专利名称：一种柞蚕蛹虫草盒式培养方法
技术领域：
本发明属于食用菌栽培领域，具体涉及一种柞蚕蛹虫草盒式培养方法。
背景技术：
蛹虫草也称北冬虫夏草、北蛹虫草、虫草等，其有效成分和冬虫夏草类似。自然界中野生蛹虫草的资源稀缺，其产量受自然环境和气候的影响很大，根本满足不了人们的需求，目前市场上的蛹虫草产品大多是人工培养的，人工培养的方式为(I)采集野生的蛹虫草进行菌种的分离、纯化，然后将蛹虫草菌接种在固体培养基上，于20-25°C及一定的湿度和光照条件下培养，经35-45d子实体即可达到采收。姜明兰等用野生菌进行组织分离，在PDA培养基上分离、纯化出优良的原种，经人工驯化的原种在PDA液体培养基中扩大培养后，接种到大米培养基上，成功获得子实体。张显科等研究认为，高粱·米、小米、玉米渣和蚕蛹可以代替大米栽培蛹虫草；(2)用液体深层发酵的方法人工生产蛹虫草菌丝体。采用液体发酵的方法获得菌丝体可以高效快速的得到某些有效成分，缩短生产周期。不少科研工作者对液体深层发酵的条件进行了探索。刘苗苗等用响应曲面法优化蛹虫草液体培养条件，得出了蛹虫草培养中最佳碳氮比和培养时间；唐芳荣，昌艳等以传统工业废料玉米浆、豆饼粉等作培养基，并对培养条件进行了优化。汪宇等以发酵得率为指标优化培养基成分，初步得到蛹虫草液体培养条件和生长动力学，为蛹虫草液体培养工业化生产提供了一定的理论依据；(3)采用缫丝厂副产物干的桑蚕或柞蚕蛹，通过复水后高温灭菌，然后接种，在18-23°C发菌，约30d左右发菌完毕，然后将蛹体照光，一定时间后可获得蛹虫草。目前，采用大米发酵也是获得虫草子实体的重要方式，但是由于大米中缺少虫体中特有的蛋白等营养物质，所获得的子实体虫草素等有效成分的含量偏低，质量难以保证，更有不法者以无机氮源代替有机氮，使获得的子实体中主要活性成分虫草素的含量很低，甚至没有，干扰了蛹虫草的市场。
发明内容
本发明的目的是针对上述现状，旨在提供一种出草整齐、培养时间短、操作方便、成功率高，虫草商品性好的柞蚕蛹虫草盒式培养方法。本发明目的的实现方式为，一种柞蚕蛹虫草盒式培养方法，具体步骤如下(I)接种前准备①挑出蚕茧中混合的死蚕蛹，用水洗掉蚕蛹表面的尘土及夹带的毛片，晾干蚕蛹体表面水分，用臭氧或紫外线消毒30min ；②制备虫草培养基250ml三角瓶中装110_130ml液体培养基，用接种针在试管斜面培养基上刮取需用量的菌块，放于三角瓶中，每瓶4-6个菌块；23°C静止培养24小时后摇床转速90r/min轻摇，36h后摇床转速120_130r/m，培养3_5天菌种较粘稠并有菌球出现；(2)接种
将液体菌种用10目无菌滤网过滤至灭过菌的罐头瓶内，整个过程保持无菌操作，滤液中添加滤液体积O. 5-1. O倍的无菌水；接种时先用5ml注射器吸取菌液，从蚕蛹尾部数第二节处注射，注射深度l_2cm，每个蚕蛹的注射量O. 1-0. 5ml ；(3)蚕蛹僵化接种完毕后单层摆放在已消毒的培养室内的培养架上，温度控制在16_18°C，1-3天接种处变干结痂；然后将蚕蛹转移到灭过菌的培养盘内，每个蚕蛹之间留有空隙，单层摆放，升温至13-18°C,每天通风30±10min, 4天后蚕蛹的尾部即僵化变硬；僵化时间7_10天，待环节处有菌丝出现，表示僵化完成；(4)出草管理将僵化好的蚕蛹摆放在盒内，盒内加10_20ml水，盒上覆盖透明塑料薄膜，两端留通气孔，温度保持在20-23°C，开始阶段湿度70-80%，光线200-400 Lx，草长出来后，湿度85%以上，温度20-23°C，每天通风8-15min ； (5)接种后的40-50天采收，采收时保持虫草完整，不要折断，采收后立即烘干，避光保存。