专利名称：以黄粉虫蛹为寄主的蛹虫草子实体及其培育方法
技术领域：
本发明涉及一种生物技术领域中的蛹虫草子实体产品及其培育方法。
背景技术：
蛹虫草Cordyceps militaris(L.Fr.)Link又称为北虫草，属于子囊菌门Ascomycota、子囊菌纲Ascomycetes、肉座菌目Hypocreales、麦角菌科Clavicipitaceae、虫草属Cordyceps的模式种。蛹虫草为世界广布种，我国各省均有分布，春至秋季在半埋于林地上或腐枝落叶层下鳞翅目昆虫蛹上长出。
蛹虫草与同属的冬虫夏草C.sinensis(Berk)Sacc.有极为相似的保健功效和药用价值，如抗疲劳、抗衰老、增强免疫力、抗炎、对S180瘤等肿瘤均有较强的抑制作用。蛹虫草以其丰富的营养成分和独特的药用价值受到消费者的青睐，市场需求不断上涨。仅仅依靠自然资源无法满足人们的需求，因此，加强蛹虫草的人工栽培是解决这个矛盾的最佳途径。目前除了利用米饭培养基栽培子实体外，还通过以昆虫为寄主来培植蛹虫草。潘中华等对家蚕蛹Bombyxmori L.培植蛹虫草进行了较系统的研究，柞蚕蛹Antheraea pernyi Guerin-Meneville和蚱蝉蛹Cryptotympana pustulata Fabricius可用来培植蛹虫草。
黄粉虫别名大黄粉、黄粉甲，俗称面包虫，隶属于鞘翅目拟步行虫科Tenebrionidae营养价值高，还具有良好的药用价值。黄粉虫含有丰富的蛋白质、脂肪、微量元素和维生素等营养物质，尤其蛋白质含量很高，其中粗蛋白质达55.23％～58.70％。黄粉虫具有一定的促进生长、益智、抗疲劳和抗组织缺氧作用。不同剂量的黄粉虫幼虫粉均可显著抑制高血脂大鼠血清中TC、TG的升高(P＜0.01)，说明黄粉虫幼虫粉有较明显的调节血脂作用。特别是黄粉虫能进行大规模人工饲养，为生产提供稳定安全的原料来源。因此，利用黄粉虫蛹进行蛹虫草培植研究将具有广阔的产业化应用前景。但目前尚未有利用蛹虫草菌感染黄粉虫蛹培育出蛹虫草子实体的研究报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种以黄粉虫蛹为寄主的蛹虫草子实体产品及其培育方法。
本发明所提供的蛹虫草子实体是用蛹虫草Cordyceps militaris(L.Fr.)Link菌种感染黄粉虫蛹培育而成。
本发明所提供的以黄粉虫蛹为寄主的蛹虫草子实体是一种新产品，有以下特征黄粉虫蛹体呈黄棕色或棕褐色，体表略带橙黄色的菌丝。子实体棒形或多分枝状，橙黄色的，单个或多条丛生于黄粉虫蛹体表。
本发明所提供的以黄粉虫蛹为寄主的蛹虫草子实体的培育方法包括菌种制备、对黄粉虫蛹接种感染和出草等培养步骤。黄粉虫蛹为黄粉虫经室内培养取得。
具体的培育步骤如下(1)采用常规方法将采集或采购得到的蛹虫草Cordyceps militaris(L.Fr.)Link子实体在分离培养基上经多孢分离纯化得蛹虫草菌种，然后经一级菌种和二级菌种的菌种制备，将培养得到的二级菌种的液体菌种用经灭菌的单层纱布过滤，得用于接种感染的二级菌种滤液；(2)用消毒剂对用于接种感染黄粉虫蛹进行浸泡消毒，然后用无菌注射器吸入二级菌种滤液注入黄粉虫蛹的前胸，每个黄粉虫蛹可注入0.05ml～0.2ml菌种滤液；(3)将受感染的黄粉虫蛹置于无菌的组培瓶内进行保湿暗培养，培养条件是空气相对湿度在80-100％，温度为18-25℃，至黄粉虫蛹体表外出现白色菌丝；然后进行光照诱导，光照强度要求在1000-2000Lux之间，至体表菌丝变成黄色，在蛹体表产生蛹虫草子实体原基，继续培养50-60天，在蛹体开始萎缩时采收蛹虫草子实体。
