一种沙枣组织培养方法
【专利摘要】一种沙枣组织培养方法，它涉及一种沙枣培养方法。它解决了目前沙枣组织培养扩培数量少、倍数低，或者利用愈伤组织进行繁殖生根率低，成活率低的缺陷。组织培养方法：一、枝条水培，嫩芽剪下处理，而后将带有节间的茎段进行除培养初始培养；二、选初始培养长出的无菌苗叶的叶柄进行培养；三、将步骤二长出的幼芽移植培养，得到沙枣试管苗，然后经过炼苗，即完成沙枣的组织培养。本发明可用于沙枣的种植领域。
【专利说明】一种沙専组织培养方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种沙枣培养方法。
【背景技术】
[0002] 沙率(Elaeagnus angustifolia L.)属胡颓子科胡颓子属，为落叶或常绿灌木或小乔木。别名:银柳胡颓子(东北木本植物图志)、桂香柳(河南)、银柳(辽宁)等。该树种在我国的西北荒漠、半荒漠地区、华北、山东及东北地区均有分布，沙枣也是极少能在戈壁滩上生存下来的树种之一，被誉为沙漠和盐碱地的“宝树”。
[0003]沙枣全身是宝:叶含蛋白质4%、粗脂肪2.4%、糖15.7%，是优质的饲料。沙枣果肉粉含粗蛋白7.94%、粗脂肪1.34%、糖51.15%，可用于副食品加工，也可以代替粮食。沙枣花馥郁清香，可提取芳香油，又是很好的蜜源。沙枣根有根瘤菌，可固氮改善土壤。沙枣种子中子仁含油量20.69%，可用于生产清洁燃料(生物柴油)在未来能源逐渐短缺的背景下，开发利用生物质能源已成为一种必然的发展趋势。沙枣树可营造沙枣经济林、防护林，并能育成风景林，绿化美化城市。
[0004]因此，扩大沙枣的栽种面积和数量有助于环境改善和农民增收，沙枣产量的提高更有利于提高国民身体素质。
[0005]依靠沙枣种子进行种植，不但生长周期长，而且成功率低。目前广泛采用组织培养的方法栽种沙枣，但是，采用沙枣腋芽或顶芽进行组织培养存在扩培数量少、倍数低的问题；而采用组织培养出的叶片或叶柄进行诱导获得愈伤组织，或者采用长出腋芽的茎段诱导获得愈伤组织进行繁殖，又存在生根率低，成活率低的缺陷。
【发明内容】
[0006]本发明是为了解决目前沙枣组织培养扩培数量少、倍数低，或者利用愈伤组织进行繁殖生根率低，成活率低的缺陷，而提供的一种沙枣组织培养方法。
[0007]沙枣组织培养按以下步骤进行:
[0008]一、采集沙枣当年生枝条，反复冲洗后进行水培,嫩芽长到2~3cm长用剪刀剪下放在烧杯中，烧杯口用纱布盖住，清水滴浇2h±0.lh，然后取出嫩芽浸入浓度为75%的酒精中45s，再用无菌水冲洗3次，之后放入浓度为6%的NaClO溶液中处理6min，再用无菌水清洗3~5次，吸干水分后无菌操作将嫩芽上的叶片剪除，并将嫩芽的茎剪切成长度为1±0.2cm、带有节间的茎段，再将茎段接种于不含任何植物激素的MS培养基中，在25°C、每日光照16h、光照强度为20001ux的环境中初始培养10天；
[0009]二、选初始培养长出的无菌苗叶的叶柄部分切成0.5cmX 0.5cm大小，然后转移至每升含有0.5mg6-苄氨基嘌呤和1.5mg萘乙酸的MS培养基中25°C培养60天；然后将愈伤块在无菌条件下切割成0.2cmX0.2cmX0.2cm大小转移至每升含1.0mg萘乙酸和
0.5mg6-苄氨基嘌呤的MS培养基中25°C培养30天，长出幼芽；
[0010]三、将步骤二长出的幼芽移植于每升含有1.0mg萘乙酸和IOmg多效唑的1/2MS培养基中培养20天，得到沙枣试管苗，然后经过炼苗，即完成沙枣的组织培养；
[0011]其中步骤一 MS培养基中蔗糖浓度为30g/L、琼脂浓度为5.5g/L，MS培养基的pH值为 5.8。
[0012]本发明将步骤一嫩芽上的叶片剪除，然后利用嫩芽的茎段长出的再生叶片的叶柄培养获得沙枣愈伤组织，该愈伤组织能够提高沙枣的生根率；本发明利用愈伤块进行繁殖，将扩培倍数提高到125倍以上，而且试管苗的生根率可达到了 92%，生根数可达到4~6根，根平均长度为1.7cm，保证了沙枣的存活率，为加快沙枣的推广种植奠定了技术和物质基础。
[0013]本发明方法对来自新疆的阿勒泰、呼图壁，甘肃的张掖、武威，宁夏的中卫，哈萨克斯坦的那乌尔祖母国家自然保护区等不同种源的沙枣都适用，组织培养的效果和数据基本相同。
【专利附图】
【附图说明】
[0014]图1是【具体实施方式】一中步骤二长出的幼芽图片。图2是【具体实施方式】一步骤三得到的沙枣试管苗图片。
