专利名称：：脂肪酶测定用干式分析元件的制作方法
技术领域：
：本发明涉及用于测定液体试样尤其是人以及动物的血清、血浆中的脂肪酶活性，特别是胰脂肪酶活性的简便且精度高的干式分析元件。本发明的干式分析元件对于人或狗的胰腺疾病诊断尤其有用。
背景技术：
：就对于诊断胰腺疾病有用的胰脂肪酶分析而言，由于胰脂肪酶在油水界面发挥作用，所以大多是以基质在水中分散成胶束状的状态进行测定的。这是因为，被表面活性剂等增溶的基质或烷基链长比较短的脂肪酸的甘油酯中，会有脂蛋白脂肪酶等非胰脂肪酶或酯酶发生反应。因此，在开发胰脂肪酶干式分析元件时，重要的技术点在于，将对胰脂肪酶具有特异性的长链脂肪酸的甘油酯基质，以胰脂肪酶特异性状态予以掺入。对脂肪酶进行分析的干式分析元件大致分为两种，第一种元件中使用以甘油三酯为基质经过甘油、过氧化氢变换成色素的方法，最初公开的方法是使用在a位的一个酯位具有碳数为8以上的长链垸基而其他两个酯具有短链烷基的甘油三酯作为基质，利用称之为乙酰化酶(7七于于一1f)的酯酶将通过试样中的脂肪酶生成的水溶性1，2—二乙酰基甘油酯变换成甘油，之后将甘油变换成色素的多层干式分析元件(特开昭59—48098号公报)。该方法是精度高且简便的脂肪酶测定方法，但有报告认为相对于胰脂肪酶的选择性不高，在胰腺疾病的诊断方面需要注意(Clin.Chem，37/3，447—451(1991))。另外，将甘油三油酸酯之类的具有碳数1420的长链脂肪酸的甘油三酯用作基质，并且含有甘油一酯脂肪酶、甘油测定试剂的干式化学用胰脂肪酶分析试剂公开于特开平4一316500号公报，进而使用该方法来制作精度高的多层分析元件，进而掺入微粒而期待提高脂肪酶的反应性的方法记载于特开2002—125699号公报中。这些使用甘油三油酸酯的方法，虽然相对于胰脂肪酶的特异性高，但由于掺入脂溶性高的基质，需使用阿拉伯树脂等保护胶体，并进行基于超声波处理的水系乳化分散(特开平4一316500号公报的实施例)，要求保持基质分散的再现性或粒度分布的均匀性，认为在制造上比较困难。例如，特开平4—316500号公报公开了如下所示的内容。"甘油三油酸酯之类的三个酯位全部具有长链脂肪酸的甘油三酯，具有难以乳化的性质，所以在制作干燥试剂时，即便将甘油三油酸酯作为在表面活性剂或保护胶体的存在下通过搅拌、超声波等物理剪切力而均匀乳化分散的溶液添加，当成为干燥状态时由于作为分散介质的水消失，乳化物会发生絮凝、聚结而附着在展开层表面，油水界面的表面积将减少很多。在测定时，即便将含有脂肪酶的试样(液体)作用于该干燥试剂，由于没有物理剪切力，所以甘油三油酸酯会保持絮凝、聚结的状态，不能返回至原来的分散状态。由于脂肪酶以油水界面为反应场所，所以认为油水界面的表面积的减少将成为使反应速度降低的原因。第二种是使用作为色素释放基质的1，2—0—二月桂基一mc—甘油一3—戊二酸'试卤灵酯的干式分析元件(特开平9一154598号公报)。该方法中胰脂肪酶特异性高且不需要甘油发色体系，所以是优选的方法。但是，由于掺入到干式分析元件中的基质极容易分解，因此尽管作过对低pH的脂肪酶基质含有层和高pH的其他试剂层进行分离的尝试，但仍未进入实用化阶段。另外，在这里，被认定为适于溶解基质的优选溶剂的醚系溶剂，其环境负荷大，在设计上要求考虑环境因素的今天，制造适宜性方面存在严重的问题。另外，该基质价格比较高，在实用化方面也存在问题。如上所述，迄今为止，作为已被商品化的脂肪酶分析用干式分析元件，仅有胰脂肪酶特异性不高的记载于特开昭59—4809S号公报中的产品，从市场的角度来看，在胰腺疾病诊断方面要求具有更高可靠性的干式分析元件。非专利文献l:Clin.Chem"37/3,447—451(1991)专利文献l:特开昭59_48098号公报专利文献2:特开平4一316500号公报专利文献3:特开2002—125699号公报专利文献4:特开平9一154598号公报
