一种预防杂交兰拜拉丝病毒的育苗方法
【专利摘要】本发明公开了一种预防杂交兰拜拉丝病毒的育苗方法，其特征在于，主要步骤包括：a、外植体的获取和消毒，b、不定芽诱导和母本后期观察；c、组织培养；d、组培苗生根、炼苗；本发明通过逐步筛选和培养，能够有效预防具有拜拉丝病毒组培苗上市；本发明可以节约时间，为新品种快速上市赢得了时间，具有极高的推广价值。
【专利说明】一种预防杂交兰拜拉丝病毒的育苗方法
[0001]
【技术领域】 本发明涉及植物栽培及育苗【技术领域】，尤其涉及一种预防杂交兰拜拉丝病毒的育苗方 法。
【背景技术】
[0002] 杂交兰在我国是指大花蕙兰与国兰之间经过杂交培育出的兰花新品种。它既具有 大花蕙兰的花大、色艳、花期长的优点，又具有国兰的幽香、典雅和韵味。既可满足欧美消 费者的消费需求，又符合中国、日本、韩国等亚洲人们的审美情趣；更重要的是，杂交兰克服 了组培快繁和新品种选育等核心技术难题，能进行产业化生产，能够快速上量，满足市场需 求。因此杂交兰自投入市场以来，受到欧、美及日本、韩国、中国等亚洲消费者的普遍青睐， 达到量价齐升的态势，是市场前景非常广阔的一个新兴年宵花品种。
[0003] 但是杂交兰组培快繁中极有可能将具有拜拉丝病的植株作为母本，繁殖出具有拜 拉丝病毒的后代。拜拉丝病毒组培苗销售给种植户后，会造成种植户的巨大损失，同时也给 组培公司造成声誉和经济上的负面影响。得了拜拉丝的杂交兰叶片上出现长条形斑纹，"似 中药杜仲折断后用力拉长的丝状体。该病至今仍属无法根治的病害，因而被称为兰花的"艾 滋病"和"癌症"。病毒病不仅至今无法根治，而且会遗传和传染。即使购买时是健康苗，运输 中或销售时与病毒苗混放，都有潜伏拉丝病毒的可能。同时，拜拉丝病株具有一定潜伏期， 拜拉丝病毒侵染后，杂交兰叶片并不即时出现病症，有时要隔一二代后显现病症，要在其新 芽展叶时或新芽伸长期，征状才显露于新叶上。这就给识别拜拉丝病毒植株带来难以解决 的困难。
[0004] 本课题组经过两年研究，总结出一套预防拜拉丝病毒的新品种开发程序，能够有 效预防具有拜拉丝病毒组培苗上市。同时，可以节约时间，为新品种快速上市赢得了时间。
【发明内容】
[0005] 本发明旨在为扩大销售时间提供一种催花的方法，使文心兰提前开花。
[0006] 本发明目的通过以下技术方案来予以实现： 一种预防杂交兰拜拉丝病毒的育苗方法，其中主要步骤包括： a、 外植体的获取和消毒，选出2-10株健康的杂交兰母本，从每株杂交兰母本上取1-3 个新芽，将杂交兰新芽从基部切下，每株给予相应编号，先将杂交兰新芽最外层2-3层叶片 剥掉，用饱和洗衣粉溶液浸泡20-30min，流水冲洗10-30min，再在超净工作台上，将外层叶 片全部剥掉，露出茎尖和侧芽，并用刀片将芽基部黑色部分切除，然后用1. 0%次氯酸钠溶 液浸泡10_30min，无菌水冲洗5-6次，用灭菌滤纸吸干表面水分备用； b、 不定芽诱导和母本后期观察；将上述外植体从中间纵切成0-4块，较小新芽不 用纵切，每块至少含有1个侧芽或顶芽，将小块插入不定芽诱导培养基中放置于培养室 内暗培养2d，然后转入光照培养，诱导不定芽，并做好相应编号；不定芽诱导培养基为： MS+6-BA0. 5-3. Omg/L+2. 5% 白糖 +5-10% 土豆泥 +0? 7% 卡拉胶，pH5. 6-5. 8.培养室温度为 20-25°C，光照时间为10-16h/d，光照强度为60-100iim〇l m-2s-l ;观察母本后新长出的第 二、三个芽上是否有拜拉丝病毒感染，将前期无拜拉丝后期表现出拜拉丝感染的母本选出， 销毁，并将编号记录下来；将利用感染拜拉丝病毒母本上的芽诱导出来的丛生芽全部选出、 销毁； c、 继代增殖；将剩余母本后代诱导出来的不定芽，转到MS+6-BAl-3mg/L+2. 5%白糖+ 5-10% 土豆泥+0. 7%卡拉胶，pH5. 6-5. 8的培养基上继代增殖，继代间隔为20-30天； d、 组培苗生根、炼苗；将丛生芽继代6-8代后，挑选高3-5cm并且粗壮的单芽，从基部切 下，转到生根培养基上生根；生根培养基为：1/2MS+NAA0. 1-0. 5mg/L+IBA0. 5-lmg/L+香蕉 汁1%-5%+白糖2%+卡拉胶0. 7%+2g/l活性炭，pH5. 6-5. 8 ;培养条件不变；经过30d，新根长 出3条以上，根长3cm以上时，将组培苗移到温室大棚炼苗7-15d ;炼苗条件为前两天拉双 层遮阴网，两天后单层遮阴网。