本发明根据蚕蛹生理特点，采用蚕蛹盒式培养法，解决了柞蚕蛹栽培虫草栽培过程中感染率低、易受杂菌污染、出草率低等问题；可充分灭菌，盒内温、湿度易控制、调节，能充分光照，易采收。本发明出草整齐、培养时间短、操作方便、成功率高达95%以上，虫草商品性好。
具体实施例方式本发明先清洗蚕茧、消毒、晾干；三角瓶中液体培养基，用接种针在试管斜面培养基上刮取需用量的菌块，放于三角瓶中，摇床培养至有菌种较粘稠并有菌球出现；过滤至灭过菌的瓶内，菌球用无菌水冲洗，保持无菌操作；用注射器吸取菌液，从蚕蛹尾部数第二节处注射。单层摆放在消过毒的培养室内，接种处变干结痂，转移到灭过菌的塑料盒内，至尾部僵化变硬，未僵化、有伤口的蚕蛹捡出，至环节处有菌丝出现；摆放在有通气孔的塑料盒内，保持温、湿度,长出蛹虫草,采收,烘干。250ml三角瓶中所装110_130ml液体培养基为PDA培养基。蚕蛹的尾部僵化变硬，伤口处流出的体液沾到其它蚕蛹上，用70%酒精擦拭消毒。培养室内的培养架层高45 ± 5cm,宽度60 ±6cm,长度80 ±8cm,培养架上铺一层塑料窗纱，培养室内放一台臭氧发生器。5ml注射器吸取菌液，从蚕蛹尾部数第二节处注射，注射深度l_2cm，每个蚕蛹的注射量 O. 1-0. 5ml ；将僵化好的蚕蛹摆放在长30 ± 5cm、宽20 ± 2cm、深10 ± Icm方形，有通气孔的塑料盒内。下面用具体实施例详述本发明。例I、(I)接种前准备①挑出蚕茧中混合的死蛹，用水洗掉蛹表面的尘土及夹带的毛片，晾干蛹体表面水分，用臭氧消毒30min。
②制备虫草培养基250ml三角瓶中装IlOmlPDA培养基，用接种针在试管斜面培养基上刮取4个菌块放于三角瓶中；23°C静止培养24小时后摇床转速90r/min轻摇，36h后摇床转速120r/m，培养3天菌种较粘稠并有菌球出现；(2)接种，将液体菌种用10目无菌滤网过滤至灭过菌的罐头瓶内，整个过程保持无菌操作，滤液中添加滤液体积O. 5倍的无菌水；接种时先用5ml注射器吸取菌液，从蚕蛹尾部数第二节处注射，注射深度1cm，每个蚕蛹的注射量O. Iml ；(3)蚕蛹僵化接种完毕后单层摆放在已消毒的培养室内，层高40cm，宽度54cm，长度72cm的培养架上，温度控制在16°C，1_3天接种处变干结痂；然后将蚕蛹转移到灭过菌的塑料盒内，每个蚕蛹之间留有空隙，单层摆放，控温至13°C，每天通风20min，4天后蚕蛹的尾部即僵化变硬；僵化时间7-10天，待环节处有菌丝出现表示僵化完成； (4)出草管理将僵化好的蚕蛹摆放在长30cm、宽20cm、深IOcm方形，有通气孔的塑料盒内，盒内加IOml水，盒上覆盖透明塑料薄膜，两端留通气孔，温度保持在20°C，开始阶段湿度70%，光线200 Lx，草长出来后，湿度85%，温度20°C，每天通风8min ；(5)接种后的50天采收，采收时保持虫草完整，不要折断，采收后立即烘干，避光保存。出草整齐、成功率95%。