杀微生物用水包油型分散液的制作方法

本发明涉及一种包含针叶树脂酸的水性抗微生物用水包油型分散液(乳液)，该分散液的制备方法，及其在医疗和非医疗产品中作为抗微生物剂和抗炎剂的应用。本发明进一步涉及包含所述分散液的药物制剂。
背景技术：
：通常来源于云杉和松树的针叶树脂已广泛用于传统医学中，用于治愈皮肤伤口和皮肤感染。在此应用中，树脂通常被加工到(混合到)动物脂肪中。与脂肪(动物脂肪、黄油等)混合的树脂或松香针对多种细菌、真菌、霉菌甚至针对病毒具有强的抗微生物和杀微生物效果，特别是用于治疗微生物型伤口感染。术语树脂和松香在文献中混用。树脂通常用于表示例如特定类型的塑料、各种合成的聚合物，还用作表示各种植物界的渗出物或提取物的术语。除了术语“树脂”，如“松香胶”或“松香”这样的术语也广泛用作树脂的同义词。文献中描述了针叶树脂的抗微生物特性，如抗真菌和抗细菌性质等，甚至抗病毒特性。已经表明，特别是树脂和松香中的树脂酸具有抗微生物的潜力。例如，针叶树脂具有抗病原性革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的广谱抗微生物特性。针叶树脂和松香极难溶于水，但一定程度地溶于醇或有机溶剂。如果树脂/松香或树脂酸与纯水混合，所得水溶液不能抗微生物。如果溶解于醇溶液中的树脂/松香化合物与水混合，则会沉淀，并且所得水级分不能抗微生物。市场上可获得基于脂肪的树脂药膏，其在治疗皮肤伤口和真菌指甲感染方面显示有效。这些药膏基于树脂或松香与各种脂肪的混合物。wo2011/042613a2描述了一种在醇中包含针叶树脂、松香、树脂酸和/或它们的衍生物的抗微生物组合物。wo2013/060936a2公开了一种包含针叶树脂酸和分散剂的水性抗微生物组合物。树脂或松香首先以诸如甘油等分散剂分散，分散后向其中加入水性介质(例如生理盐水)以提供包含来自树脂或松香的水混溶性组分的抗微生物水性分散液。然而，因为甘油是亲水的，含甘油的树脂/松香组合物可能并不适用于所有的应用，特别是在医疗应用中。因此，含甘油的组合物的应用受到限制。在能够提供包含树脂或松香的水性水混溶性溶液之前，针叶树脂或松香作为抗微生物剂，特别是在人类和多种动物的治疗中的广泛应用在大实体中是不可能的。因此，需要包含来自针叶树脂或松香的水“溶性”组分的具有抗微生物性和抗炎性的水性和水混溶性组合物。技术实现要素：本发明人出乎意料地发现，首先将针叶树脂或松香溶解在油中，然后向油中加入水性介质，可以提供具有抗微生物性和抗炎性的针叶树脂或松香的稳定的水性组合物。获得包含针叶树脂酸的稳定的水包油型分散液，可对其用如盐溶液、糖溶液、水性输注液和注射液等水性稀释剂、溶剂或赋形剂进一步稀释，而无任何沉积物形成。一方面，本发明提供了一种包含针叶树脂酸的水包油型分散液，其中，所述水包油型分散液中的针叶树脂酸浓度在约1ppm～约5000ppm的范围内。另一方面，本发明提供了一种用于制造包含针叶树脂酸的水包油型分散液的方法，其包括以下步骤：-提供针叶树脂酸，-将针叶树脂酸溶解在油中以提供混合物，-向所述混合物中加入水性介质以提供水包油型分散液层和油包水型分散液层，-分离和回收水包油型分散液层。另一方面，本发明提供了本发明的或通过本发明的方法制备的包含针叶树脂酸的水包油型分散液在非医疗应用中作为抗微生物剂的应用。