[0007] 所采用的杂交兰母本为经过半年适地种植，为比较粗壮、无病虫害并且观察杂交 兰新芽没有拜拉丝病毒的植株，每株做好编号。
[0008] 所述适地种植为：按照该品种生长习性，尽量满足该品种栽培所需环境进行温室 大棚种植，每盆杂交兰之间间隔40-70cm，防止彼此摩擦并保证空气流通。
[0009] 每取一个外植体，将刀片蘸酒精并用火烧过后，再取另外一个外植体。
[0010] 本发明的有益效果：1、通过逐步筛选和培养，能够有效预防具有拜拉丝病毒组培 苗上市；2、本发明可以节约时间，为新品种快速上市赢得了时间；3、每取一个外植体，将刀 片蘸酒精并用火烧过后，再取另外一个外植体，将刀片进行消毒，保证了外植体之间不交叉 感染；4、外植体消毒采用饱和洗衣粉溶液浸泡后冲洗干净再用次氯酸钠浸泡，通过此处理 方法可以有效的将新芽所携带的病原菌消灭干净；5、每盆杂交兰之间间隔40-70cm，可以 有效防止彼此摩擦交叉感染并保证空气流通；6、生根培养基上加有香蕉汁，可以有效促进 组培苗的生根，提高了组培苗生根的数量；7、将组培苗移到温室大棚炼苗7-15d ;炼苗条件 为前两天拉双层遮阴网，两天后单层遮阴网，可以实现组培苗到大棚栽培的顺利过渡。
【具体实施方式】
[0011] 下面结合具体实施例来进一步说明本发明。
[0012] 实施例1 一种预防杂交兰拜拉丝病毒的育苗方法，其中主要步骤包括： a、 外植体的获取和消毒，选2株健康的杂交兰母本，从每株杂交兰母本上取2个新芽， 将杂交兰新芽从基部切下，每株编号为A、B，杂交兰切下的新芽为外植体，编号为AOl、A02 ; B01、B02 (每取一个外植体，将刀片蘸酒精并用火烧过后，再取另外一个外植体)，分别将外 植体A01、A02、B01、B02的最外层2-3层叶片剥掉，用饱和洗衣粉溶液浸泡20-30min，流水 冲洗10-30min，再在超净工作台上，将外层叶片全部剥掉，露出茎尖和侧芽，并用刀片将芽 基部黑色部分切除，然后用1. 0%次氯酸钠溶液浸泡10_30min，无菌水冲洗5-6次，用灭菌滤 纸吸干表面水分备用； b、 不定芽诱导和母本后期观察；将外植体A01、A02 ;B01、B02根据大小从中间纵切成 0-4块，较小外植体不用纵切，每块至少含有1个侧芽或顶芽，将小块分别插入不定芽诱导 培养基中放置于培养室内暗培养2d，然后转入光照培养，诱导不定芽，并做好编号AO 1C， A01D，A02C，B01C，B01D，B02C，B02D ;所采用的不定芽诱导培养基为：MS+6-BA0. 5-3. Omg/ L+2. 5%白糖+5-10% 土豆泥+0. 7%卡拉胶，pH5. 6-5. 8.培养室温度为20-25°C，光照时间为 10-1611/(1，光照强度为60-10011111〇1111-2 8-1;观察母本4、8后新长出的第二、三个芽上是否 有拜拉丝病毒感染，如发现B新长出的芽上有拜拉丝病毒感染，将B母本选出，销毁，并将利 用感染拜拉丝病毒母本上的芽诱导出来的丛生芽B01C，B01D，B02C，B02D ;全部选出、销毁； c、 继代增殖；将剩余母本后代诱导出来的不定芽A01C，A01D，A02C，转到 MS+6-BAl-3mg/L+2. 5%白糖+ 5-10% 土豆泥+0. 7%卡拉胶，pH5. 6-5. 8的培养基上继代增 殖，继代增殖间隔为20天； d、 组培苗生根、炼苗；将丛生芽继代6-8代后，挑选高3-5cm并且粗壮的单芽，从基部切 下，转到生根培养基上生根；生根培养基为：1/2MS+NAA0. 1-0. 5mg/L+IBA0. 5-lmg/L+香蕉 汁1%-5%+白糖2%+卡拉胶0. 7%+2g/l活性炭，pH5. 6-5. 8 ;培养条件不变；经过30d，新根长 出3条以上，根长3cm以上时，将组培苗移到温室大棚炼苗7-15d ;炼苗条件为前两天拉双 层遮阴网，两天后单层遮阴网。
