一种美国红枫快速繁殖的方法
【专利摘要】本发明涉及一种美国红枫快速繁殖的方法，所述的方法包括：1)外植体的选取，2)外植体消毒，3)初始诱导培养，4)愈伤组织诱导，5)增殖培养，6)生根培养，7)炼苗和移栽。采用本方法繁育美国红枫，可以降低生产成本，提高繁殖速度和成活率。
【专利说明】
一种美国红枫快速繁殖的方法
技术领域
[0001]本发明涉及植物快速繁殖技术领域，尤其是一种美国红楓快速繁殖技术领域。
【背景技术】
[0002]美国红楓(学名:Acer rubrum L.):原产美国东海岸，主要来自于美国北部以及加拿大大部分地区，在2000年前引入中国。主要分布在辽宁、山东、安徽一带，由于特殊的地理位置使美国红楓在北方变色效果很好。它是落叶大乔木。生长较快，成年高树12-18米，冠幅12米，能适应多种范围的土壤类型生长。春天开花，花红色。因其秋季色彩夺目，树冠整洁，被广泛应用于公园、小区、街道栽植，既可以园林造景又可以做行道树，深受人们的喜爱，是近几年引进的美化、绿化城市园林的理想珍稀树种之一。也是唯一可以用做行道树的彩叶树种。
[0003]目前，美国红楓多采用种子繁殖、嫁接繁殖和扦插繁殖三种繁殖方式进行生产栽培，这繁育技术提高品种的纯度，保持了品种特性，但成活率较低及繁殖速度较慢，制约了美国红楓产业的发展。而组织培养育苗技术既可以保持种的纯度和特性，也可以降低生产成本，提高繁殖速度和成活率。
[0004]现有技术中尚无经愈伤组织途径获得美国红楓再生植株的报道。
【发明内容】
[0005]本发明所要解决的技术问题是提供一种美国红楓快速繁殖的方法，经愈伤组织途径获得美国红楓丛生芽，诱导生根，可实现美国红楓组培苗的大量快速繁殖。
[0006]为了解决上述技术问题，本发明提出下列技术方案:
[0007]—种美国红楓快速繁殖的方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤:
[0008]I)外植体的选取:取当年生直径2-5mm的美国红楓茎尖或带腋芽的茎段为外植体，剪去叶片后将外植体剪成l-3cm长以备用；
[0009]2)外植体消毒:将上述茎段放入盛有自来水的20-25KHZ超声波清洗机中保持温度30-35°C处理30-45min，然后以自来水冲洗10-20min;随后在超净工作台上以70-75%的酒精消毒25-35秒，0.1%升汞溶液中处理5-8分钟，然后以无菌水冲洗4-5遍，置于无菌培养皿备用;
[0010]3)初始诱导培养:将灭菌后外植体各剪去2-3mm，外植体按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强1800-2500LX、光周期10_14h/d，温度25°C ± 2°C ;培养4_6d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养12-18d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成分为:WPM+6-BA0.5-1.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+PVPl-5mg/L；
[0011]4)愈伤组织诱导:取初始诱导培养中的芽，放入愈伤组织诱导培养基中培养15-20d，条件为暗培养，温度23 °C ± 2 °C ;所述愈伤组织培养基为:WPM+6-BA1.0-2.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+PVPl-5mg/L；
[0012]5)增殖培养:将透明无色的愈伤组织块放入增殖培养基中培养20-25d，增殖产生大量丛生苗，培养条件为光强1800-2500LX、光周期10-14h/d，温度25°C±2°C;所述增殖培养用培养基为:1/2MS+6-BA0.5-1.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+PVP l_5mg/L;
[0013]6)生根培养:将5)步骤中的丛生苗切割成单个，转移至生根培养基中培养15-20d后生根，培养条件为光强2500-35001^、光周期10-1411/(1，温度251€±2°(:;所述生根用培养基为:1/2MS+IBA0.1-0.5mg/L+PVPl-5mg/L；
[0014]7)炼苗和移栽:将有生根的美国红楓幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3-5d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25°C，湿度70%-85%，适当遮荫即可；
