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技术领域：
】本发明涉及蓝莓增殖的
技术领域：
，特别是一种蓝莓增殖培养基及其增殖培养方法的
技术领域：
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背景技术：
：蓝莓，属杜鹃花科，越橘属植物，起源于北美，是多年生灌木小浆果果树。由于蓝莓具有极高的经济价值和营养价值，因此备受人们的关注。蓝莓不仅含有果糖、纤维和维生素等营养元素，还富含抗氧化剂、叶酸和花色素苷等有助于清除人体内自由基，抑制及逆转人体衰老的化合物，被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一。伴随着蓝莓国际需求量的不断提升，世界蓝莓的栽培面积不断上升，人们对蓝莓苗木的需求量也逐年增加。我国人工栽培蓝莓起步较晚，总体规模较小，无法满足消费者日益增长的需求，还存在蓝莓组培苗细弱，分化率低，培养周期长，利用率不高，后续移栽成活率低的问题。因此，如何快速获得足够的蓝莓苗木，扩大蓝莓栽培面积，成为亟需解决的重要问题。技术实现要素：本发明的目的就是解决现有技术中的问题，提出一种蓝莓增殖培养基及其增殖培养方法，解决了蓝莓组培苗细弱，分化率低，培养周期长，利用率不高，及后续移栽成活率低的问题。为实现上述目的，本发明通过以下技术方案来实现：一种蓝莓增殖培养基，包括初代培养基和继代培养基，所述初代培养基包括基本培养基、0.8～1.2mg/l的zt、0.08～0.12mg/l的iba、25～35mg/l的蔗糖以及5.5～7.5mg/l的琼脂，所述继代培养基包括基本培养基、0.4～0.6mg/l的zt、0.04～0.06mg/l的iba、25～35mg/l的蔗糖以及5.5～7.5mg/l的琼脂。作为优选，所述基本培养基包括675～825mg/l的nh4no3、445～545mg/l的k2so4、570～690mg/l的kno3、280～340mg/l的mgso4·7h2o、125～155mg/l的kh2po4、250～310mg/l的ca(no3)2·4h2o、175～215mg/l的cacl2·2h2o、5～7mg/l的h3bo3、15～20mg/l的mnso4·h2o、7.5～9.5mg/l的znso4·7h2o、0.15～0.35mg/l的na2moo4·2h2o、0.15～0.35mg/l的cuso4·5h2o、35～40mg/l的na2·edta、25～30mg/l的feso4·7h2o、80～120mg/l的肌醇、0.4～0.6mg/l的维生素b5、0.4～0.6mg/l的盐酸吡哆醇、0.8～1.2mg/l的盐酸硫胺素以及1.5～2.5mg/l的甘氨酸。作为优选，所述初代培养基和继代培养基的ph均调节至5.0～5.3。一种蓝莓的增殖培养方法，包括如下步骤：a)培养基的制备：在基本培养基内加入0.8～1.2mg/l的zt、0.08～0.12mg/l的iba、25～35mg/l的蔗糖以及5.5～7.5mg/l的琼脂从而得到初代培养基，在基本培养基内加入0.4～0.6mg/l的zt、0.04～0.06mg/l的iba、25～35mg/l的蔗糖以及5.5～7.5mg/l的琼脂从而得到继代培养基；b)诱导侧芽萌发：将蓝莓外植体进行清洗和消毒后，接种到步骤a)中所制备的初代培养基中进行诱导分化，得到蓝莓初代组培苗；c)增殖培养：将步骤b)中所制备的蓝莓初代组培苗进行修剪后，接种到步骤a)中所制备的继代培养基中进行继代培养，得到蓝莓继代组培苗。作为优选，所述步骤b)中，蓝莓外植体的诱导分化条件为前6～8天暗培养，温度为20～24℃，随后更改为光培养，光照强度为2500～3000lx，每日光照时长为10～14h，温度为23～27℃，总培养时长为35～45天。作为优选，所述步骤c)中，蓝莓初代组培苗修剪至1.3～1.7cm。