另一方面，本发明提供了本发明的或通过本发明的方法制备的包含针叶树脂酸的水包油型分散液，其用作治疗或预防人和动物的感染和/或炎症的抗微生物剂或抗炎剂。另一方面，本发明提供了包含本发明的或通过本发明的方法制备的包含针叶树脂酸的水包油型分散液的药物制剂。还描述了一种治疗人和动物的炎症和/或感染、或者预防人和动物的疾病的方法，所述方法包括对所述受试者施用治疗量或预防量的本发明的或通过本发明的方法制备的包含针叶树脂酸的水包油型分散液。附图说明图1～4显示本发明的水包油型·乳液的抗微生物效果。具体实施方式一方面，本发明提供了一种包含针叶树脂酸的水包油型分散液，其中，水包油型分散液中的针叶树脂酸浓度在约1ppm～约5000ppm的范围内。另一方面，本发明提供了一种用于制造包含针叶树脂酸的水包油型分散液的方法，其包括以下步骤：-提供针叶树脂酸，-将针叶树脂酸溶解在油中以提供混合物，-向所述混合物中加入水性介质以提供水包油型分散液层和油包水型分散液层，-分离和回收水包油型分散液层。本发明的或通过本发明的方法制备的水包油型分散液稳定，可均匀地分散于水性介质中并且可用水性介质稀释。本发明的或通过本发明的方法制备的水包油型分散液具有抗微生物性和抗炎性。应当注意的是，抗炎作用不同于抗微生物效果，并且表示生物组织和细胞的无菌反应。如上所述，术语树脂和松香在文献中混用。在本发明中，术语“针叶树脂”表示天然愈伤组织树脂，其为固体或高粘性材料，其从愈伤组织渗出到针叶树的树干的受伤表面上。树干上的天然愈伤组织树脂通常聚集成多色块状物。针叶树脂是包括香豆酸、树脂酸、木脂素、脂肪酸和挥发性萜烯化合物的各种化学化合物的混合物。术语“松香”是指对作为针叶树的硫酸盐法制浆的副产物获得的妥尔油进行蒸馏获得的树脂酸级分。松香富含各种树脂酸，但基本上不含存在于天然愈伤组织树脂中的木脂素和香豆酸。然而，松香级分可以包含少量的脂肪酸(1-3％w/w)。市场上可购得商业化的松香产品。在本发明的分散液和方法中，针叶树脂酸可作为针叶树脂、松香、或它们的混合物而提供。在本发明中使用的针叶树脂酸可来源于各种来源。在一个实施方式中，针叶树脂酸作为从针叶树干收集的固体或高粘性形式的天然针叶树脂提供。针叶树脂可纯化，以提供富含树脂酸的树脂级分，其基本不含有诸如树皮和砂粒等杂质以及木脂素和脂肪酸。在另一个实施方式中，针叶树脂酸作为松香提供。在另一个实施方式中，针叶树脂酸作为从包含多种针叶树脂酸的组合物中分离的特定树脂酸级分提供。针叶树脂酸还可以作为来自多种来源的混合物提供。针叶树脂酸能够作为具有各种固体物质含量的溶液至粉末或颗粒的形式提供。针叶树脂酸是存在于树脂和松香中的有机酸。这些酸包括水溶性树脂酸，例如，脱氢枞酸、7β-羟基脱氢枞酸、7α-羟基脱氢枞酸、15-羟基脱氢枞酸、7β,15-二羟基脱氢枞酸、7α,15-羟基脱氢枞酸、18-羟基脱氢枞酸、脱氢枞酸的其他羟基化衍生物及它们的混合物。针叶树脂酸溶于油。任何对人和动物的健康无害的油可在本发明中使用。适合的油包括但不限于，矿物油、诸如植物油、菜油、动物脂肪等有机油、例如石蜡、矿脂、棕榈油、亚麻籽油、菜籽油、葵花油、鳄梨油、芝麻油、坚果油和橄榄油。还可以使用所述油的混合物。至少一部分树脂酸溶于油中。针叶树脂或松香通常以约1％～约50％(w/w)的浓度引入油中。在一个实施方式中，树脂或松香的浓度为约5％～约30％。在另一个实施方式中，浓度为约10％～约20％(w/w)。