发明内容本发明的目的在于，提供在对胰脂肪酶的选择性高的胰脂肪酶分析干式分析元件中多试样相关性得到提高的胰脂肪酶分析干式分析元件。本发明人等为了解决上述课题，进行了潜心研究，结果发现，在含有作为基质的长链脂肪酸的甘油酯(优选甘油三酯)、甘油一酯脂肪酶、以及甘油测定试剂的干式分析元件中，通过含有2种以上的阴离子表面活性剂，可以提供多试样相关性得到提高的胰脂肪酶分析干式分析元件，从而完成了本发明。艮口，通过本发明，提供一种体液中的胰脂肪酶测定用干式分析元件，该元件包含至少一个以上的展开层和/或试剂层，该展开层和/或试剂层含有碳数1222的长链烷基脂肪酸的甘油二酯或甘油三酯、甘油一酯脂肪酶、以及甘油测定试剂，其特征在于，上述展开层和/或试剂层含有2种以上的阴离子表面活性剂，且其中的至少一种是垸基芳基磺酸盐。优选烷基芳基磺酸盐是垸基苯磺酸盐。优选烷基苯磺酸盐是垸基的链长为碳数1014的烷基苯磺酸盐。优选烷基苯磺酸盐是直链十二烷基苯磺酸钠盐。优选垸基芳基磺酸盐的添加量为0.110g/m2。优选甘油三酯为甘油三油酸酯。优选甘油一酯脂肪酶是基本上不作用于甘油二酯以及甘油三酯的甘油一酯脂肪酶，进而优选的是源自嗜热脂肪芽孢杆菌H—165(BacillusstearothermophilusH-165)的甘油一酯脂肪酶。优选甘油测定试剂是包括甘油激酶、磷酸甘油氧化酶和发色试剂。优选千式分析元件是由水不透过性支撑体、试剂层以及展开层构成。优选展开层是由布或多孔质膜构成。优选多孔质膜是由聚乙烯基砜或者乙酰纤维素构成的多孔质膜、或者由微小珠(bead)形成的多孔质膜。加量为8000U/m21000U/m2。优选本发明的干式分析元件是利用包括如下工序的方法制造的，所述工序中，将溶解于低级醇或丙酮的甘油二酯或甘油三酯添加到展开层或试剂层，并进行干燥。优选甘油二酯或甘油三酯的干燥方法是热风干燥。优选甘油二酯或甘油三酯溶解于甲醇、乙醇、丙醇或丙酮。另一方面，本发明还提供了将体液适用于上述的本发明的干式分析元件中而对该体液中的胰脂肪酶进行测定的方法。优选体液为狗的血液。尽管通过制作以甘油三油酸酯为基质的胰脂肪酶测定用千式分析元件可以进行胰脂肪酶特异性分析，但多试样相关性的相关系数并未提高。究其原因，发现是因为对于不同的试样，共脂肪酶有时不能充分活化胰脂肪酶。在本发明中，通过添加直链十二烷基苯磺酸钠等阴离子表面活性剂，可以在不增加高价的共脂肪酶的添加量的情况下，活化试样中的胰脂肪酶。其结果，在使用了本发明的胰脂肪酶测定用干式分析元件的分析中，多试样相关性的相关系数大大增加。图1表示使用了实施例1的干式分析元件的分析结果。图2表示使用了比较例1的干式分析元件的分析结果。图3表示对于在多试样相关性中给予正误差以及负误差的2个试样(A、B)，使用在实施例3中制作的胰脂肪酶千式分析元件进行测定，然后对它们的反应时程进行比较的结果。具体实施方式本发明的体液中的胰脂肪酶测定用干式分析元件中，具有含有碳数1222的长链烷基脂肪酸的甘油二酯或甘油三酯、甘油一酯脂肪酶、以及甘油测定试剂的至少一个以上的展开层和/或试剂层，其特征在于，上述展开层和/或试剂层含有2种以上的阴离子表面活性剂，且其中的至少一种是烷基芳基磺酸盐。在使用了干式分析元件的分析中，由于是在不稀释的试样的情况下进行分析，所以容易受到试样中含有的各种成分的影响。本发明人等首次发现在使用稀释试样的分析法中不成为问题的脂肪酶活化的试样间差异，会在使用干式分析元件的分析中出现。通过本发明可知，若要解决与该脂肪酶活化的试样间差异有关的问题，十二烷基苯磺酸钠等垸基苯磺酸盐的添加是有用的。即，在使用了以往的干式分析元件的分析中，由于部分试样的脂肪酶反应不良，所以多试样相关性不良。为了解决该问题，在本发明中，通过将十二烷基苯磺酸钠等烷基苯磺酸盐添加到干式分析元件中，成功地显著提高了相关系数。该效果的出现是因为在相关性问题中导致负误差的试样的脂肪酶活性得到了恢复。本发明的干式分析元件，含有2种以上的阴离子表面活性剂，且其中的至少一种是烷基芳基磺酸盐。在本发明中使用的阴离子表面活性剂，例如可以举出亲水基具有羧基、磺酸基、硫酸酯基、磷酸盐等的表面活性剂。