专利名称：富含三萜类化合物糖肽的生理功能调节液的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种制备生理功能调节液的制备方法。
背景技术：
巳有技术云芝是一种富含三萜类化合物云芝糖肽的名贵药材，能够促进蛋白质和核酸的 合成，具有很强的免疫及生理调节功能，能够保肝、抗病毒、抗肿瘤。已有技术生理功能调 节液，是对人体及动物机体有益的生理功能调节剂。已有技术的不足之处是其中所含三萜类 化合物糖肽少，效果不够理想。
发明内容
所要解决的技术问题是提供一种富含三萜类化合物云芝糖肽生理功能调节液制备方法。 解决其技术问题的技术方案，包含如下5个步骤 A、制备云芝发酵液分以下五步进行
a、 制备斜面培养云芝菌种将植物蛋白胨、酵母膏、葡萄糖及琼脂粉按照重量比植 物蛋白胨酵母膏葡萄糖琼脂粉水=10: 4: 30: 20: 1000的比例，配制成斜面培养基， 装入试管，加温至121°C灭菌30分钟，冷却至27BC，制成30°-80"斜面，按照重量比云芝菌 种斜面培养基=1: IOO的比例，将云芝菌种接入斜面培养基中，在279C温度下静止培养5 天，得到斜面培养云芝菌种；
云芝菌种采用中国微生物菌种保藏中心的保藏号为CMGCC NO. 5.161杂色云芝菌株。 经过筛选，得到富含三萜类^t合物云芝糖肽的菌株作为菌种。
b、 制备摇瓶培养云芝菌种将植物蛋白胨、酵母膏、葡萄糖及磷酸二氢钾按照重量 比植物蛋白胨酵母膏葡萄糖磷酸二氢钾水=10: 1: 30: 0,6: 1000的比例配置成摇 瓶培养基，装入摇瓶，加温至121。C灭菌30分钟，冷却至27°(:,按照重暈比斜面培养云芝菌 种摇瓶培养基=10: 100的比例，将步骤Aa所得的斜面培养云芝菌种接入摇瓶培养基中， 在温度为27DC转速为80-120转/分的摇床上培养4天，得到摇瓶培养云芝菌种；
C、制备一级种子培养云芝菌种按照重量比豆粕葡萄糖磷酸二氢钾水=20: 20: 0.6- 1000的比例配置成一级种子培养基，装入种子罐中，加温至121。C灭菌30分钟，冷却
5至2/C，按照重量比摇瓶培养云芝菌种 一级种子培养基=10: 100的比例，将步骤Ab所得 的摇瓶培养云芝菌种接入一级种子培养基中，在温度为27。C、通气条件下，培养3天，得到 一级种子培养云芝菌种；
d、 制备二级种子培养云芝菌种按照重量比豆粕葡萄糖磷酸二氢钾水=20: 20: 0.6: 1000的比例，配置成二级种子培养基，装入种子罐中，加温至121"C灭菌30分钟，冷 却至27"C，按照重量比一级种子培养云芝菌种二级种子培养基=5: 10p的比例，将步骤Ac 所得的一级种子培养云芝菌种接入二级种子培养基中，在温度为27°C，通气条件下，培养3 天，得到二级种子培养云芝菌种；
e、 制备云芝深层发酵液按照重量比豆粕葡萄糖磷酸二氢钾水=20: 20: 0.6: 1000的比例配置成云芝深层发酵液培养基，装入发酵罐中，加温至121DC灭菌30分钟，冷 却至27°C，按照重量比二级种子培养云芝菌种云芝深层发酵液培养基=5: 100的比例，将 步骤Ad所得的二级种子培养云芝菌种接入云芝深层发酵液培养基中，在温度27°C，通气条件 下，培养3天，得到含三萜类化合物云芝糖肽的云芝深层发酵液；
B、 制备去除菌丝体的云芝深层发酵液滤液
将步骤Ae所得云芝深层发酵液以40-80目筛过滤去除菌丝体，得云芝深层发酵液滤液；
C、 制备云芝活菌发酵液，分以下5步进行
a、制备活菌发酵液斜面菌种按照重量比植物蛋白胨酵母膏牛肉膏磷酸氢二 钾葡萄糖琼脂粉水=10: 5: 10: 0.5: 20: 20: 1000的比例配制活菌发酵液斜面培养 基，装入试管，加温至121°C灭菌30分钟，冷却至37°(:,制成斜角为30°-80°的斜面，按照 重量比活菌活菌发酵液斜面培养基=1: 100的比例，将活菌菌种接入活菌发酵液斜面培养 基中，在温度37"C，静止培养24-72小时，得到活菌发酵液斜面菌种；