例2、(I)接种前准备①挑出蚕茧中混合的死蛹，用水洗掉蛹表面的尘土及夹带的毛片，晾干蛹体表面水分，用臭氧或紫外线消毒30min，酒精表面灭菌。②制备虫草培养基250ml三角瓶中装120mlPDA培养基，用接种针在试管斜面培养基上刮取需用量的菌块，放于三角瓶中，每瓶5个菌块；23°C静止培养24小时后摇床转速90r/min轻摇,36h后摇床转速125r/m,培养4天菌种较粘稠并有菌球出现；(2)接种，将液体菌种用10目无菌滤网过滤至灭过菌的罐头瓶内，整个过程保持无菌操作，滤液中添加滤液体积O. 8倍的无菌水；接种时先用5ml注射器吸取菌液，从蚕蛹尾部数第二节处注射，注射深度I. 5cm，每个蚕蛹的注射量O. 2ml ；(3)蚕蛹僵化接种完毕后单层摆放在已消毒的培养室内，层高45cm，宽度60cm，长度80的培养架上，温度控制在16°C，1-3天接种处变干结痂；然后将蚕蛹转移到灭过菌的塑料盒内，每个蚕蛹之间留有空隙，单层摆放，升温至16°C，每天通风30min，4天后蛹的尾部即僵化变硬；僵化时间8天，待环节处有菌丝出现表示僵化完成；(4)出草管理将僵化好的蚕蛹摆放在长30cm、宽20cm、深IOcm方，有通气孔的形塑料盒内，盒内加15ml水，盒上覆盖透明塑料薄膜，两端留通气孔，温度保持在22°C，开始阶段湿度80%，光线300 Lx，草长出来后，湿度90%，温度22°C，每天通风IOmin ；(5)接种后的45天采收，采收时保持虫草完整，不要折断，采收后立即烘干，避光保存。出草整齐、成功率96%。例3、
(I)接种前准备①挑出蚕茧中混合的死蛹，用水洗掉蛹表面的尘土及夹带的毛片，晾干蛹体表面水分，用臭氧或紫外线消毒30min，酒精表面灭菌。②制备虫草培养基250ml三角瓶中装130mlPDA培养基，用接种针在试管斜面培养基上刮取需用量的菌块，放于三角瓶中，每瓶6个菌块；23°C静止培养24小时后摇床转速90r/min轻摇，48h后摇床转速130r/m,培养5天菌种较粘稠并有菌球出现；(2)接种，将液体菌种用10目无菌滤网过滤至灭过菌的罐头瓶内，整个过程保持无菌操作，滤液中添加滤液体积I. O倍的无菌水；接种时先用5ml注射器吸取菌液，从蚕蛹尾部数第二节处注射，注射深度2. 0cm，每个蚕蛹的注射量O. 5ml ；(3)蚕蛹僵化接种完毕后单层摆放在已消毒的培养室内，层高50cm,宽度66cm,长度88cm的培 养架上，温度控制在18°C，1_3天接种处变干结痂；然后将蚕蛹转移到灭过菌的塑料盒内，每个蚕蛹之间留有空隙，单层摆放，升温至18°C，每天通风40min，4天后蛹的尾部即僵化变硬；僵化时间7-10天，待环节处有菌丝出现表示僵化完成；(4)出草管理将僵化好的蚕蛹摆放在长35cm、宽22cm、深Ilcm方形，有通气孔的塑料盒内，盒内加20ml水，盒上覆盖透明塑料薄膜，两端留通气孔，温度保持在23°C，开始阶段湿度80%，光线400 Lx，草长出来后，湿度95%，温度23 °C，每天通风15min ；(5)接种后的50天采收，采收时保持虫草完整，不要折断，采收后立即烘干，避光保存。出草整齐、成功率98%。
权利要求