作为优选，所述步骤c)中，蓝莓初代组培苗的继代培养条件为光培养，光照强度为2800～3200lx，每日光照时长为14～18h，温度为23～27℃，培养时长为40～60天。本发明的有益效果：本发明所制备的培养基，制作成本低廉，在使用时，培苗成活率达到了100％，分化率为市售培养基的1.5倍，培养周期短，组培苗在培养50天后可达到8cm左右，茎段粗壮，不但增加了组培苗的利用率，也增加了后续移栽的成活率，利用组培培养的方法，可以在短期内大大提高增殖系数，缩短繁殖时间，并且保持品种的优良特性。【具体实施方式】实施例一：a)培养基的制备：在基本培养基内加入0.8mg/l的zt(玉米素)、0.08mg/l的iba(吲哚丁酸)、25mg/l的蔗糖以及5.5mg/l的琼脂从而得到初代培养基，在基本培养基内加入0.4mg/l的zt、0.04mg/l的iba、25mg/l的蔗糖以及5.5mg/l的琼脂从而得到继代培养基。初代培养基和继代培养基均配置5l，灭菌备用。其中，基本培养基包括675mg/l的nh4no3、445mg/l的k2so4、570mg/l的kno3、280mg/l的mgso4·7h2o、125mg/l的kh2po4、250mg/l的ca(no3)2·4h2o、175mg/l的cacl2·2h2o、5mg/l的h3bo3、15mg/l的mnso4·h2o、7.5mg/l的znso4·7h2o、0.15mg/l的na2moo4·2h2o、0.15mg/l的cuso4·5h2o、35mg/l的na2·edta、25mg/l的feso4·7h2o、80mg/l的肌醇、0.4mg/l的维生素b5、0.4mg/l的盐酸吡哆醇、0.8mg/l的盐酸硫胺素以及1.5mg/l的甘氨酸。初代培养基和继代培养基均采用母液配置方法，具体步骤如下：①母液配置：分别称取nh4no3、k2so4、kno3、mgso4·7h2o、kh2po4、ca(no3)2·4h2o和cacl2·2h2o，每个药品单独溶解，再混合加水定容，配置成20倍的母液1；分别称取h3bo3、mnso4·h2o、znso4·7h2o、na2moo4·2h2o和cuso4·5h2o，每个药品单独溶解，再混合加水定容，配置成100倍的母液2；分别称取na2·edta和feso4·7h2o，先将feso4·7h2o溶解，再将na2·edta煮沸溶解，然后将二者混合加水定容，配置成100倍的母液3；分别称取肌醇、维生素b5、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素和甘氨酸，每个药品单独溶解，再混合加水定容，配置成100倍的母液4；称取zt，用95％的酒精溶解，再加水定容，配置成100倍的母液5；称取iba，再加水定容，配置成200倍的母液6。②培养基配置：先将2l的水烧热，倒入琼脂煮沸，根据初代培养基和继代培养基的配方分别倒入一定量的母液1、母液2、母液3、母液4、母液5和母液6，再加入蔗糖，定容至5l。随后，使用ph剂和0.1mol/l的naoh，调节ph至5.2。最后，将灌装好的培养基在115～125℃，130～132kpa的条件下，灭菌15～25min，冷却备用。其中，优选灭菌温度为121℃，灭菌压力131kpa，灭菌时间20min。b)诱导侧芽萌发：选取5～7月份的生长健壮的无病虫害的蓝莓枝条，去除叶片，用自来水加2～5滴洗洁精，洗去表面的灰尘，再流水冲洗干净。转到超净工作台，用75％的酒精消毒20～40s后，用无菌水冲洗干净，再用hgcl2浸泡7～10min。在此过程中，轻轻摇晃瓶子，最后用无菌水冲洗干净备用。接着，在超净工作台中将清洗和消毒后的蓝莓外植体接种到步骤a)中所制备的初代培养基中进行诱导分化，每瓶种1颗单芽茎段，得到蓝莓初代组培苗。蓝莓枝条选用浙江蓝美技术股份有限公司的蓝美1号。蓝美1号含有落叶性和常绿性多型物种基因，果早熟，可避梅雨，而花比“奥尼尔”晚开，有利于躲晩霜，自交结实性优，果形比野生蓝莓大，产量高，适宜在我国多种不同生态区域产业化栽种，抗灾害气候性优良。