活菌采用中国微生物保藏菌种中心的CMGCC NO. 1.1878嗜酸乳杆菌菌株，经筛选，得到 可利用云芝深层发酵液滤液进行发酵的菌株作为菌种，还可使用乳酸菌，酵母菌、芽胞杆菌； b、制备活菌发酵液摇瓶菌种按照重量比植物蛋白胨酵母膏牛肉膏磷酸氢二 钾葡萄糖水=10: 2: 5: 0.5: 20: 1000的比例，配制活菌发酵液摇瓶培养基，装入摇瓶， 加温至121-C灭菌30分钟，冷却至37°(:，按照重量比活菌发酵液斜面菌种云芝活菌发酵液 摇瓶培养基=10: IOO的比例，将步骤Ca所得的活菌发酵液斜面菌种接入活菌发酵液摇瓶培 养基中，在温度为37C,在转速为80-120转/分钟的摇床上培养24-72小时得到活菌发酵液 摇瓶菌种；C、制备活菌发酵液一级菌种按照重量比植物蛋白胨酵母膏磷酸氢二钾葡萄 糖水=10: 2: 0.5: 20: 1000的比例，配制活菌发酵液一级培养基，装入种子罐，加温至 121"C灭菌30分钟，冷却至37"C，按照重量比活菌发酵液摇瓶菌种活菌发酵液一级培养基 =10: lOO的比例，将步骤Cb所得的活菌发酵液摇瓶菌种接入活菌发酵液一级培养基中，在温 度为37-C，静止培养24-72小时，得到活菌发酵液一级菌种；
d、 制备活菌发酵液二级菌种将步骤B所得的云芝深层发酵液滤液加温至121-C灭 菌30分钟，冷却至37"C，按照重量比活菌发酵液一级菌种云芝深层发酵液滤液=5: 100的 比例，将步骤Cc所得的活菌发酵液一级菌种接入云芝深层发酵液滤液中，在温度为37°C， 静止培养24-72小时，得到活菌发酵液二级菌种；
e、 制备深层培养云芝活菌发酵液将步骤B所得的云芝深层发酵液滤液，装入发酵 罐，加温至121。C灭菌30分钟，冷却至37t，按照重量比活菌发酵液二级菌种云芝深层发 酵液滤液=5: 100比例，将步骤Cd所得的活菌发酵液二级菌种接入云芝深层发酵液滤液中， 在温度为37。C，静止培养48^96小时，得到深层培养云芝活菌发酵液；
D、加入保护剂在测得深层培养云芝活菌发酵液中的活菌数大于或等于108个条件下， 加入保护剂，保护剂的重量为深层培养云芝活菌发酵液的重量的1-5%,得到富含三萜类化合 物云芝糖肽的生理功能调节液成品；
保护剂可以使用海藻糖,也可以使用低聚异麦芽糖、山梨醇、维生素C、 L-谷氨酸。
有益效果本发明应用于制备富含三萜类化合物云芝糖肽的生理功能调节液。有益效果 是，所制成的富含三萜类化合物糖肽的生理功能调节液，具有多种生物活性，能够去除植物 蛋白的抗营养因子，增强免疫力和抗病能力，促进生长，可以用于人的营养、保健，也可以 用于动物词料。其中的富含三萜化合物云芝糖肽能明显降低金葡菌、大肠杆菌、痢疾杆菌等 致病菌感染，用于断奶仔猪可防止仔猪红白痢的发生，促进肠道绒毛细胞的发育，提高消化 率，增进食欲，减少断奶应激，从而提高仔猪成活率和窝重；用于哺乳母猪，可提高采食量 和泌乳量；用于禽类喂养，可保障肠道健康，减少应激，提高料肉比。
具体实施例方式
具体实施方式
包含如下5个步骤
A、制备云芝发酵液分以下五步进行
a、制备斜面培养云芝菌种将植物蛋白胨、酵母膏、葡萄糖及琼脂粉按照重量比植物蛋白胨酵母膏葡萄糖琼脂粉水=10: 4: 30: 20: 1000的比例，配制成斜面培养基, 装入试管，加温至121-C灭菌30分钟，冷却至27""C，制成60"斜面，按照重量比云芝菌种 斜面培养基=1: IOO的比例，将云芝菌种接入斜面培养基中，在27°C温度下静止培养5天， 得到斜面培养云芝菌种；
云芝菌种采用中国微生物菌种保藏中心的保藏号为CMGCC NO. 5.161杂色云芝菌株。 经过筛选，得到富含三萜类化合物云芝糖肽的菌株作为菌种。