可以在本发明中使用的优选的具有磺酸基的阴离子表面活性剂，是烷基苯磺酸盐、烷基萘磺酸盐、烷基硫酸盐、聚氧乙烯垸基醚硫酸液、a—烯烃磺酸盐、N—酰基甲基氨基乙磺酸盐。优选疏水基的碳数为1220左右。其中，优选不抑制脂肪酶活性且不使添加到干式分析元件中的酶失活的物质。其中，优选烷基苯磺酸盐，进一步优选烷基链的碳数为1014。进一步优选的是成为洗涤剂的主要成分的碳数为12的直链十二烷基苯磺酸盐。盐优选为钠盐，但还可以使用钾盐、锂盐。可以在添加烷基苯磺酸之后，在干式分析元件中形成盐。具有羧基的阴离子表面活性剂，优选为具有脂肪酶活化作用的胆汁酸盐，优选脱氧胆酸盐、胆酸盐、牛磺胆酸盐、牛黄脱氧胆酸盐、脱氧牛磺胆酸盐，特别优选脱氧胆酸钠、牛黄脱氧胆酸钠。本发明的阴离子表面活性剂的最佳组合是脱氧胆酸钠、牛黄脱氧胆酸钠和直链十二烷基苯磺酸盐。本发明的烷基芳基磺酸盐的添加量，只要可以实现本发明的效果就没有特别限定，但优选0.110g/m2，更优选0.25g/m2，进一步优选0.55g/m2。本发明中使用的甘油酯，是由长链垸基链的脂肪酸形成的甘油二酯或甘油三酯。长链烷基链可以是饱和的，也可以是不饱和的。长链垸基链的脂肪酸的垸基链长，从对胰脂肪酶的选择性出发，其碳数可为12以上22以下，优选碳数16以上20以下。以下示出例子。饱和脂肪酸的例子可以举出月桂酸(C12:())、肉豆蔻酸(C14:o)、棕榈酸(C16:0)、硬脂酸(C18;0)、花生酸(C2o:o)、山嵛酸(C22:o)。不饱和脂肪酸的例子可以举出棕榈烯酸(C16:1)、岩芹酸(CH23COOH)、油酸(c18:。、亚油酸(c18:》、亚麻酸(c18:2)、桐酸(工k7亍71;y酸)(C18:3)、花生四烯酸(C2():4)等。优选油酸、亚油酸的甘油酯、特别优选的甘油酯是作为油酸的甘油三酯的甘油三油酸酯。另外，在本发明中，使用实质上不与甘油二酯发生反应的甘油一酯脂肪酶以及现有的可靠性高的甘油发色试剂。就层结构而言，具有至少一个以上的展开层或试剂层即可，还可以是一层的试纸。为了进一步提高测定精度和强度，优选使用由支撑体和至少一层以上的试剂层构成的多层分析元件。就基质而言，可以将甘油三油酸酯等甘油酯溶解于乙醇等有机溶剂中并掺入干燥分析用，优选利用热风干燥使其干燥。作为构成本发明的脂肪酶测定用干式分析元件的支撑体层的构件，可以使用具有光透过性和水不透过性的支撑体。作为光透过性'水不透过性支撑体的例子，可以举出由聚对苯二甲酸乙二醇酯、双酚A的聚碳酸酯、聚苯乙烯、纤维素酯(例如二乙酸纤维素、三乙酸纤维素、乙酸丙酸纤维素等)等聚合物形成的厚度为约50um约lmm、优选约80um约300Pm的范围的膜或片状的透明支撑体。可以根据需要在支撑体的表面设置底涂层，使设置在支撑体上的反应层与支撑体的粘接牢固。另外，还可以对支撑体的表面实施物理或化学的活化处理以提高粘接力，来代替底涂层。在支撑体上(有时隔着底涂层等其它层)设置反应层。反应层是后述的试剂组合物的至少一部分基本均匀地分散在亲水性聚合物粘合剂中的层，具有吸水性和水渗透性，所述试剂组合物可与作为分析物的脂肪酶发生反应并产生能通过光学性手段检测出的变化。可以用作反应层的粘合剂的亲水性聚合物，通常是吸收水时的溶胀率在30。C下为约150%约2000%、优选为约250%约1500%的范围的天然或合成亲水性聚合物。作为这样的亲水性聚合物的例子，可以举出在特开昭58—171864号公报以及特开昭60—108753号公报中公开的明胶(例如酸处理明胶、脱离子明胶等)、明胶衍生物(例如邻苯二甲酸化明胶、羟基丙烯酸酯接枝明胶等)、琼脂糖、支链淀粉、支链淀粉衍生物、聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯垸酮等。反应层可以是使用交联剂适当交联固化的层。作为交联剂的例子，有对于明胶的1，2—双(乙烯基磺酰基乙酰胺)乙烷、双(乙烯基磺酰基甲基)醚等公知的乙烯基砜系交联剂、醛等、对于甲代烯丙醇共聚物的醛、含有2个縮水甘油基的环氧化合物等。