专利名称：保加利亚乳杆菌复合增菌培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种益生菌培养基，特别涉及一种保加利亚乳杆菌复合增菌培养基，属于益生菌制品制备技术领域。
背景技术：
近年来，我国发酵乳制品工业发展迅猛，其中，酸奶及发酵乳饮料产业的发展居发酵乳制品产业之首。保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)和嗜热链球菌(S.thermophilus)是酸奶及发酵乳饮料生产中制备发酵剂的常用菌种。发酵剂质量的优劣与酸奶及发酵乳饮料的产品质量密切相关。传统人工型发酵剂存在活菌含量低(107～108cfu/mL)、接种量大(2％～3％)、保藏期短(4℃，1～2d)、生产工序多、劳动强度大、周期长、菌种极易退化和污染等弊端，导致酸奶及发酵乳饮料产品质量不稳和生产效率低下，阻碍了酸奶及发酵乳饮料产业的发展。因此，新型发酵剂—高效浓缩型直投式发酵剂应运而生，新型发酵剂活菌含量高(1010～1012cfu/g)，保藏期长(冻干发酵剂4℃，＞1年)，可以直接向专业生产厂家购买作为生产发酵剂使用，接种量较传统人工型发酵剂降低100～1000倍，在酸奶及发酵乳饮料生产中省略了发酵剂的制备工序，减少了菌种车间的投资和空间，防止了菌种的退化和污染，可使酸奶及发酵乳饮料工业的劳动生产率和产品质量大大提高。西方发达国家早在20世纪初开始研究浓缩型直投式乳酸菌发酵剂。我国对浓缩型直投式乳酸菌发酵剂的研究起步较晚，目前，国内尚无一家公司进行商业化浓缩型直投式乳酸菌发酵剂的生产，绝大多数酸奶及发酵乳饮料企业的发酵剂制备技术大都停留在传统人工型发酵剂的水平；少数大型酸奶及发酵乳饮料企业的发酵剂以进口为主。进口的商业化浓缩型乳酸菌发酵剂虽然品质优异、性能良好，但是成本较高。因此，充分利用我国资源优势，积极研制并开发出具有我国自主知识产权的高效浓缩型直投式乳酸菌发酵剂势在必行。
发明内容
本发明的目的是提供一种原料易得、价格低廉的保加利亚乳杆菌复合增菌培养基，实现了高效浓缩型直投式发酵剂的工业化规模生产。
本发明的构思是这样的高效浓缩型直投式发酵剂的生产，必须首先获得乳酸菌能够大量生长的增殖培养基。由于乳酸菌对营养要求苛刻，实验室使用的乳酸菌培养基成分复杂，价格昂贵。适合工业化生产浓缩型直投式发酵剂的乳酸菌培养基必须基于原料易得、价格低廉、菌体产量高、容易浓缩分离细胞。如何根据我国国情和资源优势，寻求来源广泛、经济易得的廉价原料，优化筛选适合乳酸菌大量生长的增殖培养基，是本发明的关键。为此，本发明人在研制开发高效浓缩型直投式乳酸菌发酵剂过程中，为了获得经济廉价的乳酸菌增菌培养基，在大量试验研究的基础上，选择了原料易得、价格低廉的半野生植物——菊芋为原料，确定了菊芋汁基础培养基的制备工艺；并以自行分离选育的高活力保加利亚乳杆菌L.b-DR为试验菌株，研究了在菊芋汁培养基中添加单一营养因子对保加利亚乳杆菌L.b-DR细胞生长量的影响，进一步利用正交试验优化筛选出保加利亚乳杆菌L.b-DR的菊芋汁复合增菌培养基。具体地，本发明的保加利亚乳杆菌复合增菌培养基组成配比为菊芋汁基础培养基100mL、番茄汁5-15mL、蛋白胨0.5-2g，CaCO30.1-1g、乳糖0.5-2g，pH值6.5～7.0。保加利亚乳杆菌L.b-DR经过复原脱脂乳培养基和液体MRS培养基活化后，以1％接种量接入上述复合增菌培养基中，37℃培养16h，活菌数可达1.50×109cfu/mL，较对照菊芋汁培养基的活菌数提高23.96倍，与实验室常用的MRS培养基的活菌数彼此相当，而成本较MRS培养基降低1600元(￥)/吨(t)培养基。
