一株植物乳杆菌的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一株能以鲜牛奶或复原奶为原料发酵产生 酸奶的菌株。该菌株为植物乳杆菌HLX37
【背景技术】
[0002] 酸奶是牛奶等鲜奶物质经过乳酸菌发酵后获得的一种极具营养价值且口感风味 极佳的乳制品，酸奶在发酵过程中，不仅可使奶中的乳糖、蛋白质等物质转化成乳酸、半乳 糖、氨基酸及小分子肽链等易被人体消化和吸收的物质，乳酸菌的发酵生长还可代谢产生 机体需要的多种B族维生素等物质并同时提供有益菌。基于此，酸奶的饮用可很好的满足 机体对各类营养物质的需求，大大提高机体对营养物质如钙类物质的吸收利用效率，酸奶 中摄入的乳酸菌可作用于机体肠道内壁形成有益菌群及生物屏障，抑制肠道内腐败菌等的 繁殖生长，抑制有害物质对肠道的侵入，形成良好的机体肠道微生态平衡系统，对机体的保 健起到其他食物无可替代的作用。另外饮用酸奶还对可解决乳糖消化不良人群产生的腹 胀、腹泻等问题，有些特异的乳酸菌种还可降解胆固醇，减少部分致癌物质产生及产氨 基丁酸的能力，对人类预防三高疾病，抵抗癌症，促进人类健康的发展起到重要作用。
[0003] 随着生活水平的提高，人们越来越重视通过改善饮食结构来预防疾病的发生，开 发具有预防和保健功能如能调节血脂、降低三高、抑制肿瘤、延缓衰老功能的且风味优良 的酸奶制品极具应用价值，而酸奶的风味、营养价值及功能与其发酵的乳酸菌种类密切相 关，因此获得优质的有特异功能的乳酸菌菌种是发酵调配出优质功能酸奶最核心的技术。
[0004] 为解决上述问题：本申请人致力于筛选出能利用鲜牛奶或复原奶发酵出优质酸奶 特别是有一定保健功能的酸奶菌种，从而为提高酸奶的品质及功能酸奶的开发提供新的发 酵菌源。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一株植物乳杆菌，该菌株为植物乳杆菌HLX37 {Lactobacillus plantarun^L\?niLactobacillus plantarun^L\?n) 于2015年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京 市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC N0: 10632。
[0006] 本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的： 从自然发酵产生的具有酸性风味的牛奶中采集疑似酸奶发酵液，采用MRS固体培养基 对其进行稀释分离培养，挑选出疑似乳酸菌的乳白色菌落，纯化后保存，将保存菌种接种于 灭菌的复原奶中发酵驯化培养，最终获得1株能在42°C发酵9h时使复原奶发酵凝固成固体 酸奶、并且风味口感极佳的乳酸菌菌株，命名为HLX37。通过对菌株进行形态学观察、生理 生化特征鉴定及16S rDNA基因序列测定及系统发育树同源性分析，最终鉴定为植物乳杆菌 {Lactobacillus plantarutn)。
[0007] 进一步地该菌具有以下特征： ① 该菌的对数生长期为接种后的2-9 (h)，之后进入稳定生长期； ② 该菌最适发酵温度为30°C，能在42°C条件下发酵鲜牛奶产生酸奶，适合生长温度 10-50。。； ③ 该菌最适发酵pH值为6. 2,适合生长的pH值范围为3. 0-8. 0之间，发酵产酸使MRS 培养基的pH值降低至3. 0-3. 8 ; ④ 该菌自凝率和他凝率达到87. 74%和27. 76%，有很强的黏附能力； ⑤ 该菌培养72h时对胆固醇的降解率可达45. 82%，有很强的降解胆固醇的能力； ⑥ 该菌可在pH值为2. 5及胆盐含量为0. 5%的条件下耐受4h，有很强的耐酸及胆盐能 力。
[0008] 该菌能利用鲜牛奶或复原奶等物质为原料发酵生产酸奶，具体为将该菌接种于 MRS液体培养基中发酵成菌种母液，以1%的接种量接种于鲜牛奶(或复原奶）中，42°C静置 发酵10h，即制成质地黏稠，酸度适合，口感极佳且有明显清香味的凝固型酸奶制品。
[0009] 本发明的有益效果在于：提供植物乳杆菌HLX37 37 J菌株，该菌有很强的黏附及降胆固醇能力，有很好的耐酸及耐胆盐能力，能发酵鲜牛奶 (或复原奶）产生口感黏稠的具体明显清香味的凝固型酸奶，为酸奶产品的生产及功能酸奶 的开发提供新的发酵菌源。
【附图说明】
[0010] 图1 HLX37的菌落形态图。
[0011] 图2 HLX37的革兰氏染色图。
[0012] 图3菌HLX37的JSM-6380LV扫描电镜菌体形态观察图。