反应层在干燥时的厚度优选为约lum约lOOlim的范围，更优选为约3iim约30um的范围。另外，优选试剂层实质上透明。在本发明中多孔性展开层优选使用布制的展开层，但还可以使用由聚乙烯基砜、乙酰纤维素形成的多孔质膜或者由微珠形成的多孔质膜、玻璃纤维滤纸、滤纸等布以外的材质。作为该布制的多孔性展开层，有特开昭55—164356号公报、特开昭57—66359号公报等中记载的纺织布匹展开层(例如宽幅布、破普林等平纹纺织布匹等)，特开昭60—222769号公报等中记载的针织布匹展开层(例如经编针织布匹、双面经编针织布匹、米兰尼经编针织布匹等)，特开平l一172753号公报中记载的用碱性蚀刻液实施了蚀刻处理的纺织布匹或针织布匹构成的展开层等。优选的是针织布匹，特别优选经编针织布匹。作为布的材质，可以使用聚酯、棉、尼龙、丝绸、维尼纶、人造丝、聚酰胺、压克力、羊毛、聚丙烯、麻等，优选的是聚酯。展开层的厚度以50400um左右为合适，优选为200300ym左右。布的孔隙率为2090%左右，优选为4085%左右。在多孔性展开层中使用的纺织布匹、针织布匹，可以通过对布坯的至少一面实施特开昭57—66359中记载的辉光放电处理或以电晕放电处理为代表的物理活化处理、或者实施特开昭55—164356、特开昭57—66359等中记载的水洗脱脂处理、表面活性剂浸渗或亲水性聚合物浸渗等亲水化处理、或者适当组合这些处理工序逐次实施，由此将布匹亲水化，可以增大与下侧(接近支撑体的一侧)的层的粘接力。在使用多孔性层作为展开反应层的情况下，该多孔性介质可以是纤维质，可以是非纤维质。作为纤维质材料，例如可以使用滤纸、无纺布、纺织布匹(例如平纹纺织布匹)、针织布匹(例如经编针织布匹)、玻璃纤维滤纸等。作为非纤维质材料，可以是特开昭49一53888等中记载的由乙酸纤维素等形成的膜滤器，特开昭49—53888、特开昭55—90859(对应美国专利4258001)、特开昭58—70163(对应美国专利4486537)等中记载的由无机物或有机物微粒形成的含有连续空隙的粒状构造物层等中的任意一种。特开昭61—4959(对应欧洲专利公开EP0166365A)、特开昭62—116258、特开昭62—138756(对应欧洲专利公开EP0226465A)、特开昭62—138757(对应欧洲专利公开EP0226465A)、特开昭62—138758(对应欧洲专利公开EP0226465A)等中记载的部分粘接的多个多孔性层的层叠物也是比较合适的。若要向展开层中添加试剂，可以在形成展开层之后，利用涂布等手段添加反应试剂，另外，在例如由纸、布、高分子形成的多孔质膜等上预先浸渗或涂布本发明的试剂之后，利用特开昭55—164356号的方法使其粘接在设置于支撑体上的其他水渗透性层上，也是有用的方法。多孔性层可以是在与所供给的液体的量大致成比例的面积上展开液体的所谓具有计量作用的展开层。对于该功能的控制，表面活性剂和亲水性粘合剂的使用是有用的。还可以在本发明的干式分析元件上设置上述以外的层。例如，有遮光层、吸水层、粘接层等。在本发明中使用的测定反应系统中，利用甘油一酯脂肪酶，将在作为测定对象的脂肪酶的作用下作为基质的甘油二酯或甘油三酯发生分解而生成的甘油一酯分解。利用甘油激酶使该甘油成为L一a—磷酸甘油，在L一a—磷酸甘油氧化酶的作用下，将L一ci一磷酸甘油转换成二羟基丙酮磷酸，同时生成过氧化氢，利用该过氧化氢，在过氧化物酶的作用下使发色色素发色。向掺入到本发明的干式分析元件中的试剂体系添加甘油一酯脂肪酶。甘油一酯脂肪酶优选实质上不与甘油三酯以及甘油二酯发生反应而与长链脂肪酸的甘油一酯发生反应的物质。特别优选的是在特开昭63—245672、特开平4一316500号公报中记载的源自嗜热脂肪芽孢杆菌H—165的甘油一酯脂肪酶。甘油激酶使甘油与ATP发生反应转变成L一a—磷酸甘油(L一甘油一3—磷酸)和ADP，以Mg"、Mn2+等为辅酶。