本发明用于进行一级菌种培养的培养基配方为马铃薯20％、葡萄糖2％、KH2PO40.3％、MgSO4·7H2O 0.15％、维生素B1少许、琼脂2％；用于进行二级菌种培养的培养基配方为葡萄糖2％、蛋白胨0.4％、KH2PO40.4％、MgSO4·7H2O 0.4％、维生素B1少许，pH6.5。
本发明第一步中是采用常规方法对采集或采购的蛹虫草进行分离纯化取得菌种，并通过常规方法进行包括一级菌种和二级菌种的菌种制备。
其一级菌种制备是将分离纯化的菌种接至无菌的试管中固体斜面培养基，20℃-25℃，避光培养7-10天，白色绒毛状菌丝长满斜面即得。二级菌种制备是将一级菌种接至经灭菌的液体培养基中，25℃，120r/m，振荡培养7-10天，至菌球充满液体培养基即得。
本发明第二步中对接种感染黄粉虫蛹进行浸泡消毒的消毒剂可采用稳定型二氧化氯。
本发明所得的蛹虫草产品的子实体部分与野生蛹虫草相似，营养成分相近。
以黄粉虫蛹为寄主的蛹虫草具有多种营养成分及有效活性成分，可作为食品应用。以下为分析检测结果分析检测结果一
分析检测结果二
分析检测结果三
分析检测结果四
分析检测结果五
本发明利用液体菌种过滤取得菌液，用注射方式感染黄粉虫蛹的技术，使黄粉虫蛹感染率达80以上，培育出草率可达100％。所得产品的虫草素达3.31mg/g，腺苷1.76mg/g，虫草酸45.18mg/g。
本发明培育方法简单，蛹虫草子实体生长率高，生产成本低，是开发新型的蛹虫草的一种有效、可靠的方法。
具体实施例方式下面结合具体实施方法对本发明进一步说明。
(1)黄粉虫化蛹将黄粉虫Tenebrio molitor(L.)幼虫于室内培养得虫蛹，用于培育蛹虫草子实体。
(2)菌种制备(2.1)菌种采集蛹虫草子实体，经多孢分离纯化所得，分离培养基配方葡萄糖1％、蛋白胨1％、MgSO4·7H2O0.05％、维生素B1少许、琼脂1.5％，pH6.5。经出草试验，符合蛹虫草Cordyceps militaris(L.Fr.)Link的基本特征，无性型为拟青霉属(Paecilomyces)，见《西南农业学报》(梁宗琦.蛹虫草的无性型及子实体的人工培养研究.西南农业学报，1990(2)1-8)。
(2.2)一级菌种接至无菌的试管中固体斜面培养基，20℃-25℃，避光培养7-10天，白色绒毛状菌丝长满斜面即可。培养基配方为马铃薯20％、葡萄糖2％、KH2PO40.3％、MgSO4·7H2O 0.15％、维生素B1少许、琼脂2％。
(2.3)二级菌种将一级菌种接种至经灭菌的液体培养基中，25℃，120r/m，振荡培养7-10天，至菌球充满全部液体培养基过滤即可。培养基配方葡萄糖2％、蛋白胨0.4％、KH2PO40.4％、MgSO4·7H2O 0.4％、维生素B1少许，pH6.5。
(3)接种感染利用稳定型二氧化氯消毒剂对黄粉虫蛹进行浸泡消毒2-10min，用无菌的注射器吸入二级菌种，于黄粉虫蛹胸前注入0.1mL，于无菌组培瓶内进行培养。
