蛋白质水解产物组合物的制作方法

专利名称：蛋白质水解产物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及包括β -伴球蛋白(β -conglycinin)疏水性核心区域的蛋白质水解产物组合物(所述组合物具有较高的白度指数和独特的粘弹特性，包括在较低温度下变稠)、制备所述蛋白质水解产物组合物的方法、以及包含所述蛋白质水解产物组合物的食
P
ΡΠ O
背景技术：
世界范围内增加的蛋白消费连同动物蛋白和乳品蛋白的有限可用性和提高的费用一起，已经导致对植物蛋白如大豆蛋白的兴趣增长。虽然大豆是一种优异的蛋白质来源，其颜色趋于灰色使其不适用于一些食品。大豆蛋白的灰色或浅米色常对大豆蛋白在多种产品中的使用造成挑战，所述产品如饮料、全肌产品、和干酪。消费者并不总是喜欢灰色或浅米色。因此所需的是具有提高白度的大豆蛋白产物。此外，大豆蛋白通常需要高热和高固体含量以凝结；因此制备特性类似于乳品基干酪的大豆干酪一直是困难的。仅需施加很少的热就能凝结的大豆蛋白将是有益的。发明概述本发明的多个方面中的其中一个是提供包含富集伴球蛋白的疏水性核心区域(47kDa片段)的蛋白质水解产物组合物。所述蛋白质水解产物组合物包含富集47千道尔顿(kDa)片段的多肽的混合物，其中按重量计至少约10%至约66%的多肽是47kDa片段。本发明还公开了包含富集的疏水性β-伴球蛋白核心区域的蛋白级份。β-伴球蛋白及其衍生肽已知用于降低哺乳动物体内的胆固醇(Adams等人，2004，Lovati等人， 2000，Cho 等人，2008)。本发明的另一方面涵盖用于制备蛋白质水解产物组合物的方法。所述方法包括使蛋白材料与肽链内切酶接触，所述肽链内切酶将蛋白材料切割成富集47kDa片段的多肽的混合物。另一方面公开了制备蛋白级份的方法。本发明的一个方面包括制备富集的疏水性β-伴球蛋白核心区域的蛋白产物的方法，其中所述β-伴球蛋白的α ’和α亚基的亲水性延伸区域被从β-伴球蛋白水解， 所述水解通过使用酶在谷氨酸和天冬氨酸的C末端上切割蛋白，从而产生富集的疏水性 β -伴球蛋白核心区域的蛋白产物，其中按重量计至少约10%至约66%的多肽是47kDa片段。本发明的另一方面提供包含蛋白质水解产物的食品。蛋白质水解产物组合物包含富集47kDa片段的多肽的混合物，其中按重量计至少约10%至约66%的多肽是47kDa片段。
本发明的其他方面将在下文中部分显现和部分指出。彩饩图的参考该专利申请包含至少一张彩色像片。具有彩色像片的该专利申请公布的复印件应请求并在支付必要费用后可由政府机关提供。附图描述

图1是使用GE水解的大豆分离蛋白的SDS-PAGE。泳道1是标准大豆分离蛋白 SUPRO^500E,泳道2-对照的未水解分离蛋白，泳道3-用来自地衣芽孢杆菌的丝氨酸蛋白