L一a—磷酸甘油氧化酶(L一甘油—3—磷酸氧化酶)对L一磷酸甘油进行氧化使其变成二羟基丙酮磷酸并生成过氧化氢。利用该过氧化氢在过氧化物酶的作用下发色的发色体系作为干式分析元件用体系被研发出很多种，可以从其中适当选择使用。大多数为无色色素，具有代表性的是o—甲苯胺。为了提高作为本发明的主要测定对象的血液中含有的胰脂肪酶的反应性能，优选在掺入到本发明的干式分析元件的试剂体系中添加共脂肪酶。共脂肪酶优选源自猪胰腺的共脂肪酶。另外，为了提高胰脂肪酶的活性，降低胰脂肪酶以外的脂肪酶活性，作为活化剂添加脱氧胆酸或牛磺胆酸，由此可排出酯酶、肝脂肪酶、脂蛋白脂肪酶的影响，能够以高特异性测定胰脂肪酶。作为上述各试剂的含量，甘油三酯为0.115g/n^左右，优选0.510g/n^左右；甘油激酶为0.5100KU/m2左右，优选110KU/n^左右；L—a—磷酸甘油氧化酶为2200KU/n^左右，优选550KU/n^左右；过氧化物酶为1200KU/n^左右，优选550KU/n^左右；甘油一酯脂肪酶为2100KU/n^左右，优选330KU/n^左右；发色色素为0.052.00g/m2左右，优选0.11.00g/m2左右;共脂肪酶为0.0100.400g/m2(5200KU/m2左右)左右；脱氧胆酸为0.110g/m"左右。在这里，甘油一酯脂肪酶优选为8000U/m21000U/m2，进一步优选为6000U/m22000U/m2，最佳为4300U/m22000U/m2。尽管甘油一酯脂肪酶为共轭酶，但不优选添加过剩量。这是因为如果将甘油二酯用于基质，则背景(background)有时会升高。另夕卜，在将甘油三酯用作基质的情况下，随着甘油一酯脂肪酶量的增加，血液中的部分脂蛋白会发生反应，有时会产生测定误差。该试剂组合物可以全部含于反应层或展开层中，另外还可以分在两层含有，还可以在其它层中含有一部分。还可以向本发明的干式分析元件中添加其他试剂。在这样的试剂中有缓冲剂、表面活性剂等。作为可以在本发明的干式分析元件中含有的缓冲剂的例子，可以举出碳酸盐、硼酸盐、磷酸盐、Tris盐或Good缓冲剂等公知的缓冲剂。这些缓冲剂可以参考《蛋白质，酶的基础实验法》(梶尾武一等、南江堂，1981)等公知文献选择使用。含量可以与通常在一体型多层分析元件中使用的量同等程度，为约100mg/n^约5.0g/r^的范围，优选为约500mg/n^约3.0g/m2的范围。在本发明的分析元件的展开层或反应层中还可以含有上述阴离子表面活性剂以外的表面活性剂，例如非离子型表面活性剂。可以使用组合了烷基、烷基苯基、苯乙烯化苯基、苄基苯基、山梨糖醇酐烷基等亲油基及聚氧乙烯基、聚甘油基、聚氧乙烯聚丙烯聚合物等亲水基的表面活性剂，可以举出聚氧乙烯烷基醚、含聚氧乙烯支链烷基醚、聚氧化烯垸基醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、烷基苯基聚甘油酯等。具体而言，有聚氧乙烯十三垸基醚、聚氧乙烯支链癸基醚、聚氧乙烯p—辛基苯酚基(7二/二》)醚、聚氧乙烯p—辛基苯基醚、聚氧乙烯p—壬基苯基醚、聚氧乙烯油烯基醚、聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酯、p—壬基苯氧基聚縮水甘油、辛基糖苷等。在这些非离子型表面活性剂中，优选聚氧乙烯十三垸基醚、含聚氧乙烯支链癸基醚、p—辛基苯氧基聚乙氧基乙醇、p—壬基苯氧基聚乙氧基乙醇、p—壬基苯氧基聚縮水甘油等。通过在展开层中含有非离子型表面活性剂，使水性液体试料的展开作用(计量作用)变得更好。通过在反应层中含有非离子型表面活性剂，在分析操作时水性液体试料中的水容易被反应层实质上均匀吸收，另外，与展开层的液体接触变得迅速且实质上保持均匀。另外，还可以在展开层中含有亲水性聚合物。