本发明的保加利亚乳杆菌复合增菌培养基的制备过程包括以下步骤(1)菊芋汁基础培养基的制备取菊芋，清洗称重，以料∶水＝1∶1(质量比)加水，加热至100℃灭酶5min，补加适量80℃水捣碎，经100目滤布过滤，滤渣加水压榨，将滤汁混合定容，以1kg菊芋生产1L汁定义为100％的菊芋汁，最后调配糖度和pH值。
(2)番茄汁的制备
取新鲜番茄用清水洗净，经过热烫软化、去皮破碎、榨汁、100目滤布过滤制得番茄汁备用；(3)保加利亚乳杆菌复合增菌培养基的制备将培养基的各种成分混合均匀，用NaOH溶液调节pH值至6.5～7.0，121℃15min灭菌，冷却即得成品。
本发明取得的技术效果是其原料来源广泛，成本低廉，增菌效果显著；该复合增菌培养基易于浓缩分离菌体细胞，非常适合工业化规模生产。
具体实施例方式
以下实施例用于说明本发明。
实施例1一、保加利亚乳杆菌复合增菌培养基组成为菊芋汁基础培养基100mL、番茄汁5mL、蛋白胨1.5g、CaCO30.5g、乳糖1.5g；二、制备(1)菊芋汁基础培养基的制备取菊芋，清洗称重，以料∶水＝1∶1(质量比)加水，加热至100℃灭酶5min，补加适量80℃水并捣碎，用100目滤布过滤，滤渣加水压榨，将滤汁混合定容，以1kg菊芋生产1L汁定义为100％的菊芋汁，最后调配糖度和pH值；(2)番茄汁的制备取新鲜番茄用清水洗净，经过热烫软化、去皮破碎、榨汁、用100目滤布过滤制得番茄汁备用；(3)保加利亚乳杆菌复合增菌培养基的制备将培养基的各种成分混合均匀，用NaOH溶液调节pH值至6.5～7.0，121℃15min灭菌，冷却即得成品。
将保加利亚乳杆菌L.b-DR经过复原脱脂乳培养基和液体MRS培养基活化后，以1％接种量接入本实施例所得的复合增菌培养基中，37℃培养16h，活菌数可达8.68×108cfu/mL。
实施例2
一、保加利亚乳杆菌复合增菌培养基组成为菊芋汁基础培养基100mL、番茄汁10mL、蛋白胨1.5g、CaCO30.3g、乳糖0.5g；二、制备制备过程与实施例1相同。
将保加利亚乳杆菌L.b-DR经过复原脱脂乳培养基和液体MRS培养基活化后，以1％接种量接入本实施例所得的复合增菌培养基中，37℃培养16h，活菌数可达8.87×108cfu/mL。
实施例3一、保加利亚乳杆菌复合增菌培养基组成为菊芋汁基础培养基100mL、番茄汁7.5mL、蛋白胨1g、CaCO30.3g、乳糖1.5g；二、制备制备过程与实施例1相同。
将保加利亚乳杆菌L.b-DR经过复原脱脂乳培养基和液体MRS培养基活化后，以1％接种量接入所得的复合增菌培养基中，37℃培养16h，活菌数可达1.50×109cfu/mL。
实施例4一、保加利亚乳杆菌复合增菌培养基组成为菊芋汁基础培养基100mL、10mL番茄汁、蛋白胨1g、CaCO30.5g、乳糖1g。
二、制备制备过程与实施例1相同。
将保加利亚乳杆菌L.b-DR经过复原脱脂乳培养基和液体MRS培养基活化后，以1％接种量接入本实施例所得的复合增菌培养基中，37℃培养16h，活菌数可达8.78×108cfu/mL。
权利要求
1.一种保加利亚乳杆菌复合增菌培养基，其特征是其组成配比为菊芋汁基础培养基100mL、番茄汁5-15mL、蛋白胨0.5-2g、CaCO30.1-1g、乳糖0.5-2g，调pH值6.5～7.0，其中的菊芋汁基础培养基是由菊芋汁压榨后，加水混合定容，以1kg菊芋制备1L菊芋汁得到的。
全文摘要
本发明公开了一种新型廉价的保加利亚乳杆菌复合增菌培养基。它以菊芋为主要原料，组成配比为菊芋汁基础培养基100mL，5－15mL番茄汁，0.5－2g蛋白胨，0.1－1g CaCO
文档编号C12R1/225GK1844354SQ20061001269
公开日2006年10月11日 申请日期2006年5月12日 优先权日2006年5月12日
发明者田洪涛, 山丽杰, 万红兵, 孙纪录, 桑亚新, 马晓燕 申请人:河北农业大学