在一个实施方式中，在将针叶树脂或松香溶解到油中之前，首先将树脂或松香溶解在诸如醇或丙酮等挥发性有机溶剂中，以提供纯化的树脂级分。可以使用任何适合的醇，其包括但不限于乙醇。当使用天然愈伤组织树脂作为起始材料时，该纯化特别适合。任何不溶于有机溶剂的固体物质都可被滤除。使挥发性溶剂蒸发以提供富含树脂酸的粘性纯化树脂。如果需要，可以通过加热来增强蒸发。纯化的树脂级分的固体物质通常为至少约60％(w/w)。添加到溶解有针叶树脂酸的油中的水性介质可以是任意水溶液。在一个实施方式中，水性介质是生理盐水溶液。当抗微生物组合物用在人医学和兽医学领域中的应用时，优选生理盐水溶液。在另一个实施方式中，水性介质是水。将水性介质以约1:50～约50:1的体积比添加到油和针叶树脂酸的混合物中。在此步骤中，水溶性树脂酸从油中进入到水性介质中。在一个实施方式中，以至多约1:15的体积比添加水性介质。在另一个实施方式中，体积比为约1:1(体积/体积)。通过向油中添加水性介质，得到两个分离层，即上层水包油型分散液层(水层)和下层油包水型分散液层(油层)。水包油型分散液是指油分散在水性介质的连续相中的乳液。水包油型分散液主要由水组成，含有分散在水中的少部分小油滴。油包水型分散液是指水分散在油的连续相中的乳液。油包水型分散液主要由油组成，含有分散在油中的少部分小水滴。两种乳液都有利地包含一方面可溶于油中，另一方面位于水性介质中的针叶树脂酸。在一个实施方式中，在向油中添加水性介质后，摇晃或混合整个油-水性介质组合物以提高针叶树脂或松香在水包油型分散液中的分散性。此外，出于所述目的可采用热处理。在向油中添加水性介质后，整个油-水性介质组合物(可选地，经摇晃的、混合的和/或热处理)通常稳定1小时～12小时以提供两个分离的分散层。可添加任意适合的乳化剂以增强针叶树脂或松香在水包油型分散液(乳液)中的乳化。适合的乳化剂是实例是聚山梨醇酯。任何在油中或水性介质中不溶解并在上层水层和下层油层之间析出的固体物质都可以被滤除。最后，得到均匀分布和稳定的胶体水包油型分散液(乳液)。此分散液可以用诸如盐水、糖溶液、水性输注液和注射液等水溶液进一步稀释，而不形成任何沉淀物或沉积物。可以通过用水性介质稀释分散液来调节分散液的抗微生物效果。例如，分散液可以以至多约1:6的体积比稀释。在一个实施方式中，分散液以1:3的体积比稀释。在另一个实施方式中，分散液以1:4的体积比稀释。本发明的或通过本发明的方法制备的水包油型分散液中的针叶树脂酸的浓度为约1ppm～约5000ppm。在另一个实施方式中，浓度为约1ppm～约2000ppm。在另一个实施方式中，浓度为约1ppm～约500ppm。在另一个实施方式中，浓度为约10ppm～约100ppm。本发明的或通过本发明的方法制备的水包油型分散液具有抗微生物性和抗炎性。此外，本发明的方法中获得的油包水型分散液显示抗微生物性和抗炎性。本发明的分散液不含诸如乙醇等高挥发性有机化合物。另一方面，本发明提供了本发明的或通过本发明的方法制备的包含针叶树脂酸的水包油型分散液在非医疗应用中作为抗微生物剂或防腐剂的应用。出于抗微生物、保护、预防性抗炎(抗氧化)或保护的目的，所述分散液可用在各种工业材料和产品、杀虫剂、清洗剂、化妆品、卫生用品、油漆、涂料、塑料和食品中。