[0013] 实施例2 一种预防杂交兰拜拉丝病毒的育苗方法，其中主要步骤包括： a、 外植体的获取和消毒，选4株健康的杂交兰母本，从每株杂交兰母本上取1个新芽， 将杂交兰新芽从基部切下，每株编号为A、B、C、D，杂交兰切下的新芽为外植体，编号为AOl、 B01、C01、DOl (每取一个外植体，将刀片蘸酒精并用火烧过后，再取另外一个外植体)，分别 将外植体AOl、BOl、COl、DOl的最外层2-3层叶片剥掉，用饱和洗衣粉溶液浸泡20-30min， 流水冲洗10_30min，再在超净工作台上，将外层叶片全部剥掉，露出茎尖和侧芽，并用刀片 将芽基部黑色部分切除，然后用1. 〇%次氯酸钠溶液浸泡10_30min，无菌水冲洗5-6次，用灭 菌滤纸吸干表面水分备用； b、 不定芽诱导和母本后期观察；将外植体A01、B01、C01、DOl根据大小从中间纵切 成0-4块，较小外植体不用纵切，每块至少含有1个侧芽或顶芽，将小块分别插入不定 芽诱导培养基中放置于培养室内暗培养2d，然后转入光照培养，诱导不定芽，并做好编 号A01C，A01D，B01C，B01D，C01C，C01D，D01C，DOlD ;所采用的不定芽诱导培养基为： MS+6-BA0. 5-3. Omg/L+2. 5% 白糖 +5-10% 土豆泥 +0? 7% 卡拉胶，pH5. 6-5. 8.培养室温度为 20-251：，光照时间为10-1611/(1，光照强度为 60-10011111〇1111-28-1;观察母本4、8、(：、0后新 长出的第二、三个芽上是否有拜拉丝病毒感染，如发现C新长出的芽上有拜拉丝病毒感染， 将母本C选出，销毁，并将利用感染拜拉丝病毒母本上的芽诱导出来的丛生芽C01C，COlD全 部选出、销毁； c、 继代增殖；将剩余母本后代诱导出来的不定芽A01C，A01D，B01C，B01D，D01C，DOlD 转到MS+6-BAl-3mg/L+2. 5%白糖+ 5-10% 土豆泥+0. 7%卡拉胶，pH5. 6-5. 8的培养基上继 代增殖，继代增殖间隔为30天； d、 组培苗生根、炼苗；将丛生芽继代6-8代后，挑选高3-5cm并且粗壮的单芽，从基部切 下，转到生根培养基上生根；生根培养基为：1/2MS+NAA0. 1-0. 5mg/L+IBA0. 5-lmg/L+香蕉 汁1%-5%+白糖2%+卡拉胶0. 7%+2g/l活性炭，pH5. 6-5. 8 ;培养条件不变；经过30d，新根长 出3条以上，根长3cm以上时，将组培苗移到温室大棚炼苗7-15d ;炼苗条件为前两天拉双 层遮阴网，两天后单层遮阴网。
[0014] 实施例3 一种预防杂交兰拜拉丝病毒的育苗方法，其中主要步骤包括： a、 外植体的获取和消毒，选4株健康的杂交兰母本，从每株杂交兰母本上取1个新芽， 将杂交兰新芽从基部切下，每株编号为A、B、C、D，杂交兰切下的新芽为外植体，编号为AOl、 B01、C01、DOl (每取一个外植体，将刀片蘸酒精并用火烧过后，再取另外一个外植体)，分别 将外植体AOl、BOl、COl、DOl的最外层2-3层叶片剥掉，用饱和洗衣粉溶液浸泡20-30min， 流水冲洗10_30min，再在超净工作台上，将外层叶片全部剥掉，露出茎尖和侧芽，并用刀片 将芽基部黑色部分切除，然后用1. 