专利名称：一种α-半乳糖基-β-环糊精的酶法制备方法
一种a-半乳糖基-P-环糊精的酶法制备方法技术领域一种oc-半乳糖基-(3-环糊精的酶法制备方法，涉及环糊精技术领域。
技术背景环糊精(Cydodextrin)是由数个葡萄糖残基以ot-1,4糖苷键连接而成的环式 低聚糖。环糊精的环状结构提供了一个疏水的内部空腔，而自由羟基位于环外 侧，使环糊精具有内疏水、外亲水的特殊性质。环糊精的这种特殊性质，近年 来在制药、化工、食品等领域有广泛地研究及应用。比较常见的环糊精是分别 由6、 7和8个葡萄糖残基组成的a-， P-和Y-环糊精。其中含有7个葡萄糖残基 的(3-环糊精生产工艺简单，成本较低，是目前工业上唯一能大量生产且应用较 广的环糊精产品。但是，P-环糊精具有水溶性较差的问题，制约了其在各方面的进一步应用。 目前，通过(3-环糊精的改性可以达到增加水溶性的目的。(3-环糊精的改性一般 通过化学法和酶法两种方法，相对于化学法改性，酶法改性则具有专一性强、 安全性高等优点。本发明以p-环糊精和蜜二糖为原料，通过ct-半乳糖苷酶的逆向合成作用，制备得到a-半乳糖基-(3-环糊精。这种分支环糊精具有较高的水溶性，而且，其分支上的半乳糖在动物组织中具有特殊的识别受体。因此，具有广阔的应用前 旦豕o发明内容本发明的目的是提供一种以(3-环糊精和蜜二糖为原料，通过a-半乳糖苷酶 的逆向合成作用，审恪得到a-半乳糖基-(3-环糊精的方法。这种分支环糊精具有 较好的水溶性，其半乳糖支链在动物组织中具有特殊的识别受体。具有广阔的 应用前景。本发明的技术方案 一种a-半乳糖基-(3-环糊精的酶法制备方法，以P-环糊 精和蜜二糖为原料，通过a-半乳糖苷酶的逆向合成作用，经溶解、合成、粗分、 纯化、干燥等工序，制备得到a-半乳糖基-卩-环糊精。制备工艺如下(1) 原料以(3-环糊精和蜜二糖为原料，P-环糊精和蜜二糖摩尔比为1 : 1-2， a-半乳糖苷酶20 30U/g蜜二糖。(2) 溶解将干粉卩-环糊精和蜜二糖原料混合物放入盛有25 50mmol/L、 pH 5 7醋酸缓冲液的容器中，搅拌溶解，用量为P-环糊精0.1 0.2mol/L，蜜二 糖0.1 0.2mol/L，滴加a-半乳糖苷酶液到混合体系中。由于水溶性较差，混合体系中的(3-环糊精不能完全溶解，呈现过饱和状态。(3) 合成将容器置于恒温振荡器中，进行合成反应，反应温度20 3(TC， 反应时间36~72h，振荡速度150~200r/min。(4) 粗分合成反应结束后，将容器放入沸水中浸泡2 3min，使a-半乳 糖苷酶充分灭活。灭活后的混合液放入离心管中离心。离心速度2 000 3 000 r/min，离心时间2 3min。离心结束，取上清液。(5) 纯化用制备型高效液相色谱(HPLC)对离心得到的上清液进行分 离纯化。Prep C18 OBD (5jum， 19X 150mm)柱，蒸发光散射检测器(SEDEX75 FRANCE), Waters 1525 Binary HPLC泵，进样1 1.5mL，柱温20 25 °C，流 动相1% 3%的甲醇水溶液，流速2.0 3.0mL/min，分流比35:1 30:1 。对应特征 峰a收集样品溶液，得到a-半乳糖基-卩-环糊精。(6) 干燥将经过制备型高效液相色谱分离纯化得到的(x-半乳糖基-P-环糊 精溶液冷冻干燥，温度-40。C,真空度《12Pa，干燥时间24 48h，得到a-半乳糖 基-f3-环糊精粉末。本发明的有益效果以(3-环糊精和蜜二糖为原料，制备得到a-半乳糖基-P-环糊精。此分支环糊精具有较高的水溶性，而且，其半乳糖支链在动物组织中 具有特殊的识别受体。因此，具有广阔的应用前景。本发明制得的a-半乳糖基-卩-环糊精的转化率为25~30% (以转化的P-环糊精计算)，纯度为90 95%，有较高 的水溶性。本产品具有纯度高，水溶性好，性质稳定等特点。本发明采用的P-环糊精和蜜二糖容易获得，工艺中采用的溶解、合成、粗分、纯化、干燥等方 法皆为常规方法，简单实用，无污染排放，对环境友好。
