专利名称：植物乳杆菌菌株用作降血胆固醇试剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药、微生物学和营养学领域，具体而言涉及植物乳杆菌 (Lactobacillus plantarum)的新型益生菌菌株，其用于降低胆固醇。
背景技术：
异常的高胆固醇水平(高胆固醇血症)与心血管疾病有重大的关联，因为其促进动脉中粥样斑的发展。潜在的降血胆固醇药物和食品得到持续开发以控制具有异常高水平胆固醇者的血清胆固醇。这些药物可基于中断胆汁盐的肠肝循环(EHC)。胆汁盐代谢和胆固醇代谢是紧密相关的。胆汁盐为胆固醇的水溶性分泌终产物，对消化道中乳化脂肪至关重要。其在肝脏中主要以甘氨酸-或牛磺酸-缀合物形式合成。一天内十二指肠中会数次分泌胆汁盐 (平均为六次)，其通过空肠进入回肠。在肠运输中，大多数胆汁盐被重吸收，通过门静脉回到肝脏。一小部分胆汁盐进入排泄物而损失，此损失部分在肝脏中由内源胆固醇进行新的合成。排泄物中损失的胆汁盐的量增加导致胆固醇新合成的增加，这样有效减少了内源胆固醇储存。当前使用的一组称为树脂的降胆固醇药物(消胆胺(Cholestyramine)、考来替泊(Colestipol)、考来维仑(Colesevelam))即通过此种作用机制发挥活性。除了在药学上或手术上通过阻断EHC降低血清胆固醇水平的尝试之外，也有人提出摄入特定细菌细胞也可能影响胆固醇水平。肠细菌可通过同化来自膳食的外源胆固醇进入细菌膜或通过去缀合胆汁盐而影响胆固醇水平。在肠运输中，胆汁盐经历了大量的细菌转化过程，其中最重要的是胆汁盐去缀合。在一些肠乳酸细菌(LAB)种属中存在去缀合(或水解)胆汁盐的能力，在其他一些属中也存在。胆汁盐去缀合时，甘氨酸或牛磺酸从分子的类固醇部分释放，形成游离(去缀合)的胆汁盐。游离胆汁盐在低PH下更易沉淀。其还比它们的缀合对应物能更不易有效地重吸收。因此，去缀合胆汁盐比结合胆汁盐更易分泌入排泄物中。胆汁盐去缀合通过增加胆汁盐的分泌而影响EHC，人们认为其对于减少血液胆固醇水平比仅仅滞留外源胆固醇更有效。在数种摄入胃肠道的LAB种属中已经检测到胆汁盐水解酶(BSH)——在EHC过程中负责胆汁盐去缀合的酶。Tanaka等人(参照“Screening of Lactic Acid Bacteria for Bile Salt Hydrolase Activity", Journal of Dairy Science 1999, vol. 82,p.2530-35) 筛查了超过300株来自双歧杆菌属(Bifidobacterium)和乳杆菌属(Lactobacillus)以及乳酸乳杆菌(Lactococcus lactis)、肠膜状明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)和嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)种的LAB。对于273株菌得到的结果显示BSH活性在不同种之间分布不均一。根据此项研究，几乎所有双歧杆菌菌株具有BSH活性，而此活性只在选定的乳杆菌菌株中发现。