酶(也称为谷氨酰基肽链内切酶(GE))水解的分离蛋白(iaiig GE/kg分离蛋白)，泳道4-用 24mg GE/kg分离蛋白水解的分离蛋白，泳道5-用48mg GE/kg分离蛋白水解的分离蛋白，而泳道6是分子量标准。图2是商品大豆蛋白粉经过和未经过GE处理的考马斯蓝染色的SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)图像。泳道1包含未经过GE处理的商品大豆蛋白对照物。泳道2包含用 2. 4mg GE/Kg蛋白处理的商品大豆蛋白。泳道3包含用4. 8mg GE/Kg蛋白处理的商品大豆蛋白。β-伴球蛋白的α，和α亚基指示在左边，并且47kDa区域指示在左边。图3是用GE水解的酸沉淀大豆蛋白凝乳的SDS-PAGE。泳道1示出分子量标准， 泳道2是未水解的对照凝乳浆液，泳道3、4、和5包含分别用GE浓度M、48和96mg GE/kg 凝乳浆液固体水解30分钟的样品，泳道6、7、和8分别包含用GE浓度M、48和96mg GE/kg 凝乳浆液固体水解60分钟的样品，泳道9、10、和11分别包含用GE浓度M、48和96mg GE/ kg凝乳浆液固体水解120分钟的样品，泳道12包含标准大豆分离蛋白SUPR0 500E。图4示出GE处理的大豆分离蛋白水解产物对另一种丝氨酸蛋白酶处理的大豆分离蛋白水解产物的白度指数的比较，所述丝氨酸蛋白酶(SP)来自葱绿拟诺卡氏菌。图5示出来自NaCl处理的GE水解产物的47kDa多肽的富集程度。I 指示用4. 8mg GE/Kg蛋白处理的初始样品；II 描述在2%氯化钠中溶解蛋白并在75V混合30分钟的过程；III 描述在3，000XG将NaCl处理的样品离心10分钟的过程；IV 指示主要富集IlS 和7S的β亚基片段组成的上清液片段；V 描述主要由富集47kDa多肽片段组成的沉淀片段；VI 指示完整的大豆蛋白。图6示出用阴离子交换色谱法从GE处理的大豆蛋白的其他蛋白组分中分离47kDa 片段，以及用SDS-PAGE分析从色谱法分离物中收集的每个片段(1-10)。Gel A来自对照蛋白，Gel B来自用4.8mg GE/Kg蛋白水解的样品。片段1示出色谱法中未结合片段中的蛋白。Gel B的片段1中的主要蛋白质谱带是47kDa的多肽。图7示出对照物、2. 4mg GE/Kg蛋白、和4. 8mg GE/Kg蛋白(即本发明的样品1_3) 的热水合比率(THR)值。图8示出GE处理的大豆蛋白的快速粘度分析仪(RVA)测试结果。图9示出β -伴球蛋白的α亚基的潜在GE切割位点(有下划线的残基)，47kDa 部分用粗体显示。图10是GE处理的来自大规模制备水解产物的SDS-PAGE。泳道1包含标准大豆分离蛋白SUPRCi 500E。泳道2是无酶的对照分离蛋白，泳道3是用基于干物质的6mg GE/kg
样品蛋白水解的样品，泳道4是用6mg GE/kg蛋白水解样品并离心得到的沉淀，泳道5是用 6mg GE/kg蛋白水解样品并离心得到的上清液。泳道6是用基于干物质的12mg GE/kg样品蛋白水解的样品，泳道7是用12mg GE/kg蛋白水解样品并离心得到的沉淀，泳道8是用 12mg GE/kg蛋白水解样品并离心得到的上清液。泳道9是分子量标准。图11是由6和12mg GE/kg蛋白酶剂量处理的大豆蛋白水解产物制成凝胶的彩色照片。凝胶由水解产物和水解产物UF制成，其中水解产物在pH4. 5经过沉淀以除去较短的片段。图12示出GE处理过的样品与对照物的SQS感官数据比较。图13示出GE处理过的酸性凝乳与SP处理过的酸性凝乳的白度指数比较。发明详述本发明提供蛋白质水解产物组合物、用于生产蛋白质水解产物组合物的方法、以及包括蛋白质水解产物组合物的食品。