b、制备摇瓶培养云芝菌种将植物蛋白胨、酵母膏、葡萄糖及磷酸二氢钾按照重量 比植物蛋白胨酵母膏葡萄糖磷酸二氢钾水=10: 1: 30: 0.6: 1000的比例配置成摇 瓶培养基，装入摇瓶，加温至121°(:灭菌30分钟；冷却至27。C，按照重量比斜面培养云芝菌 种摇瓶培养基=10: IOO的比例，将步骤Aa所得的斜面培养云芝菌种接入摇瓶培养基中， 在温度为27nC转速为100转/分的摇床上培养4天，得到摇瓶培养云芝菌种；
C、制备一级种子培养云芝菌种按照重量比豆粕葡萄糖磷酸二氢钾水=20: 20: 0.6: IOOO的比例配置成一级种子培养基，装入种子罐中，加温至12rc灭菌30分钟，冷却 至27。C，按照重量比摇瓶培养云芝菌种 一级种子培养基=10: IOO的比例，将步骤Ab所得 的摇瓶培养云芝菌种接入一级种子培养基中，在温度为27"C、通气条件下，培养3天，得到 一级种子培养云芝菌种；
d、 制备二级种子培养云芝菌种按照重量比豆粕葡萄糖磷酸二氢钾水=20: 20: 0.6: 1000的比例，配置成二级种子培养基，装入种子罐中，加温至121"C灭菌30分钟，冷 却至2/C，按照重量比一级种子培养云芝菌种二级种子培养基=5: IOO的比例，将步骤Ac 所得的一级种子培养云芝菌种接入二级种子培养基中，在温度为27。C，通气条件下，培养3 天，得到二级种子培养云芝菌种；
e、 制备云芝深层发酵液按照重量比豆粕葡萄糖磷酸二氢钾水=20: 20: 0.6: 1000的比例，配置成云芝深层发酵液培养基，装入发酵罐中，加温至121°C灭菌30分钟， 冷却至27°C，按照重量比二级种子培养云芝菌种云芝深层发酵液培养基=5: 100的比例， 将步骤Ad所得的二级种子培养云芝菌种接入云芝深层发酵液培养基中，在温度27°C，通气条 件下，培养3天，得到含三萜类化合物云芝糖肽的云芝深层发酵液；
B、 制备去除菌丝体的云芝深层发酵液滤液
将步骤Ae所得云芝深层发酵液以80目筛过滤，去除菌丝体,得到云芝深层发酵液滤液；
C、 制备云芝活菌发酵液，分以下5步进行a、制备活菌发酵液斜面菌种按照重量比植物蛋白胨酵母膏牛肉膏磷酸氢二 钾葡萄糖琼脂粉水=10: 5: 10: 0.5: 20: 20: 100Q的比例，配制活菌发酵液斜面培 养基，装入试管，加温至121°C灭菌30分钟，冷却至37-C，制成斜角为60。的斜面，按照重 量比活菌活菌发酵液斜面培养基=1: 100的比例，将活菌菌种接入活菌发酵液斜面培养基 中，在温度37。C，静止培养48小时，得到活菌发酵液斜面菌种；
活菌采用中国微生物保藏菌种中心的CMGCC NO. 1.1878嗜酸乳杆菌菌株，经过筛选，得 到可利用云芝深层发酵液滤液进行发酵的菌株作为菌种；
b、制备活菌发酵液摇瓶菌种按照重量比植物蛋白胨酵母膏牛肉膏磷酸氢二 钾葡萄糖水=10: 2: 5: 0.5: 20: 1000的比例配制活菌发酵液摇瓶培养基，装入摇瓶， 加温至121-C灭菌30分钟，冷却至37"C，按照重量比活菌发酵液斜面菌种云芝活菌发酵液 摇瓶培养基=10: IOO的比例，将步骤Ca所得的活菌发酵液斜面菌种接入活菌发酵液摇瓶培 养基中，在温度为37C,在转速100转/分钟的摇床上培养48小时得到活菌发酵液摇瓶菌种；
C、制备活菌发酵液一级菌种按照重量比植物蛋白胨酵母膏礴酸氢二钾葡萄 糖水=10: 2: 0.5: 20: 1000的比例配制活菌发酵液一级培养基，装入种子罐，加温至121°C 灭菌30分钟，冷却至37-C，按照重量比活菌发酵液摇瓶菌种活菌发酵液一级培养基=10: 100的比例，将步骤Cb所得的活菌发酵液摇瓶菌种接入活菌发酵液一级培养基中，在温度为 37°C，静止培养48小时，得到活菌发酵液一级菌种；
d、 制备活菌发酵液二级菌种将步骤B所得的云芝深层发酵液滤液加温至121。C灭 菌30分钟，冷却至37"C,按照重量比活菌发酵液一级菌种云芝深层发酵液滤液=5: 100的 比例，将步骤Cc所得的活菌发酵液一级菌种接入云芝深层发酵液滤液中，在温度为37-C， 静止培养48小时，得到活菌发酵液二级菌种；