植物乳杆菌为革兰氏阳性耐氧性LAB，通常发现于发酵的食物产品以及厌氧性植物物质中。其还存在于唾液(它首次分离于此)中。由于其在工业加工和保质期内具有良好的存活率，还由于其具有高的酸化形式和良好的感官特性，植物乳杆菌菌株尤其适合于发酵食物产品的工业制备。还有一些植物乳杆菌菌株被认为是益生菌。益生菌为当以适当的量施用时能赋予宿主健康益处的活的微生物。细菌必须满足与以下条件相关的几方面要求才能称为益生菌在到达下胃肠道(GIT)并粘附于肠道粘膜时没有毒性且具有有活力， 等等。大多数益生细菌属于LAB组群，然而，一般已知的是益生菌特征和益处即使在相同种的LAB中间都有极大的菌株依赖性。通常将商业化植物乳杆菌菌株视为益生菌，且有描述其在以益生饮料形式摄入时，降低了血清中的纤维蛋白原和胆固醇水平(参照Bukowska等人， "Decrease in fibrinogen and LDL-cholesterol levels upon supplementation of diet with Lactobacillus ρlantarum in subjects with moderately elevated cholesterol Atherosclerosis 1998，vol. 137，p. 437-38)。然而，这些研究中的 LDL-胆固醇减少很微弱，伴随HDL-胆固醇的类似微弱减少。没有发表过与植物乳杆菌的BSHA 相关的数据。因此，需要提供新型的改良益生菌菌株用作降血胆固醇试剂。发明概述本发明提供了新型的改良益生菌菌株用于降低血液胆固醇，并因此可用于预防和治疗心血管紊乱。本发明者提供了三种分离自人排泄物的新型益生植物乳杆菌菌株。发现所述菌株具有惊人的高BSH活性。如前文提到的，高的细菌BSH活性与胆固醇减少之间存在有紧密联系，这使得本发明的菌株可用做降血胆固醇试剂。下文的工作实施例表明这些菌株与相关的商业可得的植物乳杆菌菌株相比具有显著更高的BSH活性，所述商业可得的植物乳杆菌菌株如植物乳杆菌或存在于商业益生菌混合物VSL#3中的植物乳杆菌株。还显示本发明的菌株对减少来自含可溶性胆固醇培养基的培养物胆固醇有效。尽管新型菌株中每种独自作用时都表现出相对已知菌株的优势，然而当所述三种菌株一同使用时这些优势得以放大，故显示出协同行为。本发明菌株的降胆固醇活性也在体内得到证明。下文的实施例表明含有本发明的益生菌菌株的产品在施用给高胆固醇血症受试者时，对于减少其中胆固醇尤其有效。因此，本发明第一个方面涉及包含有效量的至少一种选自植物乳杆菌CECT 7527、 植物乳杆菌CECT 75 和植物乳杆菌CECT 75 的菌株的组合物，其中突变体菌株是通过使用所述保藏菌株作为起始材料获得的，且其中突变体菌株保留或进一步提高母本菌株的降胆固醇活性。在一个具体的实施方式中，本发明涉及包含有效量的至少一种选自植物乳杆菌CECT 7527、植物乳杆菌CECT 75 和植物乳杆菌CECT 75 的菌株或其突变体菌株的组合物。如本文所使用的，术语“有效量”指的是这样的量，活性试剂的量足够高以传递所需要的益处，但足够低以避免产生医学评价范围内的严重副作用。本发明的另一个实施方式涉及包含有效量的植物乳杆菌CECT7527、植物乳杆菌 CECT 75 和植物乳杆菌CECT 75 或其突变体菌株的组合物，其中所述突变体菌株是使用保藏菌株作为起始材料获得的，且其中所述突变体菌株保留或进一步提高了母本菌株的降胆固醇活性。在一个具体的实施方式中，本发明的组合物包含有效量的植物乳杆菌CECT 7527、植物乳杆菌CECT75^及植物乳杆菌CECT 7529。清楚的是本领域技术人员可通过使用保藏菌株作为起始材料，常规地通过传统突变或再分离技术获得保留有本文描述的相关特征和优势的进一步的其突变体或衍生物。因此，术语“其突变体”涉及通过使用保藏菌株作为起始材料获得的突变体菌株，所述突变体菌株保留或加强了母本菌株的降胆固醇特性。本领域技术人员会决定采用合适的方法来确定菌株的降胆固醇活性。测量此活性的可能方法的实例在下文的实施例中显示。本发明的菌株的优势在于其尤其可用作益生菌。如上文提到的，益生细菌必须满足与无毒、活力、粘附性及有益效应相关的几方面要求。