已经发现用肽链内切酶消化大豆蛋白产生包含约 47kDa的多肽片段的组合物，所述肽链内切酶特异性地切割谷氨酸或天冬氨酸的羧基末端 (C末端)一侧上的大豆蛋白材料。所述47kDa蛋白级份包括β-伴球蛋白的疏水性β-伴球蛋白核心区域。β-伴球蛋白的疏水性β-伴球蛋白核心区域包括通常为47kDa的α和 α，亚基。β-伴球蛋白的β亚基为约47_50kDa。本发明的组合物包括约10%至约66% 47kDa片段。这些蛋白质水解产物组合物与大豆蛋白材料相比具有改善的白度指数和独特的粘弹特性，使得它们理想地用于酸奶、干酪、布丁、和搅打食品。丝氨酸蛋白酶也称为谷氨酰基肽链内切酶(称为“GE”)，它来自地衣芽孢杆菌(Bacillus lichenformis) (UNIPROT :P80057，其公开并表征于美国专利 4, 266, 031, 5，874，278、和 5, 459, 064 以及国际专利申请 WO 01/16285、WO 92/13964、WO 91/13553、和 WO 91/13554，所述文献均全文以引用方式并入本文)，该酶在谷氨酸和天冬氨酸残基的C 末端上切割蛋白。通过改变底物，在相同酶和底物浓度下酶反应取得不同的水解结果。当喷雾干燥的大豆分离蛋白进行GE反应时，所述反应较为随机，生成不同分子量的肽片段， 这一点从SDS-PAGE(图1)上能明显地看出来，然而当由大豆薄片制成的蛋白混悬液通过等电点沉淀所述蛋白进行反应时，所述蛋白为较天然的形式并且所述水解模式差别很大。水解导致较有选择性的切割以及47kDa蛋白级份的积聚，根据SDS-PAGE的数据(图2和3)， 看起来GE水解也似乎对切割β-伴球蛋白非常具有特异性，并且属于大豆球蛋白的条带似乎未发生改变。这项技术允许大规模生成具有富集伴球蛋白核心区域片段的材料。I.制备蛋白质水解产物组合物的方法本发明的一个方面提供制备包含富集47kDa片段的多肽的混合物的蛋白质水解产物组合物的方法。该方法包括使蛋白材料与肽链内切酶接触，所述肽链内切酶特异性地切割谷氨酸或天冬氨酸的羧基末端一侧上的蛋白材料，从而生成富集47kDa片段的多肽的混合物。a.水解切割所述方法包括将所述蛋白材料切割成较小多肽的混合物。一般来讲，使蛋白材料与肽链内切酶接触以形成水解产物。所述水解产物可进一步使用外肽酶进行切割。 .蛋白材料合适蛋白材料的非限制性实例包括大豆、苋属植物、竹芋、荞麦、卡诺拉、木薯、桃豆(鹰嘴豆)、玉米、豆类、兵豆、羽扇豆、小米、燕麦、豌豆、裸麦、高粱、向日葵、木薯粉、黑小麦、乳品、以及它们的组合。在一个实施方案中，所述蛋白质材料可为大豆蛋白材料。可在本发明方法中使用多种大豆蛋白以生成大豆蛋白水解产物。一般来讲，大豆蛋白材料可根据本领域已知的方法源自于全大豆。全大豆可为商品大豆(即，非转基因大豆)、转基因大豆、以及它们的组合。转基因大豆包括具有经修饰的蛋白、油、或碳水化合物组合物的大豆， 如高β-伴球蛋白大豆和高油酸大豆。大豆蛋白材料的合适的实例包括大豆提取物、豆腐、 大豆粉、大豆分离蛋白、大豆浓缩蛋白、豆浆、豆浆粉、以及它们的混合物。在一个实施方案中，该方法中使用的大豆蛋白材料可以是大豆分离蛋白(也称为分离大豆蛋白或ISP)。