专利名称：与小麦抗白粉病基因Pm21连锁的标记引物及其用法的制作方法
技术领域：
本发明公开了与小麦抗白粉病基因Pm21连锁的标记引物，可用于小麦白粉病抗病育种分子标记辅助选择；此标记同时可用来鉴别普通小麦种子纯度，尤其用来鉴别细胞工程和染色体工程创造的涉及普通小麦第六同源群染色体发生变异的材料。
二、技术背景小麦(T.aestivum L)作为世界性的重要的粮食作物，在农业生产中具有举足轻重的地位，但是其生产却受到很多生物胁迫和非生物胁迫的影响。由专性寄生真菌小麦白粉病菌(Erysiphegraminis DC)引起的小麦白粉病(Ergsiphe greminis f.sp.tritici)是中国和世界上许多国家小麦生产中危害日趋严重的病害之一，并且随着肥水条件的改善，近年有不断加重的趋势。
普通小麦(T.aestivum L)有21对染色体，每对包含两条一样的染色体，这21条染色体通常表示为1A、1B、1D、2A、2B、2D、3A、3B、3D、4A、4B、4D、5A、5B、5D、6A、6B、6D、7A、7B、7D，普通小麦通常直接用AABBDD来表示(图8)。簇毛麦(Haynaldia villosaL)有7对染色体，每对包含两条一样的染色体，这7条染色体分别为1V、2V、3V、4V、5V、6V、7V，簇毛麦通常用VV来表示(图9)。普通小麦和簇毛麦的每条染色体又包含长臂和短臂，分别用L和S表示，比如簇毛麦6V染色体包括长臂6VL和短臂6VS。
我国原有的小麦品种大部分都含有Pm8抗源，但是随着白粉菌小种的不断变化，Pm8已经逐渐失去了抗性，寻找和利用新的抗白粉病病基因对于我国小麦生产的安全性有重要意义。南京农业大学细胞遗传所从上世纪80年代初起就致力于把簇毛麦(Haynaldia villosa L)中的优异基因通过染色体工程技术转入普通小麦，得到了高抗白粉病的涉及簇毛麦6V染色体易位系和添加缺失系(见参考文献1、Chen P D，Qi L L，Zhou B，et al.Development andmolecular cytogenetic analysis of wheat-Haynaldia villosa 6VS/6AL translocation lines specifyingresistance to powdery mildew.Theor Appl Genet，1995，911125-1128.2、L.L.Qi，S.L.Wang，P.D.Chen，D.J.Liu，B.S.Gill 1998 Identification and physical mapping of three Haynaldiavillosa chromosome-6V deletion lines TAG 971042-1046)。其中小麦-簇毛麦易位系6VS/6AL就是把普通小麦6A染色体短臂6AS代换成簇毛麦6V染色体短臂6VS，形成一条易位染色体，这条染色体由6AL和6VS组成，用6VS/6AL表示这条易位染色体。纯合的小麦-簇毛麦易位系6VS/6AL与普通小麦相比，两条6A染色体变成了两条6VS/6AL染色体(图10)；杂合的小麦-簇毛麦易位系6VS/6AL与普通小麦相比，只有一条6A染色体变成了6VS/6AL染色体，还保存一条6A(6AS/6AL)染色体(图11)。经分子细胞遗传学的进一步研究，簇毛麦中的抗白粉病基因Pm21被定位于簇毛麦染色体短臂6VS FL0.58区段内(见参考文献L.L.Qi，S.L.Wang，P.D.Chen，D.J.Liu，B.S.Gill 1998 Identification and physical mapping of threeHaynaldia villosa chromosome-6V deletion lines TAG 971042-1046)。由于6VS染色体与普通小麦染色体亲源关系比较远，与普通小麦染色体发生交换比较难，目前还未发现与普通小麦染色体发生交换的现象。所以目前携带Pm21基因的材料都携带6VS染色体。Pm21是目前为止对白粉病抗性最强、抗谱最广的基因，对已知白粉菌小种均免疫，所以对Pm21的研究可以使之更好地在生产实践中使用。
