专利名称：一种长片段核酸富集纯化装置的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种长片段核酸富集纯化装置。
背景技术：
核酸提取技术的建立是保障PCR等相应下游实验顺利进行的关键，到目前为 止，干扰杂质较少、保存较好、加工或部分深加工的生物材料基本均可做到利用
生物技术领域熟知的核酸提取技术(普通核酸提取试剂或利用市售特殊装置如 纯化柱法、磁珠法、超滤离心法等)顺利完成适于下游实验的核酸的提取过程。 而干扰杂质多或深加工、保存不善、时间过久甚至高度腐败等核酸大量降解、有 效核酸含量极低的生物材料中核酸的提取，则是目前国内外分子生物学实验室均 尚未解决的难题，以致于使许多研究工作陷入困境。建立切实可行易于操作的针 对该类生物材料的核酸提取技术，以填补多年以来分子生物学实验技术的空白， 是该领域研究工作的急需。
发明内容
本发明的目的在于研制一种长片段核酸富集纯化装置，以解决现有技术存在 的问题。
为了达到上述目的，本研制工作发明的长片段核酸富集纯化装置，包括一个
筒状主体l，在两端开口端口包覆半透膜2，在筒状主体上设有取液孔3和加样 槽4，在加样槽下方的部分筒状主体内充填有琼脂糖凝胶，而取液孔下方的部分 筒状主体保持为空腔，用作注入电泳缓冲液。
上述装置具体的操作方法如下
(a) 电泳槽加入电泳缓冲液；
(b) 取液孔下方的部分筒状主体的空腔加满电泳缓冲液，并盖紧取液孔胶
塞；
(C)将核酸富集纯化装置浸入电泳槽内电泳缓冲液中；
(d) 待纯化核酸与上样缓冲液以及指示染料混匀后，加入到加样槽，并通电；
(e) 待指示染料条带全部进入取液孔下方缓冲液中，弃去取液孔下方的缓冲液；
(f)重新注满电泳缓冲液于取液孔下方的空腔，盖紧取液孔胶塞，重新放入 电泳槽中，继续通电电泳，收集取液孔下方空腔的缓冲液进行酚/氯仿 抽提。
该装置利用在电场条件下，非两性性质的杂质及在电场条件下分子大小不同 的两性性质干扰物的迁移率的不同，有效地纯化并富集长片段核酸。 以下将通过本具体地实施方式来对本发明进行详细的描述。
图1为所述的长片段核酸富集纯化装置的结构示意图
具体实施例方式
如图l所示，为所述的长片段核酸富集纯化装置的结构示意图。该装置包括 一个横向的透明的筒状主体1，在两端开口端口通过密封胶盖8包覆半透膜2， 密封胶盖8能让半透膜2以可开启的方式固定在筒状主体的端口上。在筒状主体 侧壁上部设有取液孔3和加样槽4，取样孔3带有胶塞5。在加样槽下方的部分 筒状主体内充填有琼脂糖凝胶6，而取液孔下方的部分筒状主体保持为空腔7，
用作注入电泳缓冲液。
具体的操作说明如下
(a) 电泳槽加入电泳缓冲液；
(b) 打开核酸富集纯化装置取液孔胶塞5，用一次性滴管加电泳缓冲液于取 液孔内，至加满，盖紧取液孔胶塞；
(c) 将核酸富集纯化装置浸入电泳槽内电泳缓冲液中；
(d) 待纯化核酸与上样缓冲液(含指示染料)混匀后，加入到加样槽，打开 电源，按10V/cm调整电压，并通电；指示染料的分子量比目标核酸的 分子量稍小。
(e) 待指示染料条带全部进入取液孔下方缓冲液中(即或继续电泳30-60 min)，从电泳槽取下富集纯化装置，打开取液孔胶塞，用另一支一次性 滴管吸出取液孔内全部液体，加入少量电泳缓冲液于取液孔内，反复小心吸排冲洗后吸出；当指示染料条全部进入取液孔下方缓冲液中时，表 明分子量比染料的分子量小的核酸等杂质都从凝胶进入到取液孔下方 的缓冲液中，并且由于半透膜的截留，这些杂质停留在取液孔下方的缓 冲液中，弃去这部分缓冲液，则去除了分子量比目的核酸小的杂质。
(f) 重新注满电泳缓冲液于取液孔内，盖紧取液孔胶塞，重新放入电泳槽中， 继续通电，约5-6小时(可适当延长时间)后，关闭电源；
(g) 打开取液孔胶塞，用另一支干净的一次性滴管吸出取液孔下方全部液 体，于一支1.5 mL或2 mL离心管，加入少量电泳缓冲液于取液孔内， 反复小心吸排冲洗后吸出并同样转移至该离心管，尽量控制总体积在 1. 6 mL内；
混匀上述(g)步骤收集的液体采用酚/氯仿法再次抽提。具体方法为加入
等体积酚/氯仿/异戊醇，充分震荡约30s， 7500 Xg室温离心lO min;小心吸 取上清至另一 1. 5 mL离心管，按1/10体积加入3M NaAc，混匀，加入LA溶 液，混匀，加入等体积异丙醇，混匀，-20。C静置约40min-60min后，27 000-30 000Xg， 4'C离心10 min，弃取上清，沉淀加入500y L 70%-80%预冷的乙醇， 充分上下倒置混匀以清洗沉淀，27000-30000Xg， 4'C离心5 rain，弃去上清， 置核酸真空干燥仪干燥。
取预热至约80-9(TC TE缓冲液30-50 y L充分溶解干燥提取物，此即为核酸 纯化产物。
权利要求
1.长片段核酸富集纯化装置，其特征在于包括一个筒状主体(1)，在两端开口端口包覆半透膜(2)，在筒状主体上设有取液孔(3)和加样槽(4)，在加样槽下方的部分筒状主体内充填有琼脂糖凝胶(6)，而取液孔下方的部分筒状主体保持为空腔(7)，用作注入电泳缓冲液。
2. 按权利要求1所述的长片段核酸富集纯化装置，其特征在于所述取液空(3)带有一个胶塞(5)。
3. 按权利要求1所述的长片段核酸富集纯化装置，其特征在于所述的半透 膜(2)通过密封胶盖固定在筒状主体的端口部。
4. 按权利要求1所述的长片段核酸富集纯化装置，其特征在于可为单体或 串联、并联多聚体。
5. 按权利要求1所述的长片段核酸富集纯化装置，其特征在于所述的筒状 主体由透明材料制成。
全文摘要
本发明公开了一种长片段核酸富集纯化装置，包括一个筒状主体1，在两端开口端口包覆半透膜2，在筒状主体上设有取液孔3和加样槽4，在加样槽下方的部分筒状主体内充填有琼脂糖凝胶，而取液孔下方的部分筒状主体保持为空腔，用作注入电泳缓冲液。该装置利用在电场条件下，非两性性质的杂质及在电场条件下分子大小不同的两性性质干扰物的迁移率的不同，有效地纯化并富集长片段核酸。
文档编号C12M1/42GK101619289SQ200810029118
公开日2010年1月6日 申请日期2008年6月30日 优先权日2008年6月30日
发明者万宇平, 何方洋, 李丹宁, 力 谢, 钟国强, 高东微 申请人:广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心;北京望尔生物技术有限公司