一般来讲，大豆分离蛋白具有按无水基计至少约90%大豆蛋白的蛋白质含量。大豆分离蛋白可包括完整的大豆蛋白或部分水解的大豆蛋白。大豆分离蛋白可具有高含量的贮藏蛋白亚基如7S、11S、2S、和15S的亚基。可用于本发明的大豆分离蛋白的非限制性实例可商购获得，例如购自Solae，LLC (St. Louis, MO)，并且包括SUPR0 500E、 SUPRO 620、SUra0 710、和 SUPR0 EX 33 大豆分离蛋白。在另一个实施方案中，大豆蛋白材料可为大豆浓缩蛋白(SPC)，其具有按无水基计约65%至小于约90%的蛋白质含量。用于本发明中的合适的大豆浓缩蛋白的实例包括 ALPHA DSP-C、Procon 、ALPHA 12 和 ALPHA 5800，它们可从 Solae，LLC (St. Louis, MO)商购获得。作为另外一种选择，大豆浓缩蛋白可与大豆分离蛋白共混，以取代部分大豆分离蛋白，作为大豆蛋白材料的来源。在另一个实施方案中，所述大豆蛋白质材料可以是大豆粉，其具有按无水基计约 49%至约65%的蛋白质含量。大豆粉可为脱脂大豆粉、部分脱脂大豆粉、或全脂大豆粉。作为另外一种选择，大豆粉可与大豆分离蛋白或大豆浓缩蛋白共混。大豆粉、大豆分离蛋白、 或大豆浓缩蛋白的任何组合将是有效的。本领域的技术人员能够根据终端使用产品的期望属性组合这些成分。当使用大豆粉时，原料通常为脱脂大豆粉或大豆片。全脂大豆包含按重量计约 40%的蛋白质和按重量计约20%的油。当脱脂大豆粉或大豆片构成起始蛋白质材料时，所有这些全脂大豆可经由常规方法脱脂。例如，可将大豆弄干净、脱壳、破碎、通过一系列压片辊，然后使用己烷或其他适宜溶剂使其经受溶剂萃取，以提取油并且制得脱脂薄片。所述脱脂薄片可被碾磨以制得大豆粉。虽然所述方法目前还没有用于全脂大豆粉，但是据信全脂大豆粉也可用作蛋白质源。然而，在处理全脂大豆粉时，很可能需要采用分离步骤，诸如三级离心以移除油。在另一个实施方案中，大豆蛋白材料可为豆浆。作为另外一种选择，豆浆可与大豆分离蛋白、大豆浓缩蛋白、或大豆粉共混。大豆粉、大豆分离蛋白、或大豆浓缩蛋白的任何组合将是有效的。本领域的技术人员能够根据终端使用产品的期望属性组合这些成分。在另一个实施方案中，大豆蛋白材料可为豆浆粉。作为另外一种选择，豆浆粉可与大豆分离蛋白、大豆浓缩蛋白、或大豆粉共混。大豆粉、大豆分离蛋白、或大豆浓缩蛋白的任何组合将是有效的。本领域的技术人员能够根据终端使用产品的期望属性组合这些成分。在另一个实施方案中，大豆蛋白材料可以是基于离心机中的沉淀已被分成四种主要贮藏蛋白级份或亚基(7S、11S、2S和15 的材料。一般来讲，IlS片段高度富集了大豆球蛋白，而7S片段高度富集了 β-大豆伴球蛋白。一般来讲，大豆蛋白材料通常包含具有一定范围大小的蛋白的混合物。在一个实施方案中，大豆材料中的蛋白可在约1000道尔顿至约500，000道尔顿的范围内。在另一个实施方案中，大豆材料中的蛋白可在约3000道尔顿至约100,000道尔顿的范围内。在另一个实施方案中，蛋白材料可来自非大豆的植物。作为非限制性实例，合适的植物包括苋属植物、竹芋、大麦、荞麦、卡诺拉、木薯、桃豆(鹰嘴豆)、豆类、兵豆、羽扇豆、玉米、小米、燕麦、豌豆、马铃薯、大米、裸麦、高粱、向日葵、木薯粉、黑小麦、小麦、以及它们的混合物。