已有一些学者筛选了可用来鉴定簇毛麦染色体的分子标记OPH171900(见参考文献Qi，L.，M.Cao，P.Chen et al.Identification，mapping，and application of polymorphic DNA associatedwith resistance gene Pm21 of wheat.Genome 39191-197，1996)和OPH171400(见参考文献刘志勇，孙其信，李洪杰等.小麦抗白粉病基因Pm21的分子鉴定和标记辅助选择.遗传学报26(6)673-682，1999)。由于在筛选这些标记的过程中，研究者只分析了含有簇毛麦6V染色体的材料和普通小麦之间的多态性，没有研究此类标记在涉及其它6条簇毛麦染色体材料中的扩增情况，而后来在应用这些标记的过程中发现在含有其它几条簇毛麦染色体的材料中也能扩增出目标带，所以就表明这两个标记都不是簇毛麦6VS染色体专化。如果要鉴定材料中是否含有6V染色体，只能在材料背景只涉及簇毛麦6V染色体的情况下使用。这两个标记还有一个不足之处表现在鉴定材料中是否含有簇毛麦6V染色体的时候，不能区分出这条染色体处于纯合或杂合状态。
利用Pm21基因来进行抗白粉病育种的时候，育种单位用的亲本大多是南京农业大学细胞遗传所发放的小麦-簇毛麦易位系(6VS/6AL)，已经有几个品种经过了品种审定，还有很多品系处于审定过程中。由于6VS染色体与6AS染色体不交换，所以种子中携带Pm21基因的植株都携带6VS/6AL染色体。无论在品种选育过程中或是品种在生产使用过程中，6VS/6AL这条染色体处于纯合状态都很重要，否则后代白粉病抗性就会发生分离，而这恰恰是利用这个材料作为亲本进行育种的目标。另外，品种在生产上使用时其纯度要得到保证，对于利用小麦-簇毛麦易位系(6VS/6AL)作为亲本选育出来的高抗白粉病小麦品种，可以利用6VS/6AL染色体处于纯合状态的种子占的比例作为种子纯度的一个重要指标。但是，利用OPH171900和OPH171400进行分子标记辅助选择或鉴定种子纯度时，只能明确材料中是否含有6VS/6AL染色体，而这条染色体是处于纯合或杂合状态却无法得知。所以，寻找一种不仅对6VS专化而且还能够区分其纯合或杂合状态的标记，从而确定Pm21基因纯合或杂合状态，不仅可以提高分子标记辅助选择效率，而且在检测种子纯度时也可以发挥很大的作用。
分子标记有很多种，小麦中能够同时鉴定某一同源群不同染色体的标记绝大多数是RFLP标记，但是该类标记的缺点就是使用不方便，所以开发基于PCR的标记可以方便使用。一些学者在针对抗病基因的研究中发现很多抗病基因在现代植物的共同祖先中就已经存在，只是随着物种的进化和病原菌的改变，抗病基因也经历着不断的进化，所以亲源关系比较近的物种，在染色体同源区段可能存在同源性很高的抗病基因类似物。由于这类序列在同源染色体上都有拷贝且同源性很高，所以不同染色体上的拷贝就会有共同的PCR引物结合位点；由于抗病基因类似物又经历了长时间的进化造成了不同拷贝长度上的改变，所以用同一引物进行的PCR其产物长度会有差异。根据抗病基因类似物序列开发鉴定某一同源群不同染色体的PCR的标记是一条理想途径。
本实验室在克隆Pm21基因的过程中试图寻找基于PCR的能同时在一次PCR反应中鉴别第六群染色体6A、6B、6D、6VS的标记，用于可鉴别普通小麦种子纯度。
发明内容
技术问题 本发明的目的在于提供基于PCR的与Pm21连锁的分子标记引物，并且用该引物在一次PCR反应中通过扩增出的带型能同时鉴别普通小麦第六同源群染色体6A、6B、6D，从而确定Pm21基因纯合或杂合状态，该引物还能够用来鉴定普通小麦种子纯度。此标记引物不仅可以用来提高分子标记辅助选择效率，而且在检测种子纯度和鉴定第六同源群染色体发生变异的材料时也可以发挥很大的作用。
技术方案本发明与Pm21连锁并可鉴别普通小麦种子纯度的标记引物，其特征在于，该引物是以探针Contig17515序列为模板设计而得到的。其序列为NAU/XiBao 15Fagatccaacaccagttcaag 和NAU/XiBao 15Ratgttatggaggcttgtgtc。该标记引物从簇毛麦中扩增出的902bp的片段位于6VS染色体距着丝粒FL0.58区段内，从普通小麦扩增出的984bp、1139bp、987bp三条带分别位于6AS上的带位于距着丝粒FL0.34的区段，6BS上的带位于距着丝粒FL0.49的区段，6DS上的带位于距着丝粒FL0.45-0.79区段。
