专利名称：一种肽类添加剂及制备方法
技术领域：
本发明涉及蛋白质水解后的肽类产品，更具体地指蛋白质经蛋白酶水解得到肽类混合物，该肽类混合物作添加剂应用于食品与饲料添加剂行业。
背景技术：
肽是氨基酸通过肽键连接并具有一定聚合度的一类物质的总称，其聚合度与分子量介于蛋白质与氨基酸之间。按作用不同可分为两大类功能肽和营养肽。功能肽即生物活性肽，它们能参于调节动物的某些生理活动或具有某些特殊功能。例如阿片肽、生长促进肽、免疫肽、抗菌肽和诱食肽等。营养肽不具有特殊的生理调节功能，但能迅速为动物肠道吸收利用，它们一般只含有2-15个氨基酸残基。与蛋白质和氨基酸相比，具有更大的营养优势。营养肽不需要水解，具有吸收速度快、吸收过程能消耗低和利用率高等特点。
肽的生产方法主要有四种蛋白质水解法、微生物发酵法、化学合成法和重组技术法。这四种方法各有特点，方法的选择主要取决于目标肽的长短、数量及用途。肽的工业化生产主要涉及四个行业饲料、食品、化工和医药行业。在化工和医药行业，肽的工业化主要采用化学合成或重组技术法，其产品经纯化后，用于分析标样或临床治疗。在饲料和食品行业，肽的工业化主要采用蛋白质水解法和微生物发酵法，其产品不经纯化，作为食品和饲料添加剂，用于改善人和动物的营养和生理状况。
肽类产品作为添加剂，主要有以下几个功能提高机体蛋白质的合成速度；增强机体的免疫功能；促进机体对矿物元素的吸收及调节机体的各种生理活动等。目前，添加剂市场上的肽产品存在生产成本高、终产品肽浓度低、检测方法复杂的缺点。肽产品生产现都采用价格昂贵的蛋白质原料，如乳蛋白、酪蛋白和大豆分离蛋白等。终产品的肽浓度在45％以下，最低的只有10％左右。产品肽含量的检测方法采用HPLC或MS法，该方法需要昂贵的色谱和质谱仪，并且难用于常规的定性与定量分析。
发明内容
本发明的目的提供一种具有高浓度成分稳定的肽产品。
本发明的另一目的是制备肽含量高、成分稳定肽产品的生产工艺。
本发明通过如下步骤实施实施本发明的主要原料为蛋白质原料玉米蛋白、大豆蛋白、麦蛋白和米蛋白、乳清蛋白、酪蛋白中的一种或几种；蛋白酶原料胰蛋白酶、微生物蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶中的一种或几种。
根据上述原料本发明配方为(按重量百分比)玉米蛋白粉5-10％大豆分离蛋白 5-10％米蛋白与麦蛋白70-80％乳清蛋白 5-10％酪蛋白5-10％按蛋白质原料计算(按重量百分比)微生物蛋白酶 4-8％胰蛋白酶 0.02-0.06％木瓜蛋白酶0.02-0.06％风味蛋白酶0.01-0.03％首先将蛋白质原料放入超微粉碎机中超微粉碎，用40目过筛后取筛下物，加水调浆，加碱(NaOH或KOH)调体系pH中性，料液比(重量比)1∶6-1∶10，然后加酶酶解，酶的用量为按原料蛋白质重量的4％-8％加入，酶解温度控制在38-40℃，pH至中性，酶解时间为4-8小时，待酶解完毕后，慢慢升温至85-90℃，然后维持5-10分钟灭酶，再过滤分离上清液低温减压浓缩，温度控制在60-90℃，真空度控制在0.7-0.9Mpa，浓缩液终水份为60％-70％，然后喷雾干燥，计量包装得成品，通过测定总肽≥55％，总肽平均分子量500-2000，总氨基氮为1-3％，总氮≥12.8％，水份≤8％。
数据的测定方法1、总肽的含量测定采用双缩脲法(1)、0.2M NaOH溶液0.01M NaOH溶液10％三氯乙酸溶液标准蛋白溶液用0.01M NaOH溶液精确配制4g/L的牛白蛋白标准溶液双缩脲试剂1.5g硫酸铜、4.5g酒石酸钾钠、2.5g碘化钾，用0.2M NaOH溶解并定容至500ml容量瓶中。
(2)、标准曲线的绘制准确移取0、1、2、3、4和5ml牛白蛋白标准溶液于试管中，用蒸馏水补充至总体积5ml，再分别加入5ml双缩脲试剂，20-25℃下反应30min，在540nm下测定其吸光值，以540nm下的吸光值A540为横座标，以蛋白浓度为纵座标，做标准曲线，计算出其线性回归方程即为标准曲线。
(3)、总肽含量的测定称取约2g样品，精确至0.0001g，加水溶解后定容至50ml，即为待测溶液。准确移取10ml待测样品溶液于离心杯中，准确移取10％三氯乙酸10ml，4000rpm下离心10min。离心结束后小心倾出上清液，准确移取倾出的上清液1ml于试管中，加4ml蒸馏水，5ml双缩脲试剂，充分摇均后，20-25℃下静置反应30min，540nm下测定其吸光值A540代入标准曲线的回归方程中计算出样品的肽浓度C1(mg/L).