尤其优选植物蛋白包括大麦、卡诺拉、羽扇豆、玉米、燕麦、豌豆、马铃薯、大米、小麦、以及它们的组合。在一个实施方案中，植物蛋白材料可以是卡诺拉粗粉、卡诺拉分离蛋白、卡诺拉浓缩蛋白、以及它们的组合。在另一个实施方案中，植物蛋白材料可以是玉米或谷物蛋白粉、玉米或谷物浓缩蛋白、玉米或谷物分离蛋白、玉米或谷物胚芽、玉米或谷物谷蛋白、玉米或谷物谷蛋白粗粉、玉米或谷物面粉、玉米蛋白、以及它们的组合。在另一个实施方案中，植物蛋白材料可以是大麦粉、大麦浓缩蛋白、大麦分离蛋白、大麦粗粉、大麦面粉、 以及它们的组合。在另一个实施方案中，植物蛋白材料可以是羽扇豆粉、羽扇豆分离蛋白、 羽扇豆浓缩蛋白、以及它们的组合。在另一个实施方案中，植物蛋白材料可为燕麦片、燕麦粉、燕麦蛋白粉、燕麦分离蛋白、燕麦浓缩蛋白、以及它们的组合。在另一个实施方案中，植物蛋白材料可以是豌豆粉、豌豆分离蛋白、豌豆浓缩蛋白、以及它们的组合。在另一个实施方案中，植物蛋白材料可以是马铃薯蛋白粉、马铃薯分离蛋白、马铃薯浓缩蛋白、马铃薯粉、 以及它们的组合。在另一个实施方案中，植物蛋白材料可为米粉、大米粗粉、大米蛋白粉、大米分离蛋白、大米浓缩蛋白、以及它们的组合。在另一个实施方案中，植物蛋白材料可以是小麦蛋白粉、小麦谷朊粉、麦芽精、面粉、小麦分离蛋白、小麦浓缩蛋白、可溶性小麦蛋白、以及它们的组合。在另一个实施方案中，蛋白材料可来自乳品。合适的乳品蛋白的非限制性实例包括脱脂奶粉、分离乳蛋白、浓缩乳蛋白、酸酪蛋白、酪蛋白酸盐(例如酪蛋白酸钠和酪蛋白酸钙)、酪蛋白分离蛋白、酪蛋白浓缩蛋白、乳清浓缩蛋白、乳清分离蛋白、以及它们的组合。 乳蛋白材料可以来源于牛、山羊、绵羊、驴、骆驼、羊驼、牦牛、和水牛。在本发明的方法中设想使用大豆蛋白材料和至少一种其他蛋白材料的组合。艮口， 可由大豆蛋白材料和至少一种其他蛋白材料的组合来制备蛋白质水解产物组合物。在一个实施方案中，蛋白质水解产物组合物可以由大豆蛋白材料和一种其他蛋白材料的组合制备，其他蛋白材料选自大麦、卡诺拉、羽扇豆、玉米、燕麦、豌豆、马铃薯、大米、小麦、和乳品。 在另一个实施方案中，蛋白质水解产物组合物可以由大豆蛋白材料和两种其他蛋白材料的组合制备，其他蛋白材料选自大麦、卡诺拉、羽扇豆、玉米、燕麦、豌豆、马铃薯、大米、小麦、 和乳品。在另一个实施方案中，蛋白质水解产物组合物可以由大豆蛋白材料和三种或更多种其他蛋白材料的组合制备，其他蛋白材料选自大麦、卡诺拉、羽扇豆、玉米、燕麦、豌豆、马铃薯、大米、小麦、和乳品。非限制性组合包括大豆蛋白和乳品蛋白、大豆蛋白和卡诺拉蛋白、大豆蛋白和小麦蛋白、大豆蛋白和玉米蛋白、大豆蛋白和大米蛋白、大豆蛋白和豌豆蛋白、大豆蛋白和羽扇豆蛋白。此外，除大豆蛋白之外的多种蛋白材料的组合和包括大豆蛋白在内的多种蛋白材料的组合是可能的。b.蛋白浆液所用的大豆蛋白材料和其他蛋白材料的浓度可能并且将会不同。组合中使用的大豆蛋白材料的量可在约至约99%总蛋白的范围内。在一个实施方案中，组合中使用的大豆蛋白材料的量可在约至约20%总蛋白的范围内。在另一个实施方案中，组合中使用的大豆蛋白材料的量可在约20%至约40%总蛋白的范围内。