e、 制备深层培养云芝活菌发酵液将步骤B所得的云芝深层发酵液滤液，装入发酵 罐，加温至12rc灭菌30分钟，冷却至37"C，按照重量比活菌发酵液二级菌种云芝深层发 酵液滤液=5: 100比例，将步骤Cd所得的活菌发酵液二级菌种接入云芝深层发酵液滤液中， 在温度为37"C，静止培养72小时，得到深层培养云芝活菌发酵液；
D、加入保护剂在测得深层培养云芝活菌发酵液中的活菌数大于或等于10-个条件下， 加入保护剂海藻糖，保护剂的重量为深层培养云芝活菌发酵液的重量的1-5%,得到富含三萜 类化合物云芝糖肽的生理功能调节液成品。
9
权利要求
1、富含三萜类化合物糖肽生理功能调节液的制备方法，其特征在于包含如下步骤A、制备云芝发酵液分以下五步进行a、制备斜面培养云芝菌种将植物蛋白胨、酵母膏、葡萄糖及琼脂粉按照重量比植物蛋白胨∶酵母膏∶葡萄糖∶琼脂粉∶水＝10∶4∶30∶20∶1000的比例，配制成斜面培养基，装入试管，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至27℃，制成30°-80°斜面，按照重量比云芝菌种∶斜面培养基＝1∶100的比例，将云芝菌种接入斜面培养基中，在27℃温度下静止培养5天，得到斜面培养云芝菌种；云芝菌种采用中国微生物菌种保藏中心的保藏号为CMGCC NO.5.161杂色云芝菌株。经过筛选，得到富含三萜类化合物云芝糖肽的菌株作为菌种；b、制备摇瓶培养云芝菌种将植物蛋白胨、酵母膏、葡萄糖及磷酸二氢钾按照重量比植物蛋白胨∶酵母膏∶葡萄糖∶磷酸二氢钾∶水＝10∶1∶30∶0.6∶1000的比例配置成摇瓶培养基，装入摇瓶，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至27℃，按照重量比斜面培养云芝菌种摇瓶培养基＝10∶100的比例，将步骤Aa所得的斜面培养云芝菌种接入摇瓶培养基中，在温度为27℃转速为80-120转/分的摇床上培养4天，得到摇瓶培养云芝菌种；c、制备一级种子培养云芝菌种按照重量比豆粕∶葡萄糖∶磷酸二氢钾∶水＝20∶20∶0.6∶1000的比例配置成一级种子培养基，装入种子罐中，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至27℃，按照重量比摇瓶培养云芝菌种一级种子培养基＝10∶100的比例，将步骤Ab所得的摇瓶培养云芝菌种接入一级种子培养基中，在温度为27℃、通气条件下，培养3天，得到一级种子培养云芝菌种；d、制备二级种子培养云芝菌种按照重量比豆粕∶葡萄糖∶磷酸二氢钾∶水＝20∶20∶0.6∶1000的比例，配置成二级种子培养基，装入种子罐中，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至27℃，按照重量比一级种子培养云芝菌种二级种子培养基＝5∶100的比例，将步骤Ac所得的一级种子培养云芝菌种接入二级种子培养基中，在温度为27℃，通气条件下，培养3天，得到二级种子培养云芝菌种；e、制备云芝深层发酵液按照重量比豆粕∶葡萄糖∶磷酸二氢钾∶水＝20∶20∶0.6∶1000的比例，配置成云芝深层发酵液培养基，装入发酵罐中，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至27℃，按照重量比二级种子培养云芝菌种云芝深层发酵液培养基＝5∶100的比例，将步骤Ad所得的二级种子培养云芝菌种接入云芝深层发酵液培养基中，在温度27℃，通气条件下，培养3天，得到含三萜类化合物云芝糖肽的云芝深层发酵液；B、制备去除菌丝体的云芝深层发酵液滤液将步骤Ae所得云芝深层发酵液以40-80目筛过滤，去除菌丝体，得到云芝深层发酵液滤液；C、制备云芝活菌发酵液，分以下5步进行a、制备活菌发酵液斜面菌种按照重量比植物蛋白胨∶酵母膏∶牛肉膏∶磷酸氢二钾∶葡萄糖∶琼脂粉∶水＝10∶5∶10∶0.5∶20∶20∶1000的比例，配制活菌发酵液斜面培养基，装入试管，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至37℃，制成斜角为30°-80°的斜面，按照重量比活菌活菌发酵液斜面培养基＝1∶100的比例，将活菌菌种接入活菌发酵液斜面培养基中，在温度37℃，静止培养24-72小时，得到活菌发酵液斜面菌种；活菌采用中国微生物保藏菌种中心的CMGCC