[0013] 图4 HLX37透色电镜图谱。
[0014] 图5菌的PCR扩增片段图谱。
[0015] 图6菌HLX37生长曲线图。
[0016] 图7温度对菌HLX37生长的影响。
[0017] 图8 pH值对菌HLX37生长的影响。
【具体实施方式】
[0018] 以下是本发明结合图形详细阐述该技术方案的详细描述： 本发明植物乳杆菌HLX37 是从自然发酵的酸奶中 分尚获得的。
[0019] 菌的驯化筛选分离 从自然发酵产生的具有酸奶风味的发酵液中吸取lmL自然发酵乳，分别稀释1(T5, KT6， 1(T7次方，各取〇. lml涂布于含有MRS固体培养基的平板上，待稀释液被平板吸收后，42°C 倒置培养24h，挑选出疑似乳酸菌的乳白色单菌落22个，分别在MRS固体平板上划线纯化 培养3次，同时各挑一单菌落于MRS液体培养基中42°C静置培养24h，各取lml发酵菌液， 分别接种入l〇〇mL的复原奶中，42°C发酵13h，以复原奶发酵凝固成固体并产生清香味为指 标，挑选出达到这一指标的菌种8株，保存。继续将这8株菌分别接种入复原奶中反复接种 42°C发酵培养5次，观察复原奶发酵凝固成固体所需的时间，同时感官评价发酵酸奶的风 味口感，最终挑选出1株能在42°C发酵9h时使复原奶发酵凝固成固体酸奶、并且风味口感 最佳的乳酸菌菌株，保存并命名为HLX37。
[0020] 其中各培养基的配方如下： (1) MRS培养基（1L):蛋白胨lO.Og;牛肉粉5.0 g;酵母粉4.0g;葡萄糖20.0g;吐 温 80 l.OmL; K2HP04.3H20 1.5g;无水乙酸钠 3.0g;柠檬酸三铵 2.0g;MgS04.7H20 0.2g; MnS04 *H20 0. 04g〇 (将上述成分加入蒸馏水中，定容到1000 mL，加热溶解，调节pH6. 2， 分装后121 °C高压灭菌20 min。（注：固体培养基在这基础上加琼脂粉20. 0g) (2) 复原奶：市售奶粉(本实验采用雀巢老年奶粉)与水比例为1:8比例混合，115 °C高 压灭菌20 min。
[0021] (3)LB培养基（1L):胰蛋白胨10g;氯化钠10g;酵母浸出汁5g，琼脂20g，PH调 节为7. 5。
[0022] 菌种的鉴定 2. 1菌的形态观察 对菌体HLX37进行菌落形态观察（图1)、电子显微镜观察菌体革兰氏染色形态（图 2)、JSM-6380LV扫描电镜（图3)及透色电镜观察菌体形态（图4)。HLX37菌的主要形态 特征如下：菌落圆，光滑，在MRS培养基上呈乳白色，不透明，革兰氏阳性，菌体杆状，宽： 0? 7-0. 8 y m，长：1. 2-3. 5 y m。
[0023] 生理生化特征的鉴定 HLX37菌株生理生化特征见表1，具体为：奈试产氨实验阳性，VP、MR、淀粉水解、过氧 化氢实验、明胶实验和吲哚实验显示阴性，说明该菌能分解利用大分子含氮物质，不能将葡 萄糖分解产生丙酮酸，不能产生淀粉酶将淀粉水解为糖类物质，不能利用明胶。能发酵利用 a -乳糖、D-果糖、麦芽糖、葡萄糖、蔗糖产酸，不产气。
[0024] 表1 HLX37菌的生理生化特征
【主权项】
1. 一株植物乳杆菌，其特征在于：该菌株为植物乳杆菌HLX37 (ZactoAaciBw1S HLX37A于2015年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生 物中心，保藏编号为CGMCCNO: 10632。
2. -种如权利要求1所述的植物乳杆菌在制备酸奶中的应用。
【专利摘要】本发明提供一株植物乳杆菌，该菌株为植物乳杆菌HLX37（Lactobacillus plantarumHLX37），于2015年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO:10632。本发明的优点在于：植物乳杆菌HLX37有很强的黏附及降胆固醇能力，有很好的耐酸及耐胆盐能力，能发酵鲜牛奶（或复原奶）产生口感黏稠的具体明显清香味的凝固型酸奶，为酸奶产品的生产及功能酸奶的开发提供新的发酵菌源。CGMCC NO:1063220150317
【IPC分类】A23C9-123, C12R1-25, C12N1-20
【公开号】CN104845912
【申请号】CN201510274934
【发明人】林斌, 官雪芳, 吴唐青, 徐庆贤
【申请人】福建省农业科学院, 福建华仁兴食品科技有限公司
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年5月27日