专利名称：一种基于保加利亚乳杆菌发酵的含ace抑制肽的羊奶的制备方法
技术领域：
本发明属于羊奶发酵技术领域，涉及一种基于保加利亚乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法。
背景技术：
高血压是全球最常见的慢性病，也是心脑血管病最主要的危险因素，可引起脑卒 中、心肌梗死、心力衰竭及慢性肾脏病等多种并发症，不仅致残、致死率高，而且严重消耗医疗和社会资源，给家庭和国家造成沉重负担。按病因一般将高血压分为两大类由一些已知原因引起的高血压，称为继发性高血压，仅占高血压病例的5%;另一大类高血压的发病原因不清楚，称为原发性高血压，这种高血压占高血压患者的95%以上，是危害人体健康的主要疾病。ACE抑制肽是一类具有降血压功能的多肽类物质，一方面它对于人体的升血压系统——激肽释放酶-激肽系统(KKS)起到抑制作用，另一方面又对于人体的降血压系统——肾素-血管紧张素系统(RAS)起到促进作用，ACE抑制肽对于血压正常的动物或人没有降血压作用，具有安全性高，无毒副作用的特点。目前，研究者已分离出多种天然来源的ACE抑制肽，其中大多是利用蛋白酶水解各种食物蛋白得到。有研究发现，一些酸奶也具有降血压功能，并有学者从中分离得到了 ACE抑制肽。羊奶以其营养丰富、易于吸收等诸多优点被誉为奶中精品。保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)是酸奶发酵的常用菌,属于乳杆菌属热乳酸杆菌亚属，具有一系列的益生作用，包括调节胃肠道菌群平衡、促进人体消化吸收、增加人体免疫功能、抗癌抗肿瘤、降血压、降低胆固醇等。
发明内容
本发明解决的问题在于提供一种基于保加利亚乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，所制备的发酵羊奶既具有普通酸羊奶的营养价值和独特风味，还含有抑制率较高的ACE抑制肽，不仅促进了羊奶资源的开发利用，对于高血压的防治以及高血压患者的营养保健也有积极作用。本发明是通过以下技术方案来实现—种基于保加利亚乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，包括以下步骤I)将保加利亚乳杆菌L6接种于羊奶或羊奶复原乳中，在30 40°C下恒温厌氧发酵10 15h，得到发酵羊奶；2)按质量份数计，取步骤I)得到的发酵羊奶80 90份，与5 10份的蔗糖、0. 15 0. 5份的稳定剂及5 30的水充分混合后冷却至10°C以下，得到混合发酵羊奶；3)将混合发酵羊奶在2 5°C条件下密封，后熟8 10h，得到含ACE抑制肽的羊奶。所述的保加利亚乳杆菌L6在接种之前还进行以下活化I)将保加利亚乳杆菌L6的冻干菌粉接种于装有灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C厌氧培养10 14h，完成第一次活化；2)按体积分数计，取3 7%第一次活化的菌液，接种于装有灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C厌氧培养10 14h，完成第二次活化；3)按体积分数计，取3 7%第二次活化的菌液，接种于装有灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C厌氧培养10 14h，完成第三次活化。所述的羊奶复原乳为羊奶粉与水以10 20 :100的质量比溶解于水中。
所述的羊奶或羊奶复原乳中还添加了乳清粉，以提高发酵羊奶的凝固性以及ACE抑制肽的抑制率；以质量体积比计，乳清粉添加量为0. 5^0. 9%。所述稳定剂为果胶、羧甲基纤维素钠、藻酸丙二醇酯中的一种或两种。所述含ACE抑制肽的发酵羊奶中保加利亚乳杆菌L6的活菌数大于108cfu/mL。所述含ACE抑制肽的发酵羊奶中ACE抑制肽抑制率为65 90%。所述制备的含ACE抑制肽的发酵羊奶在制备预防高血压或高血压辅助治疗的饮品中的应用。与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果本发明提供的基于保加利亚乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，采用以保加利亚乳杆菌L6单菌株发酵的方式制备羊奶饮品，方法简便易行，不仅除去了羊奶中的膻味，还保留了羊奶中丰富的营养物质，凝乳细腻，易于吸收；所制备的发酵羊奶中保加利亚乳杆菌活菌数大于108cfu/mL，可提供包括调节胃肠道菌群平衡、增强免疫力、降低胆固醇等一系列的益生作用。进一步的，还在发酵过程中添加乳清粉，从而提高了羊奶的凝固性，克服了羊奶发酵时凝乳较差的缺点，同时提高了发酵羊奶中ACE抑制肽的抑制率；而为了保证羊奶发酵过程中产生的ACE抑制肽具有较高抑制率，在发酵结束后还添加了蔗糖与稳定剂。本发明提供的基于保加利亚乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，所制得的发酵羊奶中ACE抑制肽抑制率可达到65 90%，坚持长期饮用，可以有效地预防高血压的发病，同时也可用于高血压患者的辅助治疗，可应用于制备预防高血压或高血压辅助治疗的饮品中。