这些益生菌特征甚至在相同种的细菌中都有菌株依赖性。因此，找出在所有益生菌要求上具有更好表现的菌株十分重要。下文的实施例表明本发明的菌株具有极好的益生菌特征。本发明的菌株显示出对于哺乳动物胃肠环境的条件(酸性环境，高溶菌酶，胆汁盐和过氧化氢浓度)具有高度的抗性，因此能够在通过GIT的过程中存活。所述菌株还对肠上皮有良好的粘着性，这使得其能存留在肠道中并发挥其益生菌效应。与其他商业菌株相比，本发明的菌株显示了对GIT环境的更好的抗性以及更高的粘着能力。另外，其还显示出安全性，因为它们没有毒性效应；其不会导致LAB易位的增加，也不会促进宿主哺乳动物中肠细菌的易位。进一步地，本发明菌株在宿主中具有数种有益效应。除了其降胆固醇活性之外， 由于其拮抗活性，它们有益于肠道微生物群的平衡。术语“拮抗活性”指的是益生细菌的活性对胃肠非有益细菌的生长的抑制。具有胃肠微生物平衡失调的病况称为生态失调 (disbiosis)，这对人类的健康有多重负面后果。下文会显示所述菌株相比其他商业植物乳杆菌株具有更高的抑制病原菌株生长的能力。所述菌株还产生大量的短链脂肪酸(SCFA)。由不可消化纤维生产出SCFA是一种有意义的益生能力。此种能力在益生菌中是很需要的，因为所产生的SCFA在宿主中显示出 /LftWM^^ft (#MWong J. ,"Colonic health fermentation and short chain fatty acids”，J Clin Gastroenterol 2006, vol. 40, p. 235-43) 在 SCFA 中，丙酸和丁酸的产生对于本发明的内容具有更大的意义。所述第一种具有抗炎性效应，这在降低系统炎症上有用。全身炎症有可能导致动脉粥样化形成，动脉粥样化形成是最重要的心血管风险因素之一(参照Naruszewicz M. ,“Potential parapharmaceuticals in the traditional Polish diet，，2005，Journal of Physiology and Pharmacology, vol. 56，suppl 1，p. 69-78)。已知丁酸对结肠上皮有益，因为其是结肠细胞主要的能量来源。由于其可在人类宿主中发挥数种有益的效应，这些益生细菌可用作治疗性或预防性试剂。具体而言，本发明的菌株有降低血液胆固醇水平的效果。如上文说明的，高胆固醇水平与心血管疾病紧密相关，因为其促进动脉中粥样斑的发展。因此，本发明的菌株可用于预防或治疗心血管障碍。因此，本发明另一个方面涉及包含有效量的至少一种本发明的菌株或其突变体菌株的组合物，用作预防性和/或治疗性试剂。在一个优选的实施方式中，本发明的组合物用于预防或治疗动物(包括人)的心血管障碍。在另一个实施方式中，本发明提供如上文描述的组合物在制备用于预防和/或治疗心血管障碍的药物中的用途。备选地，其可作为预防和/或治疗动物(包括人)心血管障碍的方法而配制，包括对需要其的所述的动物施用有效量的本发明的组合物。在另一个实施方式中，将本发明的组合物用作降血胆固醇试剂。在一个进一步的实施方式中，本发明提供如上文描述的组合物在制备用于降低胆固醇的药物中的用途。备选地，其可作为降低动物(包括人)的胆固醇的方法而配制，包括对需要其的所述的动物施用有效量的本发明的组合物。可将本发明的组合物施用给患有冠脉障碍的患者，也可以施用给健康受试者。在一个特定的实施方式中，接受本发明组合物的受试者患有高胆固醇血症。本发明的益生菌组合物的进一步的优势在于没有植物留醇呈现出的副作用，已有描述这些留醇与他汀类联合使用在留醇高吸收受试者中有不良后果。近期的证据表明在他汀类单一疗法中可见的一些残余冠心病风险是他汀类的后果，其实际上在留醇(包括植物甾醇)高吸收者患者中增加冠心病风险。