〇%次氯酸钠溶液浸泡10_30min，无菌水冲洗5-6次，用灭 菌滤纸吸干表面水分备用； b、 不定芽诱导和母本后期观察；将外植体A01、B01、C01、DOl根据大小从中间纵切 成0-4块，较小外植体不用纵切，每块至少含有1个侧芽或顶芽，将小块分别插入不定 芽诱导培养基中放置于培养室内暗培养2d，然后转入光照培养，诱导不定芽，并做好编 号A01C，A01D，B01C，B01D，C01C，C01D，D01C，DOlD ;所采用的不定芽诱导培养基为： MS+6-BA0. 5-3. Omg/L+2. 5% 白糖 +5-10% 土豆泥 +0? 7% 卡拉胶，pH5. 6-5. 8.培养室温度为 20-25°C，光照时间为10_16h/d，光照强度为60-100iimol m-2s-l ;观察母本A、B、C、D后新 长出的第二、三个芽上是否有拜拉丝病毒感染，4个母本上都没有发现拜拉丝病毒感染的现 象； c、 继代增殖；将母本后代诱导出来的不定芽A01C，A01D，B01C，B01D，C01C，C01D， D01C，DOlD 转到 MS+6-BAl-3mg/L+2. 5% 白糖 + 5-10% 土豆泥 +0. 7% 卡拉胶，pH5. 6-5. 8 的培 养基上继代增殖，继代增殖间隔为25天； d、 组培苗生根、炼苗；将丛生芽继代6-8代后，挑选高3-5cm并且粗壮的单芽，从基部切 下，转到生根培养基上生根；生根培养基为：1/2MS+NAA0. 1-0. 5mg/L+IBA0. 5-lmg/L+香蕉 汁1%-5%+白糖2%+卡拉胶0. 7%+2g/l活性炭，pH5. 6-5. 8 ;培养条件不变；经过30d，新根长 出3条以上，根长3cm以上时，将组培苗移到温室大棚炼苗7-15d ;炼苗条件为前两天拉双 层遮阴网，两天后单层遮阴网。
[0015] 对比例1 a、 外植体的获取，选3株健康的杂交兰母本，从每株杂交兰母本上取1个新芽，将杂交 兰新芽从基部切下，每株编号为A、B、C，杂交兰切下的新芽为外植体，编号为AOl、BOl、COl (每取一个外植体，将刀片蘸酒精并用火烧过后，再取另外一个外植体)，分别将外植体A01、 B0UC01的最外层2-3层叶片剥掉，无消毒过程； b、 不定芽诱导和母本后期观察；将外植体A01、B01、C01、DOl根据大小从中间纵切 成0-4块，较小外植体不用纵切，每块至少含有1个侧芽或顶芽，将小块分别插入不定 芽诱导培养基中放置于培养室内暗培养2d，然后转入光照培养，诱导不定芽，并做好编 号A01C，A01D，B01C，B01D，C01C，C01D，D01C，DOlD ;所采用的不定芽诱导培养基为： MS+6-BA0. 5-3. Omg/L+2. 5% 白糖 +5-10% 土豆泥 +0? 7% 卡拉胶，pH5. 6-5. 8.培养室温度为 20-25°C，光照时间为10_16h/d，光照强度为60-100iimol m-2s-l ;观察母本A、B、C、D后新 长出的第二、三个芽上是否有拜拉丝病毒感染，如发现C新长出的芽上有拜拉丝病毒感染， 将母本C选出，销毁，并将利用感染拜拉丝病毒母本上的芽诱导出来的丛生芽C01C，COlD全 部选出、销毁； C、继代增殖；将剩余母本后代诱导出来的不定芽A01C，A01D，B01C，B01D，D01C，DOlD 转到MS+6-BAl-3mg/L+2. 5%白糖+ 5-10% 土豆泥+0. 7%卡拉胶，pH5. 6-5. 8的培养基上继 代增殖，继代增殖间隔为30天； d、组培苗生根、炼苗；将丛生芽继代6-8代后，挑选高3-5cm并且粗壮的单芽，从基部切 下，转到生根培养基上生根；生根培养基为：1/2MS+NAA0. 1-0. 5mg/L+IBA0. 5-lmg/L+香蕉 汁1%-5%+白糖2%+卡拉胶0. 7%+2g/l活性炭，pH5. 6-5. 8 ;培养条件不变；经过30d，新根长 出3条以上，根长3cm以上时，将组培苗移到温室大棚炼苗7-15d ;炼苗条件为前两天拉双 层遮阴网，两天后单层遮阴网。