[0015]所述的WPM培养基配方为:大量元素:硝酸铵NH4N03400mg/L，硫酸钾K2S04900mg/L，磷酸二氢钾KH2P03170mg/L，硫酸镁MgS04.7H20370mg/L ;钙盐:氯化钙CaCl 2.2H2096mg/L;四水合硝酸钙Ca(N03)2.4H20556mg/L;微量元素:硼酸H3B036.2mg/L，硫酸锰MnS04.4H2022.5mg/L，硫酸锌ZnS04.7H208.6mg/L，钼酸钠Na2Mo04.2H200.25mg/L，硫酸铜CuS04.5H200.25mg/L;铁盐:乙二胺四乙酸二钠Na2-EDTA37.3mg/L，硫酸亚铁FeS04.7H2027.8mg/L ；有机酸:肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素lmg/L，盐酸卩比卩多醇0.5mg/L，烟酸0.5mg/L;
[0016]所述的MS培养基配方为:大量元素:硝酸钾KN031900mg/L，硝酸铵NH4N031650mg/L，磷酸二氢钾KH2P03170mg/L，硫酸镁MgS04.7H20370mg/L ;钙盐:氯化钙CaCl 2.2H20440mg/L;微量元素:碘化钾 K10.83mg/L，硼酸 H3B036.2mg/L，硫酸锰 MnS04.4H2022.3mg/L，硫酸锌ZnS04.7H208.6mg/L，钼酸钠Na2Mo04.2H200.25mg/L，硫酸铜CuS04.5H200.025mg/L，氯化钴CoC12.6H200.025mg/L;铁盐:乙二胺四乙酸二钠Na2_EDTA37.25mg/L，硫酸亚铁FeS04.7H2027.85mg/L；有机酸:肌醇lOOmg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素0.5mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，烟酸0.5mg/L;蔗糖30g/L，琼脂粉7g/L，pH为5.7;
[0017]所述的1/2MS培养基配方为:大量元素:硝酸钾KN03950mg/L，硝酸铵NH4N03825mg/L，磷酸二氢钾KH2P0385mg/L，硫酸镁MgS04.7H20185mg/L;余同上述MS培养基；
[0018]所述的6-BA为6-苄氨基嘌呤；
[0019]所述的NAA为α-萘乙酸；
[0020]所述的IBA为吲哚-3-丁酸；
[0021]所述的PVP为聚乙烯吡咯烷酮。
[0022]优选的，步骤3)中初始诱导培养基组成为:WPM+6-BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+PVP2mg/Lo
[0023]优选的，步骤4)中愈伤组织培养基为:WPM+6-BAl.6mg/L+NAA0.3mg/L+PVP3mg/L。
[0024]优选的，步骤5)中增殖培养用培养基为:1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+PVP3mg/L。
[0025]优选的，步骤6)中生根用培养基为:1/2MS+IBA0.3mg/L+PVP2mg/L。
[0026]采用本发明繁殖美国红楓，可实现美国红楓组培苗的大量快速繁殖，为美国红楓生产栽培和品种改良奠定基础。
[0027]为了更好的阐述技术方案，下面结合【具体实施方式】对本发明作进一步的说明，但本发明所要求的保护范围不限于下列实施例。
【具体实施方式】
[0028]实施例1
[0029]I)外植体的选取:取当年生直径2-5_的美国红楓茎尖或带腋芽的茎段为外植体，剪去叶片后将外植体剪成l-3cm长以备用；；
[0030]2)外植体消毒:将上述茎段放入盛有自来水的20KHz超声波清洗机中保持温度30°C处理30min，然后以自来水冲洗1min;随后在超净工作台上以70%的酒精消毒25秒，
0.1%升汞溶液中处理5分钟，然后以无菌水冲洗4遍，置于无菌培养皿备用；
[0031 ] 3)初始诱导培养:将灭菌后外植体各剪去2-3_，外植体按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强1800-2500LX、光周期10_14h/d，温度25°C ± 2°C ;培养6d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养18d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成分为:WPM+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L+PVPlmg/L；
[0032]4)愈伤组织诱导:取初始诱导培养中的芽，放入愈伤组织诱导培养基中培养20d，条件为暗培养，温度23 °C ± 2 °C ;所述愈伤组织培养基为:WPM+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L+PVPlmg/L；
[0033]5)增殖培养:将透明无色的愈伤组织块放入增殖培养基中培养25d，增殖产生大量丛生苗，培养条件为光强1800-25001^、光周期10-1411/(1，温度251€±2°(:;所述增殖培养用培养基为:1/2MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L+PVP lmg/L；