上述标记引物的使用方法(1)以待鉴定材料DNA作为模板，用NAU/XiBao15F和NAU/XiBao15R作为引物进行PCR，
PCR试剂组成为DNA模板2μL，2.5μL10×PCR buffer，1.5μLMgCl2，2μLdNTP，左右引物各0.5μL，0.25μL Taq DNA polymerase，16μL d.d H2O；PCR程序为94℃预变性3；94℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸1分30秒，32个循环；72℃延伸10分钟；10℃保存，PCR产物在非变性的聚丙烯酰氨39∶1胶上电泳分离，在用银染法进行染色；(2)标记引物鉴定Pm21基因的结果为能扩增出902bp片段特异带的单株携带Pm21基因，其Pm21基因位于簇毛麦6VS染色体上；不能扩增出902bp片段特异带的则不携带Pm21基因。
(3)标记引物鉴定单株的抗病染色体6VS/6AL纯合或杂合状态的结果为能扩增出1139bp、987bp、984bp、902bp四条带的植株的抗病染色体6VS/6AL处于杂合状态1139bp的条带来自染色体6BS，987bp的条带来自6DS，染色体6BS和染色体6DS都是成对存在的；984bp的条带来自染色体6AS，902bp的条带来自抗病染色体6VS，表明该单株中同时存在染色体6AS/6AL和抗病染色体6VS/6AL，抗病染色体6VS/6AL不能成对存在，处于杂合状态。
能扩增出1139bp、987bp、902bp三条带的植株的抗病染色体6VS/6AL处于纯合状态来自6AS染色体的984bp的带扩增不出来，6A染色体就不存在，所以6VS/6AL染色体成对存在，处于纯合状态。
该标记引物检测携带Pm21基因种子纯度的方法首先从待检测种子中随机挑选单粒种子，利用标记引物鉴定单粒种子的6VS/6AL染色体纯合或杂合状态，再统计6VS/6AL染色体处于纯合状态的种子在检测种子总量中所占比例，即为种子纯度指标。
本发明与已有技术相比较的优点及有益效果1、本发明分子标记引物NAU/XiBao15在鉴定簇毛麦6VS染色体时专化性更强。已开发的分子标记OPT171400和OPT171900由于不是6VS专化的，所以只能在亲本材料只涉及簇毛麦6VS染色体的情况下鉴定后代材料中是否含有6VS染色体。而用NAU/XiBao15F和NAU/XiBao15R进行PCR反应后只要产物中含有902bp的条带，就表明材料中含有簇毛麦6VS染色体。
2、本发明分子标记NAU/XiBao15与Pm21基因的连锁更紧密。由于引物NAU/XiBao15F和NAU/XiBao15R在簇毛麦中扩增出来的带和Pm21基因同时位于6VS染色体距着丝粒FL0.58区段内，而且6VS与普通小麦染色体不发生交换，所以NAU/XiBao15可以作为白粉病抗性基因Pm21的分子标记来使用，而且该标记与Pm21基因连锁程度比标记OPT171400和OPT171900与Pm21基因连锁程度更高。
3、本发明分子标记引物NAU/XiBao15在鉴定普通小麦6AS、6BS、6DS染色体时更高效。分子标记NAU/XiBao15能在6AS、6BS、6DS、6VS上扩增出大小不同的四条带，这四条带可以特异性追踪这四条染色体。在以往的研究中，往往需要用几个标记来确定材料中含有这四条染色体中的哪几条，而用分子标记NAU/XiBao15在一次PCR反应中就可以达到鉴别这四条染色体的目的。在用小麦-簇毛麦易位系(6VS/6AL)作为亲本进行抗白粉病育种时，用NAU/XiBao15来进行分子标记辅助选择，不仅可以鉴定材料中是否含有6VS/6AL，还可以鉴定6VS/6AL染色体是否处于纯合状态，这样可以大大提高育种的选择效率。
4、本发明分子标记引物NAU/XiBao15在鉴定抗病染色体6VS/6AL纯合或杂合状态时更方便快捷、经济。使用OPT171400和OPT171900这两个分子标记时，只要材料中含有6VS染色体就能扩增出相应的特异带，不能区分6VS/6AL处于纯合或杂合状态。以往鉴定材料中6VS/6AL染色体是否处于纯合状态，往往是采用根尖有丝分裂中期染色体C-分带技术或者原位杂交技术来进行，这两种技术不但实验技术烦琐，而且花费很高，所以在大量鉴定材料时使用具有局限性。如果使用NAU/XiBao15进行分子标记辅助选择，可以很方便快捷地鉴定以小麦-簇毛麦易位系(6VS/6AL)和普通小麦为亲本的后代材料中6VS/6AL染色体是否为纯合状态。