该亲水性聚合物可以举出淀粉、纤维以及纤维素衍生物(甲基化纤维素、羟乙基化纤维素、羟丙基化纤维素等)、琼脂糖、明胶(例如酸处理明胶、脱离子明胶等)、明胶衍生物(例如苯二甲酸化明胶、羟基丙烯酸酯接枝明胶等)、丙烯酰胺共聚物、丙烯酰胺和各种乙烯基性单体的共聚物、乙烯基吡咯垸酮聚合物、乙烯基吡咯垸酮和各种乙烯基性单体的共聚物、丙烯酸酯聚合物以及丙烯酸酯与各种乙烯基性单体的共聚物等。在上述亲水性聚合物中，优选乙烯基吡咯垸酮衍生物和纤维素衍生物。下面记述本发明的干式分析元件的优选制造方法。向支撑体中添加明胶等粘合剂和表面活性剂，涂布已提高制膜性的作为水溶液的涂布液并将其干燥，由此制作试剂层。关于展开层，例如在使用布或已形成的多孔质膜作为展开层膜的情况下，使水附着在试剂层上将其一部分增溶，然后根据需要加热使粘合剂进一步软化，在展开层膜和支撑体上的试剂层上进行压接并干燥。一直以来，作为将甘油三油酸酯添加到脂肪酶分析液或干式分析器械中的方法而使用的向水中的分散法，可以说是被表面活性剂或保护胶体所稳定化的，但添加试剂的时间、搅拌效率、液温的变动等会导致甘油酯粒径不稳定，同一批内、批次间的偏差大，难以制造高精度的脂肪酶干式分析器械。进而，该分散或乳化需要高度且高价的分散装置。另外，只要分散粒径不减小，就会发生粒子的沉淀。该沉淀在制造均匀的分析器械时会成为问题。将甘油三酯或甘油二酯制成表面活性剂的水溶液而增溶后添加到干式分析器械中的方法，不仅使胰脂肪酶对这些基质的反应性提高，还使非胰脂肪酶或酯酶对这些基质的反应性提高，另外，表面活性剂会使共轭酶失活，所以不优选。因此，将甘油三油酸酯等甘油酯(脂肪酶基质)溶解于低级醇或丙酮中，并为了改善涂布性，必要时添加聚乙烯基吡咯垸酮等粘合剂来调节粘度。作为低级醇或丙酮，优选碳数为16的低级醇系溶剂或丙酮，特别优选甲醇、乙醇、丙醇、丙酮，特别优选乙醇。四氢呋喃、二嚼、烷等醚系溶剂的使用是不优选的。其理由之一在于，使涂布性提高且添加到干式分析元件中后对血液试样的溶解有用的聚乙烯基吡咯烷酮等水溶性聚合物的溶解性不好。氯仿、二氯甲垸对甘油酯的溶解性良好，所以有用，但近年来，由于致癌性等环境毒性成为问题，所以在使用时需要注意。关于上述甘油酯与溶剂的量比，例如在将甘油三油酸酯溶解于乙醇的情况下，相对于lg甘油三油酸酯，优选乙醇50300g。更优选相对于lg甘油三油酸酯，乙醇为100200g。如果甘油三油酸酯浓度高，则不溶于乙醇，所以难以均匀添加甘油三油酸酯。关于甘油酯的溶剂液的添加方法，可以使用涂布或浸渗。在这些添加方法中，利用涂布机(斧一f"一)涂布并干燥的工序可以形成均匀且高效的生产方法。在该工序中，干燥优选为热风干燥。干燥风优选206(TC，特别优选2540。C。露点优选为0°C10°C。风量优选0.510m/秒。干燥时间可以是溶剂实质上干燥的时间，另一方面，在长时间的干燥中，会有共轭酶失活的情况，所以优选1分钟60分钟。也可以使用多个干燥区域，在各区域控制干燥风的温度、露点、风速、风向、时间，设定良好的干燥条件。CaCl2可以添加到任意涂布液中，但有时会与脱氧胆酸发生反应，形成凝集物，另外还溶解于乙醇，所以优选溶解于基质液中而添加。不溶于有机溶剂的反应试剂另外制成水溶液利用涂布来添加。为了提高涂布适合性、血液的展开性，可以添加粘合剂和表面活性剂。还可以将pH缓冲剂、作为脂肪酶反应加速剂的共脂肪酶、脱氧胆酸添加到该液体中。同样通过涂布和干燥向展开层中添加试剂。关于反应试剂，当在试样中的脂肪酶发生反应时，能够通过溶解、扩散设定适于反应的试剂环境即可，所以各试剂在制造中基本上可以添加到任何层中。关于试剂的添加方法，如果能够设定均匀的试剂量，可以浸渗，另外还可以使用喷射。就各层的制作顺序而言，只要是均匀且试剂未分解的方法即可使用。根据情况还可以不使用支撑体，使用玻璃纤维滤纸或滤纸之类的多孔质膜，利用上述的制造方法制作。此时也优选将基质溶解于有机溶剂中形成的液体通过热风干燥进行干燥。本发明的一体型分析元件，从制造、包装、运送、保存以及测定操作等所有方面出发，优选裁成边长约10mm约30mm的正方形或尺寸与此大致相等的圆形等的小片，收纳于特开昭57—63452号、特开昭54—156079号、实开昭56—142454号、实开昭58—32350号以及特开昭58一501144号公报等中公开的滑板框等内作为分析滑板(slide)使用。