[0034]6)生根培养:将5)步骤中的丛生苗切割成单个，转移至生根培养基中培养20d后生根，培养条件为光强2500-3500LX、光周期10-14h/d，温度25°C±2°C;所述生根用培养基为:1/2MS+IBA0.lmg/L+PVPlmg/L；
[0035]7)炼苗和移栽:将有生根的美国红楓幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25°C，湿度70%~85%,适当遮荫即可。
[0036]经试验，采用本实施例所育试管苗的苗床移栽成活率为87.3%。
[0037]实施例2
[0038]I)外植体的选取:取当年生直径2-5_的美国红楓茎尖或带腋芽的茎段为外植体，剪去叶片后将外植体剪成l-3cm长以备用；；
[0039]2)外植体消毒:将上述茎段放入盛有自来水的25KHz超声波清洗机中保持温度35°C处理45min，然后以自来水冲洗20min;随后在超净工作台上以75%的酒精消毒35秒，
0.1%升汞溶液中处理8分钟，然后以无菌水冲洗5遍，置于无菌培养皿备用；
[0040]3)初始诱导培养:将灭菌后外植体各剪去2-3_，外植体按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强1800-2500LX、光周期10_14h/d，温度25°C ± 2°C ;培养4d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养12d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成分为:WPM+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+PVP5mg/L ；
[0041]4)愈伤组织诱导:取初始诱导培养中的芽，放入愈伤组织诱导培养基中培养15d，条件为暗培养，温度23 °C ± 2 °C ;所述愈伤组织培养基为:WPM+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+PVP5mg/L；
[0042]5)增殖培养:将透明无色的愈伤组织块放入增殖培养基中培养20d，增殖产生大量丛生苗，培养条件为光强1800-25001^、光周期10-1411/(1，温度251€±2°(:;所述增殖培养用培养基为:1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+PVP 5mg/L ；
[0043]6)生根培养:将5)步骤中的丛生苗切割成单个，转移至生根培养基中培养15d后生根，培养条件为光强2500-3500LX、光周期10-14h/d，温度25°C±2°C;所述生根用培养基为:1/2MS+IBA0.5mg/L+PVP5mg/L；
[0044]7)炼苗和移栽:将有生根的美国红楓幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗5d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25°C，湿度70%~85%,适当遮荫即可。
[0045]经试验，采用本实施例所育试管苗的苗床移栽成活率为90.1%。
[0046]实施例3
[0047]I)外植体的选取:取当年生直径2-5_的美国红楓茎尖或带腋芽的茎段为外植体，剪去叶片后将外植体剪成l-3cm长以备用；；
[0048]2)外植体消毒:将上述茎段放入盛有自来水的20KHz超声波清洗机中保持温度35°C处理35min，然后以自来水冲洗15min;随后在超净工作台上以75%的酒精消毒30秒，
0.1%升汞溶液中处理7分钟，然后以无菌水冲洗5遍，置于无菌培养皿备用；
[0049]3)初始诱导培养:将灭菌后外植体各剪去2-3_，外植体按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强1800-2500LX、光周期10_14h/d，温度25°C ± 2°C ;培养5d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养15d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成分为:WPM+6-BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+PVP2mg/L ；
[0050]4)愈伤组织诱导:取初始诱导培养中的芽，放入愈伤组织诱导培养基中培养16d，条件为暗培养，温度23 °C ± 2 °C ;所述愈伤组织培养基为:WPM+6-BA1.6mg/L+NAA0.3mg/L+PVP3mg/L；
[0051]5)增殖培养:将透明无色的愈伤组织块放入增殖培养基中培养22d，增殖产生大量丛生苗，培养条件为光强1800-25001^、光周期10-1411/(1，温度251€±2°(:;所述增殖培养用培养基为:1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+PVP 3mg/L ；