5、在用细胞工程或染色体工程创建育种材料时，可以用NAU/XiBao15标记来鉴别普通小麦第六同源群染色体发生变异的材料。
四
图1用扬麦5号、易位系(6VS/6AL)、簇毛麦、硬簇麦DNA作为模板，用用本发明中的引物NAU/XiBao15进行PCR扩增，含有簇毛麦6VS染色体的材料都能扩增出一条共同的分子量为902bp的带，而普通小麦扬麦5号缺乏这条带，说明这条902bp条带位于6VS上。
图2用普通小麦中国春分别添加簇毛麦1V、2V、3V、4V、5V、6V、7V染色体的7个材料DNA为模板，用本发明中的引物NAU/XiBao15进行PCR扩增，结果显示只有添加6V染色体的材料能扩增出与簇毛麦一样的902bp的带，说明这条902bp的带位于簇毛麦6V上。
图3用普通小麦6V添加缺失系de16V#2S-1DNA作为模板，用本发明中的引物NAU/XiBao15进行PCR扩增，结果表明6V上的902bp带仍然存在，6VS上的带位于FL0.58区段内。
图4用普通小麦中国春的一套缺体四体(缺1A、缺1B、缺1D、缺2A、缺2B、缺2D、缺3A、缺3B、缺3D、缺4A、缺4B、缺4D、缺5A、缺5B、缺5D、缺6A、缺6B、缺6D、缺7A、缺7B、缺7D)的DNA为模板进行PCR，用本发明中的引物NAU/XiBao15进行PCR扩增，结果表明缺6A的材料少了一条984bp的带，缺6B的材料少了1139bp的带，6D的材料少了987bp的带。
图5用中国春缺失系DNA作为模板，以本发明中的引物NAU/XiBao15进行PCR扩增，缺失系6AS-1扩增出的带少了一条984bp的带，缺失系6DS-2扩增出的带少了一条987bp的条带。
图6根据缺失系图谱，把6AS上984bp的条带、6BS上1139bp条带、6DS984bp条带定位于染色体阴影区域。
图7用扬麦5号×小麦-簇毛麦易位系(6VS/6AL)F2群体单株DNA为模板，用本发明中的引物NAU/XiBao15进行PCR扩增的结果。
图8普通小麦染色体示9簇毛麦染色体示10小麦-簇毛麦易位系6VS/6AL其染色体6VS/6AL为纯合时的示11小麦-簇毛麦易位系6VS/6AL其染色体6VS/6AL为杂合时的示图五具体实施方式
1、筛选位于6V染色体上的抗病基因类似物簇毛麦种子播于培养皿中发芽，露白后移栽到盆钵，至三叶期把在感病材料苏麦三号上培养的混合白粉菌孢子抖落在苗上。白粉菌诱导的材料分别于接种24、48、72小时后取样，分别提取RNA后等量混合形成实验组；非诱导材料在这三个时期同时取样，分别提取RNA后等量混合形成对照组。把实验组和对照组同时对大麦表达谱芯片(购自Affymetrix公司)进行杂交(芯片杂交实验在上海国家生物芯片中心完成)，得到了一些上调表达的探针，其中有一个探针Contig17515是抗病基因类似物。该基因作为Pm21的侯选基因，可能位于6VS染色体上。
2、根据筛选的抗病基因类似物开发基于PCR的分子标记根据上调表达基因的序列用Primer3软件(http://www.genome.wi.mit.edu/cgi-bin/primer/primer3.cgi)设计引物NAU/XiBao15F(agatccaacaccagttcaag)和NAU/XiBao15R(atgttatggaggcttgtgtc)。
以普通小麦扬麦5号(AABBDD)(公知公用，引自扬州里下河农科所)、小麦-簇毛麦易位系(6VS/6AL)(公知公用，南京农业大学细胞遗传实验室创造)、簇毛麦(VV)、硬簇麦(AABBVV)(硬簇麦由硬粒小麦AABB和簇毛麦VV人工合成)的DNA为模板，以NAU/XiBao15F和NAU/XiBao15R为引物进行PCR扩增。PCR试剂组成DNA模板2μL(50-100ng)，2.5μL10×PCR buffer，1.5μL MgCl2，2μLdNTP(2.5mmoL/L)，各0.5μL左右引物(10mmol/L)，0.25μL Taq DNA polymerase(5u/μL)，16μLd.d H2O。PCR程序为94℃预变性3；94℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸1分30秒，32个循环；72℃延伸10分钟；10℃保存。