留醇高吸收受试者达到人群的约25%，其中大多数显示包含腺苷-5，-三磷酸(ATP)结合盒(ABC)半转运子(half-transporter) ABCG8的多态性(Goldstein M 等人，"Statins, plant sterol absorption, and increased coronary risk". Journal of Clinical Lipidology，2008，vol. 2，p. 304-305)。进一步地，已经有人指出饮食性植物留醇富集与他汀类疗法对于升高血液和组织的植物留醇水平有叠加效果， 并且这一点在留醇高吸收者中尤其明显。本发明的益生菌组合物没有这些缺陷，并可与他汀类或任何其他胆固醇药物联合施用给任何人群。因此，在一个特定的实施方式中，将本发明的组合物施用给留醇高吸收受试者。在另一个具体的实施方式中，本发明的组合物与他汀类联合施用。本发明的菌株还促进宿主的免疫调制效应，因为其诱导肠粘膜产生改善的细胞因子谱(cytokine pattern) 0所述免疫调制效应对宿主有益，因为其有助于改善疾病抗性及减少过敏风险。已知GIT中生活的革兰氏阴性细菌在其细胞表面展示有LPS(脂多糖)分子，LPS诱导肠粘膜细胞产生炎性标记物。补充益生菌可改变这种情况，有助于具有更好的生态健康性或具有针对一些革兰氏阴性微生物的拮抗特性的革兰氏阳性细菌在GIT中更多存在(分组为乳酸细菌组群)，因此降低了肠粘膜中存在的LPS。然而，一些益生微生物本身显示出调制细胞因子(其为调节体内炎性及免疫应答的信使分子)产生的能力。具体而言，一些益生细菌诱导了肠粘膜中促/抗炎性信号转导之间形成更好的平衡形式(而不降低革兰氏阴性细菌的数量)。如上文提到的，此种细菌刺激的免疫调制也具有抗动脉粥样化效应。如下文要阐明的，有发现本发明的菌株本身能促进肠粘膜细胞产生的炎性肿瘤坏死因子-α (TNF-α)水平下降以及抗炎性白介素-IO(IL-IO)水平的增加，从而诱导肠粘膜产生改善的细胞因子谱。此种免疫调制效应通过所述菌株的拮抗特性得以补充，在于减少 GIT中病原性革兰氏阴性细菌的存在，并降低肠粘膜中LPS的量。包含有效量的至少一种保藏菌株或其突变体的根据本发明的组合物可配制成可食用的、药学的或兽医学的产品，其中所述菌株是唯一的活性试剂或与一种或多种其他活性试剂混合和/或与药学或兽医学可接受赋形剂(在其为药学或兽医学产品的情况下) 或合适的添加剂(在其为可食用产品的情况下)相混合。在本发明的一个具体的实施方式中，所述产品另外包含一种或多种进一步的活性试剂。优选地，添加的活性试剂为其他益生细菌。根据配方，这些菌株可以以纯化细菌、细菌培养物、细菌培养物的部分、已经过后处理的细菌培养物的形式，单独地或连同合适的载体或成分而添加。也可以添加益菌生 (prebiotics)，形成共生组合物。在一个具体的实施方式中，本发明的组合物另外包含选自低聚果糖和低聚半乳糖的益菌生。在另一个方面，本发明提供了药学和/或兽医学产品，其包含有效量的含有至少一种保藏菌株或其突变体菌株的组合物，还含有适当量的药学或兽医学可接受赋形剂。基于此种考虑，可将所述药学产品制备成以片剂、丸剂、胶囊、微胶囊、颗粒剂、混悬剂、糖浆、 冻干粉剂、液体制剂等等的形式进行口服施用。出于所述组合物的特定目的，选择赋形剂及对于用于制剂的最适方法的在药学技术领域一般技术人员的能力范围之内。尽管口服施用是优选的方式，也可能采用其他的形式，如注射、直肠给药或局部施用。如本文所使用的，术语“药学可接受的”指的是化合物、材料、组合物和/或剂型， 其在良好的医学判断范围内适合用于与受试者(例如，人)的组织相接触而无多余毒性、刺激、过敏应答或其他问题或并发症，并且同时具有合理的利弊比率。