具体实施例方式下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。实施例I基于保加利亚乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，包括以下步骤I)取0. 4g保加利亚乳杆菌L6的冻干菌粉接种于装有IOmL灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C培养12h，完成第一次活化；取5%上述第一次活化的菌液，按上述操作方法进行第二次、第三次活化，共活化3次，即得到活化好的菌种。2)将0. 5g乳清粉添加到IOOmL鲜羊奶中并混合均匀，过滤净化后在90°C灭菌15min,冷却至40±3°C后，接入5mL活化好的保加利亚乳杆菌L6，在37 °C恒温厌氧发酵12h，得到发酵羊奶。3)以质量份数计，将5. 7份的蔗糖、0. 3份的果胶用10份的水溶解，在65°C巴氏杀菌20min后冷却至40±3°C，再加入到84份的发酵羊奶中，混合均匀后迅速冷却至I (TC以下，再在4 C冰箱后熟8 IOh,即制成广品。所得产品中保加利亚乳杆菌L6活菌数为3. 86X 108cfu/mL,其中的ACE抑制肽抑制率为78. 75%。ACE抑制肽抑制率的检测方法为紫外分光光度法
用含有0. 3mol/L NaCl 的 0. lmol/L 硼酸盐缓冲液(pH8. 3)将 HHL (Hip-His-Leu)配成5mmol/L的溶液。在IOmL试管中分别加入200 y L的5mmol/L Hip-His-Leu溶液和80 u L的发酵乳上清液，于37°C下保温5min后，再加入20 y L ACE溶液(溶解于蒸馏水中，活力为0. lU/mL)，混匀后在37°C下保温30min进行反应，之后加入250 y L lmol/L HCl终止反应，再加入I. 5mL醋酸乙酯，经15s振荡混匀后，静置5min，用移液管吸取I. OmL的醋酸乙酯层，于120°C烘干30min,再加入I. OmL蒸懼水,混勻后在228nm处测定吸光度。在上述条件下，抑制50%的ACE活性(IC50)为样品的一个活性单位。ACE 抑制率=[(B-A) / (B-C) ] X 100%式中A——含有发酵乳乳清(或溶于蒸馏水的多肽溶液)和ACE溶液的吸光度；B—不含发酵乳乳清(或溶于蒸馏水的多肽溶液)样品，但含有ACE溶液的吸光度；C—为含脱脂乳乳清(或蒸馏水)，但不含ACE溶液的吸光度。实施例2基于保加利亚乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，包括以下步骤I)取0. 4g保加利亚乳杆菌L6的冻干菌粉接种于装有IOmL灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C培养12h，完成第一次活化；取5%上述第一次活化的菌液，按上述操作方法进行第二次活化，共活化3次，即得到活化好的菌种。2)将14g羊奶粉和0. 7g乳清粉溶解于IOOmL的水中，在90°C灭菌15min，冷却至40±3°C后，接入7mL活化好的保加利亚乳杆菌L6，在40°C恒温厌氧发酵10h，得到发酵羊奶。3)以质量份数计，将7份的蔗糖、0. 2份的羧甲基纤维素钠用7. 8份的水溶解，在65°C巴氏杀菌20min后冷却至40±3°C，再加入到85份的发酵羊奶中，混合均匀后迅速冷却至10°C以下，再在4°C冰箱后熟8 10h，即制成产品。所得产品中保加利亚乳杆菌L6活菌数为4. 25 X 108cfu/mL,其中的ACE抑制肽抑制率为84. 42%。实施例3基于保加利亚乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，包括以下步骤I)取0. 4g保加利亚乳杆菌L6的冻干菌粉接种于装有IOmL灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C培养12h，完成第一次活化；取5%上述第一次活化的菌液，按上述操作方法进行第二次活化，共活化3次，即得到活化好的菌种。
2)将14g羊奶粉和0. 5g乳清粉溶解于IOOmL的水中，在90°C灭菌15min，冷却至40±3°C后，接入7mL活化好的保加利亚乳杆菌L6，在35°C恒温厌氧发酵14h，得到发酵羊奶。3)以质量份数计，将5份的蔗糖、0. 3份的藻酸丙二醇酯用6. 7份的水溶解，在650C巴氏杀菌20min后冷却至40 ± 3°C，再加入到88份的发酵羊奶中，混合均匀后迅速冷却至10°C以下，再在4°C冰箱后熟8 10h，即制成产品。
所得产品中保加利亚乳杆菌L6活菌数为4. 53 X 108cfu/mL,其中的ACE抑制肽抑制率为85. 55%。所制备的发酵羊奶坚持长期饮用，可以有效地预防高血压的发病，同时也可用于高血压患者的辅助治疗，可应用与制备预防高血压或高血压辅助治疗的饮品中实施例4基于保加利亚乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，包括以下步骤I)取0. 4g保加利亚乳杆菌L6的冻干菌粉接种于装有IOmL灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C培养12h，完成第一次活化；取5%上述第一次活化的菌液，按上述操作方法进行第二次活化，共活化3次，即得到活化好的菌种。2)将0. 6g乳清粉添加到IOOmL鲜羊奶中并混合均匀，过滤净化后在90°C灭菌15min，冷却至40±3°C后，接入6mL活化好的保加利亚乳杆菌L6，在38°C恒温厌氧发酵llh，得到发酵羊奶。3)以质量份数计，将6. 