PCR产物经8％的聚丙希酰胺(39∶1)凝胶电泳银染后表明易位系(6VS/6AL)、簇毛麦、硬簇麦有一条共同的分子量为902bp的带，而扬麦5号缺乏这条带(图1)。以普通小麦中国春中分别添加簇毛麦1V-7V染色体的添加系(公知公用，见Sears，E.R.1953.Addition of the genome of Haynaldia villosa to Triticum aestivum.Am.J.Bot.40168-174.)DNA为模板，进行相同条件的PCR和电泳，结果表明只有添加6V染色体的材料扩增出了分子量为902bp特异带，说明902bp这条带是从6VS上扩增得到的(图2)。进一步以小麦-簇毛麦6V添加缺失系de16V#2S-1(见参考文献Lili Qi，Mingshu Cao，Peidu Chen，Wanlong Liand Dajun Liu.Identification，mapping，and application of polymorphic DNA associated withresistance gene Pm21 of wheat.Genome 39191-197，1998)的DNA作为模板进行PCR，仍然可以扩增出这条带(图3)，结合小麦-簇毛麦6V添加缺失系的缺失断点研究结果表明6VS上的这条902bp产物位于6VS距着丝粒FL 0.58的区段，由于de16V#2S-1田间鉴定仍然抗病，所以Pm21和902bp条带位于染色体6VS的同-个区域。
以中国春的21个缺体四体系(公知公用，见参考文献KM Devos，ME Sorrells，JAAnderson，TE Miller，SM Reader，AJ Lukaszewski，J Dubcovsky，PJ Sharp，J Fails，MD Gale.1999.Chromosome aberrations in wheat nullisomic-tetrasomic and ditelosomic lines.CerealResearch Communications 27231-239)的DNA为模板，进行相同条件的PCR和电泳，缺6A的材料中扩增出的带少了一条984bp的带，缺6B的材料中扩增出的带少了一条1139bp的带，缺6D的材料中扩增出的带少了一条987bp的带(图4)。结果表明从普通小麦扩增出来的1139bp、987bp、984bp三条带分别为6B、6D、6A染色体上的。
以中国春第六群的部分缺失系(即染色体缺失了靠染色体端部的一部分，公知公用，见参考文献Endo TR，Gill BS.The deletion stocks of common wheat.Heredity87295-307，1996)DNA为模板，进行相同的PCR，产物在8％的聚丙希酰胺(39∶1)凝胶上电泳。结果表明中国春的缺失系6AS-1的PCR产物少了984bp的带，缺失系6DS-2的的PCR产物少了987bp的带。因涉及6BS的缺失系缺失的部分离端部较近，所有材料6B带型均存在。根据缺失系的图谱，6AS上的带位于距着丝粒FL0.34的区段，6BS上的带位于距着丝粒FL0.49的区段，6DS上的带位于距着丝粒FL0.45-0.79区段(图5)。根据三条染色体整合的图谱，这个基因位点与RFLP标记Xpsr141.1、Xtam31比较接近(图6)。
3、用标记NAU/XiBao15检测扬麦5号(公知公用品种)×小麦-簇毛麦易位系F2群体以NAU/XiBao15F和N AU/XiBao15R为引物，扬5×小麦-簇毛麦易位系的F2代24个单株DNA为模板进行PCR，结果表明田间鉴定抗病的单株1、2、3、4、5、7、8、9、10、13、17、18、19、20、23都能扩增出6VS上的特异带，田间鉴定感病单株6、11、12、14、15、16\、21、22、24都不能扩增出6VS上的特异带(图7)，说明能否扩增出6VS上的特异带与抗感病直接相关，即该引物可以用来鉴定植株是否含有Pm21基因。
抗病单株的扩增带型又可以分成两种类型，一类能扩增出四条带，如单株1、2、3、4、7、10、13、19，这四条带从大到小分别是6BS、6DS、6AS、6VS上的，扩增出这种带型的单株只携带一条6VS/6AL易位染色体；另一类只能扩增出三条带，如5、8、9、17、18、23，这三条带从大到小分别是6BS、6DS、6VS上的，6AS上的带没有扩增出，能扩增出这种带型的单株携带两条6VS/6AL易位染色体。这个结果表明NAU/XiBao15标记不但可以鉴定扬麦5号×小麦-簇毛麦易位系的F2代各单株是否携带6VS/6AL易位染色体，而且还能鉴定该染色体的纯合或杂合状态。