每种载体、赋形剂等在与制剂的其他成分相兼容的意义上也必须是“可接受的”。合适的载体、赋形剂等可在标准药学课本中找到。类似地，术语“兽医学可接受的”指的是适合用于与非人动物的组织接触。本发明的菌株还可包含在多种可食用产品中，如乳制品、酸奶、凝乳、乳酪(例如，夸克乳酪、奶油乳酪、加工乳酪、软和硬乳酪)、发酵乳、乳品粉末、乳基发酵产品、冰淇淋、基于谷物的发酵产品、乳品基粉末、饮品、调味品和宠物食品。在本文中术语“可食用产品”是以其最广泛的意义使用的，其包括可被动物摄取的任何呈现形式的任何类型的产品，但不包括药学和兽医学产品。其他可食用产品的实例为肉制品(例如，肝酱、法兰克福香肠和沙拉米香肠或肉酱(meat spreads))、及巧克力酱、馅料(例如，松露、奶油)以及起霜制品(frosting)、巧克力、糖果(例如，饴糖(caramel)、软糖和太妃糖)、烘焙制品(蛋糕、点心)、沙司和汤、果汁及调咖啡白油(coffee whiteners)。尤其感兴趣的可食用产品为膳食补充剂和婴儿配方食品。在本发明的意义上，膳食补充剂还包括营养制品 (nutraceutical)——已知其为对人类健康有医疗作用的食品提取物。用于动物食品的饲料也包括在本发明范围之内。本发明的组合物还可用做其他食物产品的成分。因此，在本发明的另一个方面，提供了包含本发明组合物连同适当量的可食用成分的可食用产品。优选地，本发明的组合物为膳食补充剂。所述组合物中每种菌株的菌落形成单位(Cfu)的有效量可由本领域技术人员确定并要取决于最终的制剂。例如，根据立法现状，可食用产品中的一种或多种菌株以大约 105cfu/g-大约1012cfu/g的量存在，优选地以大约107cfu/g-大约1012cfu/g的量存在。术语“菌落形成单位”(“cfu”)定义为琼脂平板上通过微生物学计数显示的细菌细胞数量。膳食补充剂通常含有量为107-1012cfu/g范围内的益生菌菌株。在一个特定的实施方式中，本发明的组合物为膳食补充剂，其包括IO9-IO11CfVg,优选地为大约IO11CfVg的所述保藏菌株。在另一个实施方式中，所述膳食补充剂包含IO9Cfu的本发明的一种或多种菌株株。本发明的组合物的合适施用方案可由本领域技术人员确立。本发明的组合物可以一日一次、一周一次、每周数次或每日数次进行施用。在另一个实施方式中，每日剂量包含IO9Cfu的本发明的一种或多种菌株。本发明的菌株是通过将细菌在合适培养基中并于合适条件下培养而生产的。所述菌株可单独培养以形成纯培养物，或和其他微生物一同作为混合培养物培养，或通过分开培养不同类型细菌然后将其以所需要的比例组合混合。在培养后，回收细胞悬液并如所述进行使用或以所需的方式处理，例如，通过浓缩或冻干，以进一步在制备药学或可食用产品中采用。有时益生菌制备物要经过固定化或封装加工以改善保质期。数种用于固定化或封装细菌的技术在本领域已知(参照Kailasapathy等人，"Microencapsulation of Probiotic Bacteria-Technology and Potential Applications", Curr Issues Intest Microbiol 2002，vol. 3，p.39-48)。如果根据本发明的组合物是用作膳食补充剂，其可以以这样的方式施用——可与合适的可饮用液体(如水、酸奶、乳品或果汁)混合或可与固态或液态食品混合。在这种情况下，所述膳食补充剂可以为片剂、丸剂、胶囊、颗粒剂、粉剂、混悬剂、囊剂(sachet)、锭剂、 糖果(sweet)、棒剂(bar)、糖浆和相应施用形式，通常为单位剂量形式。