本发明的一体型分析元件如下所述地进行分析，即，按照在上述诸公报中公开的方法，将约5ul约30lU、优选约8ul约15ul的水性液体试料点到多孔性展开层中进行供给，根据需要在约2(TC约45'C的范围的基本恒定的温度下干燥y夕《一、乂3y)之后，从光透过性支撑体侧对一体型多层分析元件内的颜色变化、发色等可以检测出的变化迸行反射测光，并基于比色法的原理对液体试料中的测定对象成分进行分析。利用以下的实施例具体说明本发明，但本发明并不限于实施例。实施例实施例1:含有直链十二烷基苯磺酸钠的胰脂肪酶分析滑板的制作(1)甘油发色试剂的添加在已完成明胶底涂的厚度为180um的聚对苯二甲酸乙二醇酯无色透明平滑膜上涂布下述组成的试剂并进行干燥，然后均匀地供给水使其湿润，在其上面，对将相当于50旦尼尔的聚对苯二甲酸乙二醇酯纺织丝进行36针距编织得到的经编针织布匹轻轻施加压力而进行层叠，在干燥温度2(TC下使明胶凝固，然后在45"C下将其干燥。其中，作为含有pH缓冲剂PIPES的涂布液，使用了用1N—NaOH溶液将pH值调节至6的液体。明胶12g/m2PIPES(同仁化学)22g/m2氯化镁(和光纯药工业)0.52g/m2ATP—2钠盐(奥利恩特(才!i工:/夕/W酵母)1.4g/m2聚氧乙烯十三烷基醚HLB14.8(第一工业制药)0.55g/m2聚乙烯垸基支链癸基醚HLB15.9(第一工业制药)0.059g/m2无色素0.21g/m2辣根过氧化物酶(东洋纺)14KU/m2甘油激酶(旭化成)3.8KU/m2L一a—甘油磷酸氧化酶(旭化成)19KU/m21，2—双(乙烯基磺酰基乙酰胺)乙烷3.3g/m2(2)基质的添加在上述的布匹上，将下述组成的试剂溶解于乙醇中并涂布，以干燥温度32"C、露点0'C的风进行热风干燥。氯化钙(和光纯药)0.18g/m2聚乙烯基吡咯垸酮K902.0g/m2甘油三油酸酯(98%，ICN—生化(Biochemical))1.1g/m2(3)脂肪酶反应助剂的添加进而，将下述试剂溶解于水中，涂布、干燥，制作胰脂肪酶干式分析元件。其中，作为含有pH缓冲剂HEPES的涂布液，使用了用1N—NaOH水溶解将pH调节至8.0的液体。HEPES(同仁化学)6.1g/m2直链十二垸基苯磺酸钠(和光纯药)0.67g/m2脱氧胆酸钠(和光纯药)4.6g/m2牛黄脱氧胆酸钠1.5g/m2玫特罗司(乂卜口一只)2.1g/m2甘油一酯脂肪酶(旭化成)4300U/m2猪共脂肪酶(罗氏)0.05g/m2抗坏血酸氧化酶(东洋纺)8500U/m2比较例1:在实施例1中，除了不含有直链十二垸基苯磺酸钠之外，采用相同的方法制作胰脂肪酶分析滑板。测定1:使用46个狗血浆试样，将各10u1点到在实施例1以及比较例1中制作的胰脂肪酶分析滑板上，加热至37"C，研究5分钟的650nm的反射浓度的变化。使用市售的富士德来凯(drykem)7000。关于向脂肪酶活性的变换，如同一直以来利用富士德来凯(drykem)系统所进行，将反射浓度变换成基质反应量(甘油浓度)，进行色素褪色校正后计算出每分钟各试样的脂肪酶活性。就基准法而言，分析器使用日立7180，试剂使用基于罗氏公司RGGR法的脂肪酶分析试剂盒。多试样相关性数据示于图1和图2。相对于比较例的相关系数R=0.930，实施例1中提高至R二0.980。使用图1以及图2中的试样A、B，进行实施例3的分析。实施例2:十二垸基苯磺酸钠和共脂肪酶量的影响以与实施例1相同的制法，制作已更改十二垸基苯磺酸钠和共脂肪酶量的分析元件，研究46个狗试样的多试样相关性。结果示于表l。添加有十二烷基苯磺酸钠的脂肪酶分析滑板，与未添加十二烷基苯磺酸钠的类型相比，当在表l记载的范围内使用这些试剂量时，再次确认到相关系数非常优异。