5份的蔗糖、0. I份的果胶、0. I份的羧甲基纤维素钠用8. 3份的水溶解，在65°C巴氏杀菌20min后冷却至40±3°C，再加入到85份的发酵羊奶中，混合均匀后迅速冷却至10°C以下，再在4°C冰箱后熟8 10h，即制成产品。所得产品中保加利亚乳杆菌L6活菌数为3. 79 X 108cfu/mL,其中的ACE抑制肽抑制率为79. 61%。实施例5基于保加利亚乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，包括以下步骤I)取0. 4g保加利亚乳杆菌L6的冻干菌粉接种于装有IOmL灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C培养13h，完成第一次活化；取5%上述第一次活化的菌液，按上述操作方法进行第二次活化，共活化3次，即得到活化好的菌种。2)将14g羊奶粉和0. 7g乳清粉溶解于IOOmL的水中，在90°C灭菌15min，冷却至40±3°C后，接入7mL活化好的保加利亚乳杆菌L6，在37°C恒温厌氧发酵11.5h，得到发酵羊奶。3)以质量份数计，将5份的蔗糖、0. 2份的果胶、0. I份的藻酸丙二醇酯用6. 7份的水溶解，在65°C巴氏杀菌20min后冷却至40± 3°C，再加入到88份的发酵羊奶中，混合均匀后迅速冷却至10°C以下，再在4°C冰箱后熟8 10h，即制成产品。所得产品中保加利亚乳杆菌L6活菌数为4. 61 X 108cfu/mL,其中的ACE抑制肽抑制率为87. 13%。
权利要求
1.一种基于保加利亚乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤 1)将保加利亚乳杆菌L6接种于羊奶或羊奶复原乳中，在30 40°C下恒温厌氧发酵10 15h，得到发酵羊奶； 2)按质量份数计，取步骤I)得到的发酵羊奶80 90份，与5 10份的蔗糖、0.15 0.5份的稳定剂及5 30的水充分混合后冷却至10°C以下，得到混合发酵羊奶； 3)将混合发酵羊奶在2 5°C条件下密封，后熟8 10h，得到含ACE抑制肽的发酵羊奶。
2.如权利要求I所述的基于保加利亚乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，其特征在于，所述的保加利亚乳杆菌L6在接种之前还进行以下活化 1)将保加利亚乳杆菌L6的冻干菌粉接种于装有灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混勻后在37°C厌氧培养10 14h,完成第一次活化； 2)按体积分数计，取3 7%第一次活化的菌液，接种于装有灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C厌氧培养10 14h，完成第二次活化； 3)按体积分数计，取3 7%第二次活化的菌液，接种于装有灭菌羊奶复原乳的厌氧管中，充分混匀后在37°C厌氧培养10 14h，完成第三次活化。
3.如权利要求I所述的基于保加利亚乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，其特征在于，所述的羊奶复原乳为羊奶粉与水以10 20 :100的质量比溶解于水中。
4.如权利要求I所述的基于保加利亚乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，其特征在于，所述的羊奶或羊奶复原乳中还添加了乳清粉，以提高发酵羊奶的凝固性以及ACE抑制肽的抑制率；以质量比计，乳清粉添加量为0. 5^0. 9%。
5.如权利要求I所述的基于保加利亚乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，其特征在于，所述稳定剂为果胶、羧甲基纤维素钠、藻酸丙二醇酯中的一种或两种。
6.如权利要求I所述的基于保加利亚乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，其特征在于，所述含ACE抑制肽的羊奶中保加利亚乳杆菌L6的活菌数大于108cfu/mL。
7.如权利要求I所述的基于保加利亚乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，其特征在于，所述含ACE抑制肽的发酵羊奶中ACE抑制肽抑制率为65 90%。
8.权利要求I所述制备的含ACE抑制肽的发酵羊奶在制备预防高血压或高血压辅助治疗的饮品中应用。
全文摘要
本发明公开了一种基于保加利亚乳杆菌发酵的含ACE抑制肽的羊奶的制备方法，将保加利亚乳杆菌L6接种于羊奶或羊奶复原乳中，在30～40℃下恒温厌氧发酵10～15h，得到发酵羊奶；将发酵羊奶80～90份，与5～10份的蔗糖、0.15～0.5份的稳定剂及5～30的水充分混合后冷却至10℃以下，得到混合发酵羊奶；将混合发酵羊奶在2～5℃条件下密封，后熟8～10h，得到含ACE抑制肽的羊奶。所制备的发酵羊奶既具有普通酸羊奶的营养价值和独特风味，还含有抑制率较高的ACE抑制肽，不仅促进了羊奶资源的开发利用，对于高血压的防治以及高血压患者的营养保健也有积极作用。
文档编号A23C9/123GK102948477SQ20121047065
公开日2013年3月6日 申请日期2012年11月19日 优先权日2012年11月19日
发明者陈合, 吉喆, 舒国伟 申请人:陕西科技大学