[0016] 对比例2 通过新芽生长分出的新苗栽培，不经过外植体培养。
[0017] 将以上实施例培养的秧苗在温室大棚炼苗后移至花盆栽培，通过以下表格对实施 例中的结果进行统计和对比如下：
【权利要求】
1. 一种预防杂交兰拜拉丝病毒的育苗方法，其特征在于，主要步骤包括： a、 外植体的获取和消毒，选出2-10株健康的杂交兰母本，从每株杂交兰母本上取1-3 个新芽，将杂交兰新芽从基部切下，每株给予相应编号，先将杂交兰新芽最外层2-3层叶片 剥掉，用饱和洗衣粉溶液浸泡20-30min，流水冲洗10-30min，再在超净工作台上，将外层叶 片全部剥掉，露出茎尖和侧芽，并用刀片将芽基部黑色部分切除，然后用1. 0%次氯酸钠溶 液浸泡10_30min，无菌水冲洗5-6次，用灭菌滤纸吸干表面水分备用； b、 不定芽诱导和母本后期观察；将上述外植体从中间纵切成0-4块，较小新芽不用纵 切，每块至少含有1个侧芽或顶芽，将小块插入不定芽诱导培养基中放置于培养室内暗培 养2d，然后转入光照培养，诱导不定芽，并做好相应编号；观察母本后新长出的第二、三个 芽上是否有拜拉丝病毒感染，将前期无拜拉丝后期表现出拜拉丝感染的母本选出，销毁，并 将编号记录下来；将利用感染拜拉丝病毒母本上的芽诱导出来的丛生芽全部选出、销毁； c、 继代增殖；将剩余母本后代诱导出来的不定芽，转到不定芽培养基上继代增殖，继代 间隔为20-30天； d、 组培苗生根、炼苗；将丛生芽继代6-8代后，挑选高3-5cm并且粗壮的单芽，从基部切 下，转到生根培养基上生根，培养条件不变；经过30d，新根长出3条以上，根长3cm以上时， 将组培苗移到温室大棚炼苗7-15d ;炼苗条件为前两天拉双层遮阴网，两天后单层遮阴网。
2. 根据权利要求1所述的预防杂交兰拜拉丝病毒的育苗方法，其特征在于：所采用的 杂交兰母本为经过半年适地种植，为比较粗壮、无病虫害并且观察杂交兰新芽没有拜拉丝 病毒的植株，每株做好编号。
3. 根据权利要求2所述的预防杂交兰拜拉丝病毒的育苗方法，其特征在于所述适地种 植为：按照该品种生长习性，尽量满足该品种栽培所需环境进行温室大棚种植，每盆杂交兰 之间间隔40-70cm，防止彼此摩擦并保证空气流通。
4. 根据权利要求1所述的预防杂交兰拜拉丝病毒的育苗方法，其特征在于：每取一个 外植体，将刀片蘸酒精并用火烧过后，再取另外一个外植体。
5. 根据权利要求1所述的的预防杂交兰拜拉丝病毒的育苗方法，其特征在于：不定芽 诱导培养基为：MS+6-BA0. 5-3. Omg/L+2. 5% 白糖 +5-10% 土豆泥 +0. 7% 卡拉胶，pH5. 6-5. 8， 培养室温度为20-25°C，光照时间为10_16h/d，光照强度为60-100μπιο1 m-2s-l。
6. 根据权利要求1所述的的预防杂交兰拜拉丝病毒的育苗方法，其特征在于：不定芽 培养基为MS+6-BAl-3mg/L+2. 5%白糖+ 5-10% 土豆泥+0. 7%卡拉胶，pH5. 6-5. 8的培养基， 培养室温度为20-25°C，光照时间为10_16h/d，光照强度为60-100ymol m-2s-l。
7. 根据权利要求1所述的的预防杂交兰拜拉丝病毒的育苗方法，其特征在于：生根培 养基为：1/2MS+NAA0. 1-0. 5mg/L+IBA0. 5-lmg/L+ 香蕉汁 1%-5%+ 白糖 2%+ 卡拉胶 0· 7%+2g/ 1 活性炭，ρΗ5· 6-5. 8。
【文档编号】A01H4/00GK104255492SQ201410480231
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年9月19日 优先权日:2014年9月19日
【发明者】范俊强, 尹金华, 张善信, 傅海平 申请人:东莞市生物技术研究所, 东莞职业技术学院, 东莞市讯禾园艺科技有限公司