, V·P·桑丹雅卡, S·谢克特尔 申请人:卡尔约药物治疗公司