优选地，本发明组合物以片剂、胶囊、糖浆或丸剂形式施用，其以制备药学产品的常规工艺过程而制备。如下文实施例中显示的，提供的菌株中每种与商业可得的植物乳杆菌菌株相比 (如植物乳杆菌或植物乳杆菌VSL#3)，都具有改善的特性。具体而言，由于其惊人的高BSH活性，这三种菌株具有改善的降血胆固醇效应。因此，这些菌株中每种都可用于本发明的组合物中，可以单独使用或与本发明其他菌株组合使用。例如，本发明的组合物可单独包含有效量的植物乳杆菌菌株CECT 7527或同时包含其与药学可接受赋形剂、或可食用成分、防腐剂等等。并且，本发明组合物可包含有效量的植物乳杆菌菌株CECT 7527和植物乳杆菌菌株CECT 75 和/或植物乳杆菌菌株CECT 7529，连同药学可接受赋形剂、或可食用成分、防腐剂，等等。本发明一个进一步的方面提供了植物乳杆菌的菌株，其选自植物乳杆菌CECT 7527，植物乳杆菌CECT 7528和植物乳杆菌CECT 7529构成的一组，或其突变体菌株，其中突变体菌株是通过使用保藏菌株作为起始材料获得的，且其中突变体菌株保留或进一步改善了母本菌株的降胆固醇活性。在一个具体的实施方式中，所述菌株选自保藏菌株中的一种。以下章节描述了本发明菌株的降血胆固醇的能力，以及其分类学特征和其特异的益生菌特征，包括其对免疫系统的作用。这些实施例不意欲限制本发明。所得结果表明本发明的菌株与商业植物乳杆菌菌株相比，具有改善的益生菌特征。进一步地，显示了包含本发明菌株的组合物比已知的含植物留醇的制剂，具有更好的体内降胆固醇活性除非另有规定，本文使用的所有技术和科学术语都与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的含义相同。与本文所描述的方法和材料类似的那些也可在本发明的实践中使用。贯穿整个说明书和权利要求，词语“包含”及其变体不意欲排除其他技术特征、添加剂、组分或步骤。本发明另外的目标、优势及特征会在本领域技术人员检查本说明书时对其变得明显，或者通过对本发明的实践得到了解。以下实施例和附图以示例说明的方式提供，不意欲限制本发明。进一步地，本发明涵盖本文描述的具体和优选实施方式的所有可能的组合。
附图简述
图1. Sma-I (A)和 Sfi-I (B)限制性消化 1，植物乳杆菌 299v ；2，F2099 ；3，F3147 ； 4，植物乳杆菌VSL#3 ；5，F3276的基因组DNA产生的脉冲场电泳图谱。
实施例1.新型菌株的体外降血胆固醇活性本发明的菌株分离自婴儿排泄物，并且通过下文描述的方法进行胆汁盐水解酶 (BSH)活性筛选中就其高性能在其他500种细菌菌株选择出。所选择的菌株显示了明显的革兰氏+染色，以及杆菌形态，而且不形成孢子。菌株根据的布达佩斯条约保藏于西班牙典型培养物保藏中心(Colecci0n Espafiola de Cultivos Tipo, CECT, Universidad de Valencia, Edificio de investigacion, Campus de Burjassot,46100 Burjassot, Valencia)。发出了对应的存活证明且菌株得到以下的登记号植物乳杆菌CECT 7527 (在本说明书中也称为F2099)，植物乳杆菌CECT 7528 (在本说明书中也称为F3147)，以及植物乳杆菌CECT 7529(在本说明书中也称为F3276)。进入CECT的日期为菌株F3276和F2099 是2009年5月7日，菌株F3147为2009年7月15日。进一步在体外研究所述菌株的降血胆固醇活性并与商业对照菌株，植物乳杆菌 299v菌株(此处起称作Lp 299v)及商业VSL#3培养物中的植物乳杆菌菌株(此处起称作 Lp VSL#3)进行比较。