(4)、总肽含量的计算公式样品中总肽含量X(％)的计算公式
X(%)=20C1×V11000M×100%]]>式中X样品中肽含量的质量百分比(％)C1样品中的肽浓度(mg/ml)V1样品液的总体积(ml)M样品总重量2、氨基氮测定(1)、0.1M NaOH溶液0.05M NaOH标准溶液(2)、测定步骤称取约2g样品，精确至0.0001g，加水溶解后定容至50ml，即为待测溶液。准确移取5ml待测溶液，加入50ml中性水，用0.05M NaOH标准溶液滴定至pH7.0。然后准确加入甲醛溶液10ml，继续用0.05M NaOH标准溶液滴定至pH9.0，记录加入甲醛后消耗NaOH标准溶液的体积V2。
同时做一试剂空白，取中性水50ml，用0.05M NaOH标准溶液滴定至pH7，然后精确加入甲醛10ml，继续用0.05M NaOH标准溶液滴定至pH9.0，记录加入甲醛后所消耗NaOH标准溶液的体积V1。
样品中氨基氮含量的计算公式X(%)=14×C(V2-V1)1000M×V3V4×100%]]>式中X样品中氨基氮含量的质量百分比(％)；14每毫克当量氮的毫克数；CNaOH标准溶液的浓度(mol/l)；V1加入甲醛后滴定空白消耗NaOH标准溶液的体积(ml)；V2加入甲醛后滴定试样后消耗NaOH标准溶液的体积(ml)；V3测定氨基氮用溶液的体积(ml)；V4样品溶液的总体积(ml)；
M样品总重量。
3、总氮测定按中国农业标准汇编饲料卷GB/T6432-1994中饲料中粗蛋白的测定和凯氏定氮法检测的方法。
4、水份的测定按中国农业标准汇编饲料卷GB/T6435-1986中饲料水份的测定。
5、肽平均分子量的测定按“酶解鲐鱼蛋白制取低分子肽的进一步研究”宁波大学学报，1997 vol.10.No.4指标500-2000公式 M——平均分子量120——氨基酸残基的平均分子量N总——样品中的可溶性总氮N氨——样品中的氨基氮本发明产品作为食品和饲料添加剂主要可提高机体蛋白的合成速度，增强机体的免疫功能，促进机体对矿物元素的吸收及调节机体的各种生理活动及改善机体的营养状况。
本发明的有益效果1、本发明提高了终产品的肽浓度稳定了肽产品的应用效果。
2、本发明选择蛋白质和蛋白酶的原料比较容易得到，价格便宜，大幅度降低了肽产品的生产成本。
3、本发明采用一种常规的化学分析方法-双缩脲检测肽混合物的肽混合物的总肽含量。
具体实施例方式下面结合具体的实施例对本发明作进一步描述，但不限制本发明。
称取玉米蛋白粉10公斤大豆分离蛋白 5公斤米蛋白和麦蛋白75公斤乳清蛋白 5公斤酪蛋白5公斤放入超微粉碎机中超微粉碎，并用40目筛孔筛选，小于40目的蛋白粉加700公斤水再用NaOH调节pH至7.0，再加入5.1公斤蛋白酶。蛋白酶的配制为微生物蛋白酶5公斤、胰蛋白酶0.04公斤、木瓜蛋白酶0.04公斤、风味蛋白酶0.02公斤。进行酶解，酶解温度控制在38-40℃，pH为中性，共酶解7小时，再将酶解液慢慢升温至85-90℃，然后维持5-10分钟，过滤分离，取上清液，将上清液减压浓缩，低于80℃，真空度0.8-0.9mpa，浓缩液终水份为60％-70％，喷雾干燥，制得成品。