NO.1.1878嗜酸乳杆菌菌株，经过筛选，得到可利用云芝深层发酵液滤液进行发酵的菌株作为菌种；b、制备活菌发酵液摇瓶菌种按照重量比植物蛋白胨∶酵母膏∶牛肉膏∶磷酸氢二钾∶葡萄糖∶水＝10∶2∶5∶0.5∶20∶1000的比例配制活菌发酵液摇瓶培养基，装入摇瓶，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至37℃，按照重量比活菌发酵液斜面菌种云芝活菌发酵液摇瓶培养基＝10∶100的比例，将步骤Ca所得的活菌发酵液斜面菌种接入活菌发酵液摇瓶培养基中，在温度为37C，在转速为80-120转/分钟的摇床上培养24-72小时得到活菌发酵液摇瓶菌种；c、制备活菌发酵液一级菌种按照重量比植物蛋白胨∶酵母膏∶磷酸氢二钾∶葡萄糖∶水＝10∶2∶0.5∶20∶1000的比例配制活菌发酵液一级培养基，装入种子罐，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至37℃，按照重量比活菌发酵液摇瓶菌种活菌发酵液一级培养基＝10∶100的比例，将步骤Cb所得的活菌发酵液摇瓶菌种接入活菌发酵液一级培养基中，在温度为37℃，静止培养24-72小时，得到活菌发酵液一级菌种；d、制备活菌发酵液二级菌种将步骤B所得的云芝深层发酵液滤液加温至121℃灭菌30分钟，冷却至37℃，按照重量比活菌发酵液一级菌种云芝深层发酵液滤液＝5∶100的比例，将步骤Cc所得的活菌发酵液一级菌种接入云芝深层发酵液滤液中，在温度为37℃，静止培养24-72小时，得到活菌发酵液二级菌种；e、制备深层培养云芝活菌发酵液将步骤B所得的云芝深层发酵液滤液，装入发酵罐，加温至121℃灭菌30分钟，冷却至37℃，按照重量比活菌发酵液二级菌种云芝深层发酵液滤液＝5∶100比例，将步骤Cd所得的活菌发酵液二级菌种接入云芝深层发酵液滤液中，在温度为37℃，静止培养48-96小时，得到深层培养云芝活菌发酵液；D、加入保护剂在测得深层培养云芝活菌发酵液中的活菌数大于或等于10 id="icf0001" file="A2008100698290004C1.tif" wi="2" he="3" top= "52" left = "169" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="yes"/>个条件下，加入保护剂海藻糖，保护剂的重量为深层培养云芝活菌发酵液的重量的1-5％，得到富含三萜类化合物云芝糖肽的生理功能调节液成品。
全文摘要
富含三萜类化合物糖肽的生理功能调节液的制备方法，涉及一种制备生理功能调节液的制备方法。所要解决的技术问题是，提供一种制备富含三萜类化合物糖肽的生理功能调节液的制备方法。解决其技术问题的技术方案，包含如下4个步骤制备云芝发酵液，包含制备斜面培养云芝菌种、制备摇瓶培养云芝菌种、制备一级种子培养云芝菌种、制备二级种子培养云芝菌种及制备云芝深层发酵液；制备去除菌丝体的云芝深层发酵液滤液；制备云芝活菌发酵液及加入保护剂。本发明应用于制备富含三萜类化合物云芝糖肽的生理功能调节液。有益效果是所制成的生理功能调节剂，具有多种生物活性，能去除植物蛋白抗营养因子，增强免疫力和抗病能力，促进生长，可用于人的营养、保健，也可用于动物饲料。
文档编号A23L1/305GK101601435SQ200810069829
公开日2009年12月16日 申请日期2008年6月13日 优先权日2008年6月13日
发明者丽 任, 孟怀旺, 苏文静, 军 陈 申请人:丽 任