(4)出草培养受感染的黄粉虫蛹于无菌组培瓶内进行培养。空气相对湿度在80-100％；温度为18-25℃。保湿方法可将组培瓶置于有适量水的托盘中，用透明的薄膜袋套住并把袋口扎紧。暗培养2-5天，黄粉虫蛹体表外可出现白色菌丝，即进行光照诱导。光照强度要求在1000-2000Lux之间，经1-2天，体表菌丝变成黄色，6-10天后，蛹体表有原基产生。继续培养50-60天，蛹体开始萎缩时即可采收。
上述实施例经过多次重复，均能达到本发明的目的，即生产出以黄粉虫蛹为寄主的蛹虫草子实体。本发明中利用直接注射为感染途径，使黄粉虫蛹的感染率达到100％，是黄粉虫蛹成功培育蛹虫草子实体的基础。
权利要求
1.一种以黄粉虫蛹为寄主的蛹虫草子实体，其特征在于用蛹虫草Cordyceps militaris(L.Fr.)Link菌种感染黄粉虫蛹培育而成，其黄粉虫蛹体呈黄棕色或棕褐色，体表略带橙黄色的菌丝，子实体棒形或多分枝状，橙黄色的，单个或多条丛生于黄粉虫蛹体表。
2.一种以黄粉虫蛹为寄主的蛹虫草子实体的培育方法，其培育步骤如下(1)将蛹虫草Cordyceps militaris(L.Fr.)Link菌种在分离培养基上经多孢分离纯化得蛹虫草菌种，然后经一级菌种和二级菌种的菌种制备，将培养得到的二级菌种的液体菌种用经灭菌的单层纱布过滤，得用于接种感染的二级菌种滤液；(2)用消毒剂对用于接种感染黄粉虫蛹进行浸泡消毒，然后用无菌注射器吸入二级菌种滤液注入黄粉虫蛹的前胸，每个黄粉虫蛹注入0.05ml～0.2ml菌种滤液；(3)将受感染的黄粉虫蛹置于无菌的组培瓶内进行保湿暗培养，培养条件是空气相对湿度在80-100％，温度为18-25℃，至黄粉虫蛹体表外出现白色菌丝；然后进行光照诱导，光照强度要求在1000-2000Lux之间，至体表菌丝变成黄色，在蛹体表产生蛹虫草子实体原基，继续培养50-60天，在蛹体开始萎缩时采收蛹虫草子实体。
3.根据权利要求1所述的蛹虫草子实体的培育方法，其特征在于进行一级菌种培养的培养基配方为马铃薯20％、葡萄糖2％、KH2PO40.3％、MgSO4·7H2O 0.15％、维生素B1少许、琼脂2％；进行二级菌种培养的培养基配方为葡萄糖2％、蛋白胨0.4％、KH2PO40.4％、MgSO4·7H2O 0.4％、维生素B1少许，pH6.5。
4.根据权利要求1所述的蛹虫草子实体的培育方法，其特征在于对接种感染黄粉虫蛹进行浸泡消毒的消毒剂为稳定型二氧化氯。
全文摘要
本发明提供一种以黄粉虫蛹为寄主的蛹虫草子实体及其培育方法，所提供的蛹虫草子实体是用蛹虫草Cordyceps militaris(L.Fr.)Link菌种感染黄粉虫蛹培育而成，具有以下特征黄粉虫蛹体呈黄棕色或棕褐色，体表略带橙黄色的菌丝。子实体棒形或多分枝状，橙黄色的，单个或多条丛生于黄粉虫蛹体表。本发明所提供的培育方法包括菌种制备、对黄粉虫蛹接种感染和出草等培养步骤。以黄粉虫蛹为寄主的蛹虫草子实体产品具有多种营养成分及有效活性成分，可作为食品应用。其培育方法简单，蛹虫草子实体生长率高，生产成本低，是开发新型的蛹虫草的一种有效、可靠的方法。
文档编号C12N1/14GK1793317SQ200510101348
公开日2006年6月28日 申请日期2005年11月16日 优先权日2005年11月16日
发明者李泰辉, 林群英, 宋斌, 黄浩, 钟月金, 沈亚恒 申请人:广东省微生物研究所