图1:制备高效液相(HPLC)图谱。
具体实施方式
实施例1原料p-环糊精0.1mol/L(2g)，蜜二糖0.16mol/L(lg)， a-半乳糖苷酶25U。 加工工艺经溶解(30mmol/L醋酸缓冲液20mL， pH6， P-环糊精过饱和)、合 成(反应温度25'C，反应时间48h，振荡速度200r/min)、粗分(沸水浸泡2min， 离心速度2 500 r/min，离心时间2min)、纯化(进样1.5mL，柱温25 °C，流动 相1%的甲醇水溶液，流速2.0mL/min，分流比30:1)、干燥(温度-4(TC,真空 度《12Pa，干燥时间36h，)制得产品。制得a-半乳糖基-p-环糊精的转化率为25%， 纯度为95%。
权利要求
1. 一种α-半乳糖基-β-环糊精的酶法制备方法，其特征是以β-环糊精和蜜二糖为原料，通过α-半乳糖苷酶的逆向合成作用，经溶解、合成、粗分、纯化、干燥工序，制备得到α-半乳糖基-β-环糊精；工艺如下(1)原料以β-环糊精和蜜二糖为原料，β-环糊精和蜜二糖摩尔比为1∶1-2，α-半乳糖苷酶20～30U/g蜜二糖；(2)溶解将干粉β-环糊精和蜜二糖原料混合物放入盛有25～50mmol/L、pH 5～7醋酸缓冲液的容器中，搅拌溶解，用量为β-环糊精0.1～0.2mol/L，蜜二糖0.1～0.2mol/L，滴加α-半乳糖苷酶液到混合体系中；由于水溶性较差，混合体系中的β-环糊精不能完全溶解，呈现过饱和状态；(3)合成将容器置于恒温振荡器中，进行合成反应，反应温度20～30℃，反应时间36～72h，振荡速度150～200r/min；(4)粗分合成反应结束后，将容器放入沸水中浸泡2～3min，使α-半乳糖苷酶充分灭活，灭活后的混合液放入离心管中离心，离心速度2,000～3,000r/min，离心时间2～3min，离心结束，取上清液；(5)纯化用制备型高效液相色谱对离心得到的上清液进行分离纯化，PrepC18 OBD 5μm，19×150mm柱，蒸发光散射检测器SEDEX75 FRANCE，Waters 1525 Binary HPLC泵，进样1～1.5mL，柱温20～25℃，流动相1％～3％的甲醇水溶液，流速2.0～3.0mL/min，分流比35∶1～30∶1；对应特征峰a收集样品溶液，得到α-半乳糖基-β-环糊精溶液；(6)干燥将经过制备型高效液相色谱分离纯化得到的α-半乳糖基-β-环糊精溶液冷冻干燥，温度-40℃，真空度≤12Pa，干燥时间24～48h，得到α-半乳糖基-β-环糊精粉末。
全文摘要
一种α-半乳糖基-β-环糊精的酶法制备方法，涉及环糊精技术领域。本发明以β-环糊精和蜜二糖为原料，通过α-半乳糖苷酶的逆向合成作用，经溶解、合成、粗分、纯化、干燥等工序，制备得到α-半乳糖基-β-环糊精这种分支环糊精。所得α-半乳糖基-β-环糊精纯度高，水溶性好，性质稳定，具有广泛的应用研究价值。
文档编号C12P19/18GK101280332SQ20081010027
公开日2008年10月8日 申请日期2008年5月9日 优先权日2008年5月9日
发明者徐学明, 沈汪洋, 谢正军, 赵建伟, 金征宇 申请人:江南大学