[0052]6)生根培养:将5)步骤中的丛生苗切割成单个，转移至生根培养基中培养16d后生根，培养条件为光强2500-3500LX、光周期10-14h/d，温度25°C±2°C;所述生根用培养基为:1/2MS+IBA0.3mg/L+PVP2mg/L；
[0053]7)炼苗和移栽:将有生根的美国红楓幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗5d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25°C，湿度70%~85%,适当遮荫即可。
[0054]经试验，采用本实施例所育试管苗的苗床移栽成活率为93.8%。
【主权项】
1.一种美国红楓快速繁殖的方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤: 1)外植体的选取:取当年生直径2-5mm的美国红楓茎尖或带腋芽的茎段为外植体，剪去叶片后将外植体剪成l-3cm长以备用； 2)外植体消毒:将上述茎段放入盛有自来水的20-25KHZ超声波清洗机中保持温度30-35°C处理30-45min，然后以自来水冲洗10-20min;随后在超净工作台上以70-75%的酒精消毒25-35秒，0.1%升汞溶液中处理5-8分钟，然后以无菌水冲洗4-5遍，置于无菌培养皿备用； 3)初始诱导培养:将灭菌后外植体各剪去2-3mm，外植体按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强1800-2500LX、光周期10_14h/d，温度25°C ± 2°C ;培养4_6d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养12-18d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成分为:WPM+6-BA0.5-1.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+PVPl-5mg/L； 4)愈伤组织诱导:取初始诱导培养中的芽，放入愈伤组织诱导培养基中培养15-20d，条件为暗培养，温度23 °C ± 2°C ;所述愈伤组织培养基为:WPM+6-BA1.0-2.0mg/L+NAA0.Ι-Ο.5mg/L+PVP1-5mg/L； 5)增殖培养:将透明无色的愈伤组织块放入增殖培养基中培养20-25d，增殖产生大量丛生苗，培养条件为光强1800-25001^、光周期10-1411/(1，温度251€±2°(:;所述增殖培养用培养基为: 1/2MS+6-BA0.5-1.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+PVP l_5mg/L； 6)生根培养:将5)步骤中的丛生苗切割成单个，转移至生根培养基中培养15-20d后生根，培养条件为光强2500-3500LX、光周期10-14h/d，温度25°C±2°C;所述生根用培养基为:1/2MS+IBA0.1-0.5mg/L+PVPl-5mg/L； 7)炼苗和移栽:将有生根的美国红楓幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3-5d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20-250C，湿度70 %-85 %，适当遮荫即可； 所述的6-BA为6-苄氨基嘌呤； 所述的NAA为α-萘乙酸； 所述的IBA为吲哚-3-丁酸； 所述的PVP为聚乙烯吡咯烷酮。2.根据权利要求1所述一种美国红楓快速繁殖的方法，其特征在于所述步骤3)中初始诱导培养基组成为:WPM+6-BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+PVP2mg/L。3.根据权利要求1所述一种美国红楓快速繁殖的方法，其特征在于所述步骤4)中愈伤组织培养基为:WPM+6-BA 1.6mg/L+NAA0.3mg/L+PVP3mg/L。4.根据权利要求1所述一种美国红楓快速繁殖的方法，其特征在于所述步骤5)中增殖培养用培养基为:1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+PVP 3mg/L。5.根据权利要求1所述一种美国红楓快速繁殖的方法，其特征在于所述步骤6)中生根用培养基为:1/2MS+IBA0.3mg/L+PVP2mg/Lo
【文档编号】A01H4/00GK105918128SQ201610339561
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年5月20日
【发明人】戴勤, 王冬梅, 李慧珍
【申请人】芜湖欧标农业发展有限公司