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>(与比较例l相同)实施例3:通过添加十二垸基苯磺酸钠的胰脂肪酶反应时程的测定以与实施例1和2相同的制法，制作已改变十二垸基苯磺酸钠(在图3和图4中省略为SDBS)的添加量的胰脂肪酶测定用干式分析元件。表2的3—1为比较例2。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>测定在比较例1的多试样相关性中，选择给予正误差和负误差的两个试样(A、B)，使用在实施例3中制作的胰脂肪酶干式分析元件进行测定，比较它们的反应时程。试样A、B使用了与在上述实施例1以及比较例1的各多试样相关性数据中记载的相同的试样。结果将结果示于图3(左图表示试样A，右图表示试样B)。在比较例1的多试样相关性中，发现给予负误差的试样B中因添加十二垸基苯磺酸钠而脂肪酶的反应性得以提高。另一方面，给予若干正误差的试样A,即便添加十二垸基苯磺酸钠，反应性的变化也少。由这些结果可以确认，关于十二烷基苯磺酸钠的添加，是通过仅提高反应性差的试样的活性来改进多试样相关性的。权利要求1.一种体液中的胰脂肪酶测定用干式分析元件，其具有至少一个以上的展开层和/或试剂层，该展开层和/或试剂层含有碳数12～22的长链烷基脂肪酸的甘油二酯或甘油三酯、甘油一酯脂肪酶、以及甘油测定试剂，其特征在于，所述展开层和/或试剂层含有2种以上的阴离子表面活性剂，且其中的至少一种是烷基芳基磺酸盐。2.如权利要求1所述的干式分析元件，其中，烷基芳基磺酸盐是垸基苯磺酸盐。3.如权利要求2所述的干式分析元件，其中，垸基苯磺酸盐是垸基的链长为碳数1014的烷基苯磺酸盐。4.如权利要求3所述的干式分析元件，其中，烷基苯磺酸盐是直链十二烷基苯磺酸钠盐。5.如权利要求14中任意一项所述的干式分析元件，其中，烷基芳基磺酸盐的添加量为0.110g/m2。6.如权利要求15中任意一项所述的干式分析元件，其中，甘油三酯为甘油三油酸酯。7.如权利要求16中任意一项所述的干式分析元件，其中，甘油一酯脂肪酶是源自嗜热脂肪芽孢杆菌H—165的甘油一酯脂肪酶。8.如权利要求17中任意一项所述的干式分析元件，其中，甘油测定试剂包括甘油激酶、磷酸甘油氧化酶和发色试剂。9.如权利要求18中任意一项所述的干式分析元件，其中，干式分析元件由水不透过性支撑体、试剂层以及展开层构成。10.如权利要求19中任意一项所述的干式分析元件，其中，展开层由布或多孔质膜构成。11.如权利要求110中任意一项所述的干式分析元件，其中，多孔质膜是由聚乙烯基砜或者乙酰纤维素构成的多孔质膜、或者由微小珠形成的多孔质膜。12.如权利要求111中任意一项所述的干式分析元件，其中，8000U/m21000U/m2。13.如权利要求112中任意一项所述的干式分析元件，其中，该干式分析元件是利用包括如下工序的方法制造的，所述工序中，将溶解于低级醇或丙酮的甘油二酯或甘油三酯添加到展开层或试剂层并进行干燥。14.如权利要求13所述的干式分析元件，其中，甘油二酯或甘油三酯的干燥方法是热风干燥。15.如权利要求13或者14所述的干式分析元件，其中，甘油二酯或甘油三酯溶解于甲醇、乙醇、丙醇或丙酮中。16.—种测定体液中的胰脂肪酶的方法，其中将体液适用于权利要求115中任意一项所述的干式分析元件。17.如权利要求16所述的测定体液中的胰脂肪酶的方法，其中，体液为狗的血液。全文摘要本发明提供一种提高了多试样相关性的对胰脂肪酶的选择性高的胰脂肪酶测定用干式分析元件。本发明的体液中的胰脂肪酶测定用干式分析元件，具有至少一个以上的展开层和/或试剂层，该展开层和/或试剂层含有碳数12～22的长链烷基脂肪酸的甘油二酯或甘油三酯、甘油一酯脂肪酶、以及甘油测定试剂，所述展开层和/或试剂层含有2种以上的阴离子表面活性剂，且其中的至少一种是烷基芳基磺酸盐。文档编号C12Q1/44GK101324573SQ20081010946公开日2008年12月17日申请日期2008年6月12日优先权日2007年6月12日发明者景山茂树,田中秀明申请人:富士胶片株式会社