权利要求
1.与小麦抗白粉病基因Pm21连锁的标记引物，其特征在于，该引物是以探针Contig17515序列为模板设计而得到的。
2.根据权利要求1所述与小麦抗白粉病基因Pm21连锁的标记引物，其序列为NAU/XiBao15Fagatccaacaccagttcaag和NAU/XiBao15Ratgttatggaggcttgtgtc
3.根据权利要求1或2所述与Pm21连锁并可鉴别普通小麦种子纯度的标记引物，其特征在于该引物从簇毛麦中扩增出的902bp的片段位于6VS染色体距着丝粒FL0.58区段内，从普通小麦扩增出的984bp、1139bp、987bp三条带分别位于6AS上的带位于距着丝粒FL0.34的区段，6BS上的带位于距着丝粒FL0.49的区段，6DS上的带位于距着丝粒FL0.45-0.79区段。
4.权利要求1～3之一所述与小麦抗白粉病基因Pm21连锁的标记引物的用法1)待鉴定材料DNA作为模板，用NAU/XiBao15F和NAU/XiBao15R作为引物进行PCR，PCR试剂组成为DNA模板2μL，2.5μL10×PCR buffer，1.5μLMgCl2，2μLdNTP，左右引物各0.5μL，0.25μL Taq DNA polymerase，16μL d.d H2O；PCR程序为94℃预变性3；94℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸1分30秒，32个循环；72℃延伸10分钟；10℃保存，PCR产物在非变性的聚丙烯酰氨39∶1胶上电泳分离，在用银染法进行染色；2)标记引物鉴定Pm21基因的结果为能扩增出902bp片段特异带的单株携带Pm21基因，其Pm21基因位于簇毛麦6VS染色体上；不能扩增出902bp片段特异带的则不携带Pm21基因。
5.根据权利要求4所述与小麦抗白粉病基因Pm21连锁的标记引物的用法，其特征在于，能扩增出1139bp、987bp、984bp、902bp四条带的植株的抗病染色体6VS/6AL处于杂合状态1139bp的条带来自染色体6BS，987bp的条带来自6DS，染色体6BS和染色体6DS都是成对存在的；984bp的条带来自染色体6AS，902bp的条带来自抗病染色体6VS，表明该单株中同时存在染色体6AS/6AL和抗病染色体6VS/6AL，抗病染色体6VS/6AL不成对存在，处于杂合状态；能扩增出1139bp、987bp、902bp三条带的植株的抗病染色体6VS/6AL处于纯合状态来自6AS染色体的984bp的带扩增不出来，6A染色体就不存在，所以6VS/6AL染色体成对存在，处于纯合状态；用以鉴定单株的抗病染色体6VS/6AL纯合或杂合状态。
6.根据权利要求4或5所述与小麦抗白粉病基因Pm21连锁标记引物的用法，其特征在于，用该标记引物检测携带Pm21基因种子纯度的方法首先从待检测种子中随机挑选单粒种子，利用标记引物鉴定单粒种子的6VS/6AL染色体纯合或杂合状态，再统计6VS/6AL染色体处于纯合状态的种子在检测种子总量中所占比例，即为种子纯度的指标。
全文摘要
本发明公开了与小麦抗白粉病基因Pm21连锁的标记引物，可用于小麦白粉病抗病育种分子标记辅助选择，同时可用来鉴别普通小麦种子纯度。根据探针congtig17515的序列设计引物NAU/XiBao15F和NAU/XiBao15R，经过一系列材料的验证，标记引物NAU/XiBao15与簇毛麦抗白粉病基因Pm21连锁，并且在一次PCR实验中可以同时扩增出来自普通小麦6A，6B，6D染色体的三条带。标记引物NAU/XiBao15可以用于小麦白粉病抗病育种分子标记辅助选择，也可用来鉴别普通小麦种子纯度，尤其可用来鉴别细胞工程和染色体工程创造的涉及普通小麦第六同源群染色体发生变异的材料。
文档编号C12Q1/68GK1661106SQ20041010307
公开日2005年8月31日 申请日期2004年12月30日 优先权日2004年12月30日
发明者曹爱忠, 陈佩度, 王秀娥, 张守忠, 王苏玲 申请人:南京农业大学