蓝莓外植体的诱导分化条件为前7天暗培养，温度为22℃，随后更改为光培养，光照强度为2500～3000lx，每日光照时长为12h，温度为25℃，总培养时长为40天。c)增殖培养：将步骤b)中所制备的蓝莓初代组培苗进行修剪后，在超净工作台中接种到步骤a)中所制备的继代培养基中进行继代培养，每瓶种10颗，得到蓝莓继代组培苗。蓝莓初代组培苗修剪至1.5cm，蓝莓初代组培苗的继代培养条件为光培养，光照强度为3000lx，每日光照时长为16h，温度为25℃，培养时长为50天。实施例二：在基本培养基内加入1mg/l的zt、0.1mg/l的iba、30mg/l的蔗糖以及6.5mg/l的琼脂从而得到初代培养基，在基本培养基内加入0.5mg/l的zt、0.05mg/l的iba、30mg/l的蔗糖以及6.5mg/l的琼脂从而得到继代培养基，初代培养基和继代培养基均配置5l，灭菌备用。其中，基本培养基包括750mg/l的nh4no3、495mg/l的k2so4、633mg/l的kno3、308mg/l的mgso4·7h2o、142mg/l的kh2po4、278mg/l的ca(no3)2·4h2o、195mg/l的cacl2·2h2o、6.2mg/l的h3bo3、16.9mg/l的mnso4·h2o、8.6mg/l的znso4·7h2o、0.25mg/l的na2moo4·2h2o、0.25mg/l的cuso4·5h2o、37.3mg/l的na2·edta、27.8mg/l的feso4·7h2o、100mg/l的肌醇、0.5mg/l的维生素b5、0.5mg/l的盐酸吡哆醇、1mg/l的盐酸硫胺素以及2mg/l的甘氨酸。其他同实施例一。实施例三：在基本培养基内加入1.2mg/l的zt、0.12mg/l的iba、35mg/l的蔗糖以及7.5mg/l的琼脂从而得到初代培养基，在基本培养基内加入0.6mg/l的zt、0.06mg/l的iba、35mg/l的蔗糖以及7.5mg/l的琼脂从而得到继代培养基，初代培养基和继代培养基均配置5l，灭菌备用。其中，基本培养基包括825mg/l的nh4no3、545mg/l的k2so4、690mg/l的kno3、340mg/l的mgso4·7h2o、155mg/l的kh2po4、310mg/l的ca(no3)2·4h2o、215mg/l的cacl2·2h2o、7mg/l的h3bo3、20mg/l的mnso4·h2o、9.5mg/l的znso4·7h2o、0.35mg/l的na2moo4·2h2o、0.35mg/l的cuso4·5h2o、40mg/l的na2·edta、30mg/l的feso4·7h2o、120mg/l的肌醇、0.6mg/l的维生素b5、0.6mg/l的盐酸吡哆醇、1.2mg/l的盐酸硫胺素以及2.5mg/l的甘氨酸。其他同实施例一。实施例四、将实施例二所制备的培养基与市售的培养基作为对比，分别进行蓝莓增殖试验，每组抽5瓶，每瓶种植标准为18株，结果如下表：1、成活率＝成活颗数/种植颗数*100％成活率(％)12345普通培养基80941009480实施例二培养基1001001001001002、芽分化数：每瓶瓶苗里成活的株数分化数(株)12345普通培养基1918201921实施例二培养基27283126303、培养50天后苗高度对比高度(cm)12345普通培养基57767实施例二培养基78988本发明所制备的培养基，制作成本低廉，在使用时，培苗成活率达到了100％，分化率为市售培养基的1.5倍，培养周期短，组培苗在培养50天后可达到8cm左右，茎段粗壮，不但增加了组培苗的利用率，也增加了后续移栽的成活率，利用组培培养的方法，可以在短期内大大提高增殖系数，缩短繁殖时间，并且保持品种的优良特性。上述实施例是对本发明的说明，不是对本发明的限定，任何对本发明简单变换后的方案均属于本发明的保护范围。当前第1页12