1.一种柞蚕蛹虫草盒式培养方法，其特征在于具体步骤如下 (1)接种前准备 ①挑出蚕茧中混合的死蚕蛹，用水洗掉蚕蛹表面的尘土及夹带的毛片，晾干蚕蛹体表面水分，用臭氧或紫外线消毒30min ； ②制备虫草培养基250ml三角瓶中装110-130ml液体培养基，用接种针在试管斜面培养基上刮取需用量的菌块，放于三角瓶中，每瓶4-6个菌块；23°C静止培养24小时后摇床转速90r/min轻摇，36h后摇床转速120_130r/m，培养3_5天菌种较粘稠并有菌球出现； (2)接种 将液体菌种用10目无菌滤网过滤至灭过菌的罐头瓶内，整个过程保持无菌操作，滤液中添加滤液体积O. 5-1. O倍的无菌水；接种时先用5ml注射器吸取菌液，从蚕蛹尾部数第二节处注射，注射深度l_2cm，每个蚕蛹的注射量O. 1-0. 5ml ； (3)蚕蛹僵化 接种完毕后单层摆放在已消毒的培养室内的培养架上，温度控制在16-18°C，1-3天接种处变干结痂；然后将蚕蛹转移到灭过菌的培养盘内，每个蚕蛹之间留有空隙，单层摆放，升温至13-18°C,每天通风30±10min, 4天后蚕蛹的尾部即僵化变硬；僵化时间7_10天，待环节处有菌丝出现，表示僵化完成； (4)出草管理 将僵化好的蚕蛹摆放在盒内，盒内加10_20ml水，盒上覆盖透明塑料薄膜，两端留通气孔，温度保持在20-23°C，开始阶段湿度70-80%，光线200-400 Lx,草长出来后，湿度85%以上，温度20-23°C,每天通风8-15min ； (5)接种后的40-50天采收，采收时保持虫草完整，不要折断，采收后立即烘干，避光保存。
2.根据权利要求I所述的一种柞蚕蛹虫草盒式培养方法，其特征在于250ml三角瓶中所装110-130ml液体培养基为PDA培养基。
3.根据权利I所述一种柞蚕蛹虫草盒式培养方法，其特征在于蚕蛹的尾部僵化变硬，伤口处流出的体液沾到其它蚕蛹上，用70%酒精擦拭消毒。
4.根据权利要求I所述的一种柞蚕蛹虫草盒式培养方法，其特征在于尾部未僵化、有伤口的蚕蛹捡出。
5.根据权利I所述一种昨蚕蛹虫草盒式培养方法，其特征在于培养架层高45±5cm,宽度60±6cm,长度80±8cm,培养架上铺一层塑料窗纱单层摆放,培养室内放一台臭氧发生器。
6.根据权利I所述一种柞蚕蛹虫草盒式培养方法，其特征在将僵化好的蚕蛹摆放在长30±5cm、宽20±2cm、深10± Icm方形，有通气孔的塑料盒内。
全文摘要
本发明涉及一种柞蚕蛹虫草盒式培养方法，包括蚕蛹清洗、消毒、接种、虫草培养。菌种用PDA液体培养基培养，培养基高温灭菌接种后摇床23℃左右培养至培养液较粘稠并有菌球出现。培养好的液体菌种过滤至无菌瓶内，菌球用菌液体积0.5-1倍的无菌水冲洗2-3次，整个过程无菌操作。接种时用注射器吸取菌液，从蚕蛹尾部数第二节处注射；接种后单层摆放于消过毒的培养室内，接种处变干结痂，转移到灭过菌的塑料盒内培养，至尾部僵化变硬、环节处有菌丝出现时摆放在有通气孔盒内，保持温、湿度，直至长出蛹虫草，采收，烘干。本发明温、湿度易控制、调节，能充分光照，易采收，虫草培养时间短、操作方便、出草整齐，成功率高达95%以上，虫草商品性好。
文档编号A01G1/04GK102907256SQ201210402218
公开日2013年2月6日 申请日期2012年10月19日 优先权日2012年10月19日
发明者杨德, 周明, 白志尚, 郭鹏, 李露, 薛淑静, 程薇, 高虹, 史德芳, 叶丽秀, 张金木, 王俊 申请人:湖北省农业科学院农产品加工与核农技术研究所