本发明的或通过本发明的方法制备的包含针叶树脂酸的水包油型分散液适合直接用作药物或用作药物制剂中的添加成分，以用于治疗哺乳动物的炎症(抗炎性)、包括无菌炎症，和/或感染(抗微生物性)。因此，一方面，本发明提供了本发明的或通过本发明的方法制备的水包油型分散液，其用作治疗或预防人和动物的感染和/或炎症的抗微生物剂或抗炎剂。在一个实施方式中，本发明的或通过本发明的方法制备的水包油型分散液用于治疗或预防由幽门螺杆菌(helicobacterpylori)引起的炎症和/或感染。另一方面，本发明提供了药物制剂，其包含本发明的或通过本发明的方法制备的包含针叶树脂酸的水包油型分散液。所述药物制剂可以以片剂、胶囊、丸剂、溶液、输注液或注射液、灌肠药(灌肠剂)、清洗剂、洗发水、滴剂、棒剂、喷雾、药膏、霜剂、凝胶、软膏、洗剂、漆剂、灌肠剂、阴道剂(vagitorium)或栓剂提供。药物制剂还可以包含通常用于特定制剂的常规赋形剂和/或功能性添加剂。在一个实施方式中，药物制剂是水性药物制剂。在一个实施方式中，药物制剂是滴眼剂。药物制剂可以口服、静脉内、动脉内、皮下、肌内、局部或作为注射或输注施用。各种各样的细菌可引起能够用本发明的抗微生物分散液治疗的胃部感染(慢性胃炎)。该分散液对包括真菌、霉菌甚至病毒在内的多种微生物具有杀微生物性。幽门螺杆菌(hp)是对含树脂组合物敏感的一种临床重要微生物的实例。hp是慢性胃炎的原因，胃粘膜中的慢性胃炎是诸如胃癌或胃肠溃疡、萎缩性胃炎和胃酸过少的胃等最重要的胃病的基本原因。众所周知，针对幽门螺杆菌的治疗是有问题的，其可能需要几次重复尝试和许多抗生素。通常也用胶体铋组合物治疗幽门螺杆菌感染，胶体铋组合物局部(胃内)杀死胃粘膜表面上生长和繁殖的细菌。本发明的或通过本发明的方法制备的水包油型分散液例如以下述方式在药物和药物制剂或产品中应用：-通过应用分散液本身或通过用针叶树脂水包油型分散液代替药物的水性组分，作为抗微生物或抗炎剂治疗剂(片剂、胶囊、输注液和注射液、药膏、霜剂、乳液、滴剂、凝胶、栓剂等)-如上所述通过应用分散液本身或通过用针叶树脂水包油型分散液代替药物的水性组分，作为抗微生物液体而注射到组织、组织腔、关节或脓肿中-通过应用分散液本身或通过用针叶树脂水包油型分散液代替药物的水性组分，作为用于洗涤组织腔(口腔、上颌窦、耳道、腹腔、胸膜腔、膀胱和尿道或阴道、瘘管、裂或管道等)的抗微生物溶液-通过应用分散液本身或通过用针叶树脂水包油型分散液代替药物的水性组分，作为治疗皮肤溃疡、疮疡、烧伤或感染的抗微生物组合物-通过将针叶树脂水包油型分散液浸入绷带、敷料、薄纱巾或产品中，作为治疗皮肤溃疡、疮疡、烧伤或感染中使用的所述绷带、敷料、薄纱巾或产品的抗微生物添加剂-通过应用本身作为药物的针叶树脂水包油型分散液或者通过用针叶树脂水包油型分散液代替药物(药膏、霜剂、滴剂、溶液等)中的水性组分，作为用于真菌性指甲或皮肤感染的局部药物中的抗微生物组合物-通过应用分散液本身或通过用针叶树脂水包油型分散液代替药物的水性组分，作为滴眼剂、眼软膏或洗眼液-通过采用分散液本身或通过用针叶树脂水包油型分散液代替漱口水的水性组分，作为漱口水-通过采用分散液本身或通过用针叶树脂水包油型分散液代替产品的水性组分，作为治疗妇科感染或疾病(细菌和真菌感染)的阴道剂、栓剂、凝胶剂、霜剂或溶液-作为在治疗、消毒或洗涤皮肤、皮肤伤口、皮肤损伤或感染中使用的水可稀释的霜剂、溶液、洗剂、凝胶、喷雾、肥皂或药物中的添加剂-作为化妆品或卫生用品、薄纸、肥皂或洗发水中的抗微生物添加剂-作为用于药物保存的抗微生物添加剂-通过采用分散液本身或通过用针叶树脂水包油型分散液代替药物的水性组分，作为治疗诸如皮肤、毛发、脚蹄和乳房等哺乳动物外表面的抗微生物剂-通过采用分散液本身或通过用针叶树脂水包油型分散液代替药物的水性组分，作为洗涤和保护诸如皮肤、毛发、脚蹄和乳房等哺乳动物外表面的抗微生物剂。