用双缩脲法对成品进行肽含量的测定测定方法按照“生物化学与分子生物学实验技术教程”方法，杨建雄编著，科学出版社，2002年发表的方法测定。
总肽的含量为大于55％。
利用甲醛法对成品进行氨基氮测定按照生物化学实验发表的方法，上海科学技术出版社，1987年。
氨基氮的含量为1-3％。
按照“酶解鲐鱼蛋白制取低分子肽的进一步研究”宁波大学学报1997vol.10.No.4的方法测定。
肽的平均分子量500-2000。
按照国家GB/T6432-1994的方法测总氮总氮的含量为大于12.8％。
按照国家GB/T6435-1994的方法测得含水量含水量为小于8％。
权利要求
1.一种由蛋白质原料经蛋白酶酶解获得的肽类添加剂，该添加剂的肽平均分子量为500-2000，总肽含量≥55％，氨基氮为1-3％，总氮≥12.8％，水份≤8％。
2.根据权利要求1所述肽类添加剂，其特征在于所述的蛋白质原料为玉米蛋白、大豆蛋白、麦蛋白和米蛋白乳清蛋白、酪蛋白中的一种或几种；蛋白酶为胰蛋白酶、微生物蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶中的一种或几种。
3.根据权利要求2所述的肽类添加剂，其特征在于蛋白质原料的配比(按重量百分比)为玉米蛋白粉 5-10％大豆分离蛋白 5-10％米蛋白和麦蛋白 70-80％乳清蛋白 5-10％酪蛋白 5-10％
4.根据权利要求2所述的肽类添加剂，其特征在于蛋白酶的添加量(按重量百分比)为(按蛋白质原料计算)微生物蛋白酶 4-8％胰蛋白酶 0.02-0.06％木瓜蛋白酶 0.02-0.06％风味蛋白酶 0.01-0.03％
5.如权利要求1所述的肽添加剂的制备方法由(1)、蛋白质原料超微粉碎，40目过筛，加水、加碱调浆。料液比(重量比)1∶6-1∶10(2)、调浆后加酶酶解，配解温度38-40℃，pH中性，酶解时间4-8小时，酶解毕，升温至85-90℃灭菌、过滤，上清液低温减压浓缩。(3)、浓缩液终水份60％-70％，喷雾干燥，得成品计量包装。(4)、测定平均分子量、总肽含量、氨基氮、总氮、水份的含量。
全文摘要
本发明公开了一种肽类添加剂及制备方法，该肽类添加剂由玉米蛋白粉、大豆分离蛋白、麦蛋白和米蛋白等蛋白中的一种或几种在一定温度下经蛋白酶酶解获得肽平均分子量为500－2000，总肽含量≥55％，氨基氮为1－3％，总氮≥12.8％，水份≤8％的肽类添加剂。该产品主要用于食品和饲料添加剂，可提高机体蛋白的合成速度，增强机体免疫功能，促进机体对矿物元素的吸收，调节机体的各种生理活动及改善机体的营养状况。
文档编号A23L1/305GK1530021SQ0311583
公开日2004年9月22日 申请日期2003年3月17日 优先权日2003年3月17日
发明者吴军勇, 徐卫锋, 许云英, 陆克文, 叶沪生 申请人:上海邦成饲料科技有限公司