如上文说明的，已有两种机制被描述用于降低乳酸细菌引起的胆固醇水平，即，胆汁酸去缀合引起的胆固醇新合成及通过从膳食中同化外源胆固醇。因此，对所有菌株进行BSH活性测定以及培养物的降胆固醇测试。此外，对含有新型菌株不同组合的混合培养物进行测定以确定所述菌株间在BSH及培养物降胆固醇活性方面是否存在协同效应。实验步骤按 Hyeong-Jun Lim 等人(参照 “ Isolation of cholesterol lowering lactic acid bacteria from human intestine for probiotic use，，，J Vet Sci 2004, vol. 5，p. 391-5)描述的方法进行，有轻微的变动。1·1·胆汁盐水解酶活性将菌株在MRS肉汤(pH 6. 4)上于30°C，在含5% CO2的气体条件中培养过夜。孵育后，将培养物标准化至108cfu/ml并制备以下混合培养物F2099+F3147，F2099+F3276, F3147+F3276, F2099+F3147+F3276。混合培养物含有等量的每种成分菌株且与单一菌株培养物具有相同的总细菌浓度。对单一菌株培养物和混合培养物都进行BSH活性测定。将培养物注入MRS琼脂平板(补充有4% (w/v)的牛磺去氧胆酸钠盐(TDCA，Sigma, USA)及 0. 37g/l CaCl2)上的灭菌圆纸片周围。将平板在无氧条件下于37°C孵育72h，并测量圆片周围沉淀区域的直径。然后通过由抑制区直径(IZD)减去圆片直径(DD)并将此差值除以 2，根据公式GI = (IZD-DD) /2计算BSH活性(见表1)。表1.胆汁盐水解酶(BSH)活性
权利要求
1.组合物，其包含有效量的至少一种选自植物乳杆菌CECT7527、植物乳杆菌CECT 7528及植物乳杆菌CECT 7529的菌株。
2.根据权利要求1的组合物，其包含有效量的菌株植物乳杆菌CECT7527、植物乳杆菌CECT 75 和植物乳杆菌CECT 7529。
3.根据权利要求1-2中任何一项的组合物，用作益生菌。
4.根据权利要求1-2中任何一项的组合物，用作预防性和/或治疗性试剂。
5.根据权利要求4的组合物，用于预防和/或治疗心血管障碍。
6.根据权利要求3-5中任何一项的组合物，用作降血胆固醇试剂。
7.根据权利要求3-6中任何一项的组合物，用于与他汀类联合使用。
8.根据权利要求3-7中任何一项的组合物，用于留醇高吸收受试者。
9.一种药学和/或兽医学产品，其包括有效量的根据权利要求1-2的组合物，以及适当量的药学或兽医学可接受赋形剂。
10.一种可食用产品，其包括有效量的根据权利要求1-2的组合物，以及适当量的其他可食用成分。
11.根据权利要求10的可食用产品，其为膳食补充剂。
12.根据权利要求11的可食用产品，其为营养制品。
13.根据权利要求11-12中任何一项的可食用产品，其为片剂、胶囊、糖浆或丸剂的形式。
14.根据权利要求10的可食用产品，其为乳制品或肉制品。
15.植物乳杆菌菌株，其选自植物乳杆菌CECT7527、植物乳杆菌CECT 75 和植物乳杆菌 CECT 7529。
全文摘要
本发明涉及组合物，其包含有效量的至少一种选自植物乳杆菌CECT 7527、植物乳杆菌CECT 7528及植物乳杆菌CECT 7529的菌株。这些新型菌株具有良好的益生菌特征，并可用于预防和/或治疗心血管障碍。
文档编号A61K35/74GK102548566SQ201080045298
公开日2012年7月4日 申请日期2010年9月28日 优先权日2009年10月9日
发明者J·库内卡斯泰拉纳 申请人:抗体抗生素股份有限公司