【具体实施方式】
[0015]本发明技术方案不局限于以下所列举【具体实施方式】，还包括各【具体实施方式】间的任意组合。
[0016]【具体实施方式】一:本实施方式沙枣组织培养按以下步骤进行:
[0017]一、采集沙枣当年生枝条，反复冲洗后进行水培，嫩芽长到2~3cm长用剪刀剪下放在烧杯中，烧杯口用纱布盖住，清水滴浇2h±0.lh，然后取出嫩芽浸入浓度为75%的酒精中45s，再用无菌水冲洗3次，之后放入浓度为6%的NaClO溶液中处理6min，再用无菌水清洗3~5次，吸干水分后无菌操作将嫩芽上的叶片剪除，并将嫩芽的茎剪切成长度为1±0.2cm、带有节间的茎段，再将茎段接种于不含任何植物激素的MS培养基中，在25°C、每日光照16h、光照强度为20001ux的环境中初始培养10天；
[0018]二、选初始培养长出的无菌苗叶的叶柄部分切成0.5cmX 0.5cm大小，然后转移至每升含有0.5mg6-苄氨基嘌呤和1.5mg萘乙酸的MS培养基中25°C培养60天；然后将愈伤块在无菌条件下切割成0.2cmX0.2cmX0.2cm大小转移至每升含1.0mg萘乙酸和
0.5mg6-苄氨基嘌呤的MS培养基中25°C培养30天，长出幼芽；
[0019]三、将步骤二长出的幼芽移植于每升含有1.0mg萘乙酸和IOmg多效唑的1/2MS培养基中培养20天，得到沙枣试管苗，然后经过炼苗，即完成沙枣的组织培养；
[0020]其中步骤一 MS培养基中蔗糖浓度为30g/L、琼脂浓度为5.5g/L，MS培养基的pH值为 5.8。
[0021]本实施方式选用分化能力强的叶柄部分进行诱导。
[0022]本实施方式选用的是锦绣I号沙枣进行试验和数据统计。
[0023]本实施方式采集沙枣优良单株的当年生枝条；嫩芽长到2~3cm长一般需要水培12~15天。
[0024]本实施方式步骤二 培养过程中每日光照均为16h、光照强度均为2000 Iux0[0025]将本实施方式获得的试管苗经过炼苗转移到以蛭石和珍珠岩为基质的营养土中进行移栽，其中蛭石与珍珠岩的体积比为2:1。
[0026]本实施方式在室内进行催芽，可减少嫩芽表面灰尘和细菌的数量，从而降低NaClO溶液的使用浓度，缩短处理时间，减少褐化比例的同时减少污染比例，提高外植体的存活率。
[0027]
【权利要求】
1.一种沙枣组织培养方法，其特征在于沙枣组织培养按以下步骤进行:一、采集沙枣当年生枝条，反复冲洗后进行水培，嫩芽长到2~3cm长用剪刀剪下放在烧杯中，烧杯口用纱布盖住，清水滴浇2h±0.lh，然后取出嫩芽浸入浓度为75%的酒精中45s，再用无菌水冲洗3次，之后放入浓度为6%的NaClO溶液中处理6min，再用无菌水清洗3~5次，吸干水分后无菌操作将嫩芽上的叶片剪除，并将嫩芽的茎剪切成长度为1±0.2cm、带有节间的茎段，再将茎段接种于不含任何植物激素的MS培养基中，在25°C、每日光照16h、光照强度为20001ux的环境中初始培养10天；二、选初始培养长出的无菌苗叶的叶柄部分切成0.5cmX0.5cm大小，然后转移至每升含有0.5mg6-苄氨基嘌呤和1.5mg萘乙酸的MS培养基中25°C培养60天；然后将愈伤块在无菌条件下切割成0.2cmX0.2cmX0.2cm大小转移至每升含1.0mg萘乙酸和0.5mg6_节氨基嘌呤的MS培养基中25°C培养30天，长出幼芽；三、将步骤二长出的幼芽移植于每升含有1.0mg萘乙酸和IOmg多效唑的1/2MS培养基中培养20天，得到沙枣试管苗，然后经过炼苗，即完成沙枣的组织培养；其中步骤一 MS培养基中蔗糖浓度为30g/L、琼脂浓度为5.5g/L，MS培养基的pH值为5.8。
2.根据权利要求1所述的一种沙枣组织培养方法，其特征在于步骤一反复冲洗后将枝条剪成30±0.5cm长，枝条放入透明玻璃瓶中基部浸入清水中2~4cm进行水培，每天更换I次清水，并且每天用无菌纯净水喷洒枝条表面3~20次。
3.根据权利要求2所述的一种沙枣组织培养方法，其特征在于步骤一水培在朝阳的室内进行，室温保持在24 ± 0.5 °C。
【文档编号】A01H4/00GK103583361SQ201310547387
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年11月7日 优先权日:2013年11月7日
【发明者】刘力强, 宋福强 申请人:黑龙江锦绣大地生物工程有限公司