为了避免使用抗生素和皮质类固醇，本发明的或通过本发明的方法制备的水包油型分散液可以治疗有效量或预防量施用于人或动物，用于治疗炎症和/或感染或者在人或动物中预防疾病。所述产品中针叶树脂酸的含量通常在约1ppm～约30ppm的范围内。在非医疗目的中，本发明的或通过本发明的方法制备的水包油型分散液可作为如下应用：-在油漆、漆、清漆、蜡或各种其他覆盖材料中作为抗微生物添加剂或防腐剂-作为用于清洁如诸如导管、假体、植入物等医疗器械的杀微生物剂-在清洁组合物(清洗液)、消毒剂和卫浴用品，诸如洗发水、肥皂、除臭剂、漱口水或牙膏中，作为抗微生物添加剂或防腐剂-在化妆品中作为抗微生物添加剂或防腐剂，-作为用于纯化诸如饮用水、蓄水池等溶液的抗微生物组合物-作为抗微生物食物防腐剂-作为杀生物剂或农药。本发明的分散液可以通过涂布、喷涂、浸渍、刷涂、铺展、润湿等方式应用于产品。通过将分散液铺展在食品表面上或通过将组合物包括在清洗液中可保护食物产品(食品)。由于分散液是水混溶的，所以在使用前分散液可通过水从食品中洗掉。本发明的分散液可作为杀虫剂应用，例如在清洗液或喷雾的制剂中。真菌类卵菌纲致病疫霉菌(phytopthorainfestans)(马铃薯晚疫病的原因)或真菌立枯丝核菌(rhizoctoniasolani)(在植物中引起颈腐病、根腐病)对水性树脂分散液敏感，所述组合物可作为对抗它们的喷雾或清洗液应用。给出以下实施例用于进一步说明本发明，而不限制本发明。实施例1天然愈伤组织树脂与乙醇混合，并静置3周～4周。滤除不溶物。获得乙醇中的60％树脂溶液。100ml乙醇溶液(ts60％)与1000ml菜籽油混合。将乙醇蒸发，加入1000ml盐水。使油-盐水溶液稳定1小时～12小时，由此形成水包油型分散液层(上层)和油包水型分散液层(下层)。对于本发明限定的应用，滤出水包油型分散液(乳液)。所得水包油型分散液的抗微生物效果如图1所示。以上所得水包油型分散液可在如下应用中使用，然而，其应用不限于此：用生理盐水将水包油型分散液稀释到20％(1:4)。对患有干眼综合征的患者给予滴眼剂，该滴剂制剂的水性部分为所述20％的稀释液。水包油型分散液可被浸渍到洗涤绷带中，并用作用于人和动物的抗微生物洗涤巾。在皮肤银屑病的治疗中，分散液也可作为溶液或作为凝胶或洗发水中的成分使用。水包油型分散液可用于替换药物和化妆品的成分中的水性部分(水)，以改善产品的防腐或杀微生物活性。包含针叶树脂的菜籽油-盐水乳液的添加使得25％(体积/体积)以上稀释度的分散液具有杀微生物和抗细菌性(图4)，并且可以作为抗细菌和抗真菌成分应用于阴道剂。使用生理盐水溶液以1:1和1:3的体积比稀释水包油型分散液。这些溶液可用作诸如膝关节等发炎关节的抗微生物注射剂，或作为体腔或脓肿中的抗微生物注射。该溶液含有药物活性抗炎树脂/松香成分，其具有与地塞米松等效的抗炎性质。水包油型分散液和两种稀释溶液的抗微生物效果如图4所示。实施例2如实施例1所述制备水包油型分散液，不同之处在于，使用来自forchemoy的妥尔油的松香for90级分来代替针叶树脂。使用生理盐水溶液以1:3和1:6的体积比稀释水包油型分散液。水包油型分散液和两种稀释溶液的抗微生物效果如图2所示。实施例3如实施例1所述制备水包油型分散液，不同之处在于，使用橄榄油来代替菜籽油。所得水包油型分散液的抗微生物效果如图1所示。实施例4如实施例1所述制备水包油型分散液，不同之处在于，分别使用松香和橄榄油来代替针叶树脂和菜籽油。松香为来自forchemoy的妥尔油的for90级分。所得水包油型分散液的抗微生物效果如图1所示。分散液本身或作为稀释成分可用在杀虫剂或农药中。实施例5如实施例1所述制备水包油型分散液，不同之处在于，使用亚麻籽油代替菜籽油作为分散剂。水包油型乳液本身或作为盐水稀释液(1/1(体积/体积))可用在皮肤疾病中作为抗真菌和抗炎洗剂和擦剂(银屑病、头皮屑等)。实施例6如实施例5所述制备水包油型分散液，不同之处在于，使用松香(for90)代替针叶树脂作为分散剂。实施例7如实施例1所述制备水包油型分散液，并且在治疗或预防马铃薯晚疫病(致病疫霉)中用作喷雾或清洗剂，水性树脂分散液对于马铃薯晚疫病具有杀微生物性。实施例8实施例1(天然愈伤组织树脂)和实施例2(松香)的水包油型分散液中包含的各种化合物的含量通过短柱气相色谱(gc)和气相色谱-质谱(gc-ms)进行分析。基于保留时间和gc-ms鉴定化合物。该量通过gc测定，以桦木醇标准化合物。下表1中给出的结果表明，树脂酸在水包油型分散液中主要呈氧化形式。表1化合物实施例1实施例2对香豆酸232ppm0ppm树脂酸痕量0ppm氧化树脂酸116ppm1435ppm木脂素215ppm0ppm鉴定的木脂素为松脂醇、落叶松树脂醇、异落叶松树脂醇和开环异落叶松树脂醇。鉴定出以下氧化树脂酸：7β-羟基脱氢枞酸、7α-羟基脱氢枞酸、15-羟基脱氢枞酸、7β,15-二羟基脱氢枞酸和7α,15-二羟基脱氢枞酸。微生物测试本发明的水包油型分散液(·乳液)的抗微生物效果如图1～4所示。通过应用ph.eur.5.1.3挑战测试(en13697)测量了该分散液对口腔微生物的抗微生物活性。在该测试中，将测试微生物加入到测试溶液，即本发明的水包油型分散液中。在特定培养基(例如，muellerhinton琼脂培养板)中再培养测试溶液的样品以证明在温育(挑战)期间所测试的测试溶液是否杀灭微生物。通过计算24小时后测试样品中微生物再生长的减少来监测该杀灭活性(杀微生物活性)。在再培养中没有微生物的生长(全部微生物24小时内被杀灭)被认为表明本发明的水包油型分散液具有杀微生物活性。图1～4中测试的乳液如下：在图1中，a：参考乳液。参考乳液如下制备：将生理盐水溶液与橄榄油以1:1的体积比混合。将油-盐水溶液稳定1小时～12小时，由此形成油包水型分散液层(上层)和水包油型分散液层(下层)。滤出水包油型分散液(乳液)以提供参考乳液。b：实施例4的水包油型分散液。c：实施例3的水包油型分散液。d：实施例1的水包油型分散液。在图2中，a：菜籽油。b：实施例2的水包油型分散液。c：实施例2的稀释溶液(1:3)。d：实施例2的稀释溶液(1:6)。在图3中，a：亚麻籽油。b：实施例6的水包油型分散液。在图4中，a：实施例1的稀释溶液(1:1)。b：实施例1的稀释溶液(1:3)。当前第1页12