在另一个实施方案中，组合中使用的大豆蛋白材料的量可在约40%至约80%总蛋白的范围内。在另一个实施方案中， 组合中使用的大豆蛋白材料的量可在约80%至约99%总蛋白的范围内。同样的，组合中使用的其他蛋白材料(至少一种)的量可在约至约99%总蛋白的范围内。在一个实施方案中，组合中使用的其他蛋白材料的量可在约至约20%总蛋白的范围内。在另一个实施方案中，组合中使用的其他蛋白材料的量可在约20%至约40%总蛋白的范围内。在另一个实施方案中，组合中使用的其他蛋白材料的量可在约40%至约80%总蛋白的范围内。在另一个实施方案中，组合中使用的其他蛋白材料的量可在约80%至约99%总蛋白的范围内。在本发明的方法中，通常将蛋白材料混合或分散在水中以形成按重量计包括约至约25%蛋白(按原样)的浆液。在一个实施方案中，所述浆液可包括按重量计约
至约5%的蛋白(按原样)。在另一个实施方案中，所述浆液可包括按重量计约6%至约 10%的蛋白(按原样)。在另一个实施方案中，所述浆液可包括按重量计约11%至约15% 的蛋白(按原样)。在另一个实施方案中，所述浆液可包括按重量计约16%至约25%的蛋白(按原样)。在将蛋白材料分散到水中后，可将蛋白材料的浆液加热至约70°C至约90°C约2分钟至约20分钟以失活推定的内源蛋白酶抑制剂。对蛋白浆液的pH和温度可进行调节以优化水解反应，确保水解反应中使用的肽链内切酶的功能接近其最佳活性水平。蛋白浆液的 PH可根据本领域一般已知的方法进行调节及监控。可将蛋白浆液的pH调节至并保持在约 5.0至约11.0。然而在一个实施方案中，不调节蛋白浆液的pH。将pH保持在约6. 3至约 6. 8。然后将酶处理的蛋白浆液在约6. 3至约6. 8的pH下孵育30分钟，随后将pH调节至 7.0。在一个实施方案中，可将蛋白浆液的pH调节至并保持在约7.0至约8.0。在另一个实施方案中，可将蛋白浆液的PH调节至并保持在约8.0至约9.0。在另一个实施方案中，可将蛋白浆液的PH调节至并保持在约9.0至约10.0。在一个优选的实施方案中，可将蛋白浆液的PH调节至并保持在8. 0。在水解反应期间，根据本领域已知的方法将蛋白浆液的温度优选地调节至并保持在约30°C至约70°C。一般来讲，高于或低于该范围的温度可灭活肽链内切酶。在一个实施方案中，根据本领域已知的方法，在水解反应期间可将蛋白浆液的温度调节至并保持在约40°C至约60°C。i.肽链内切酶水解反应一般由将肽链内切酶加入到蛋白材料浆液中以形成反应混合物而引发。 肽链内切酶与蛋白材料的反应导致蛋白材料水解成较小的多肽。这种肽链内切酶将选择性地切割谷氨酸或天冬氨酸的羧基末端一侧上的蛋白。肽链内切酶是丝氨酸蛋白酶，具体地讲是GE。GE在约6. 0至约11. 0的pH和约30°C至约70°C的温度下具有最佳活性，在pH 9.0时的最佳温度为约50°C。肽链内切酶可为微生物来源的酶。使用微生物酶而不是动物或植物酶是有利的， 因为微生物酶表现出广谱特征(最适pH、温度等)并且可以相对大的数量持续获取。合适的肽链内切酶的非限制性实例包括GE，一种如前文所述来自地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis) (UNIPROT :P80057)的丝氨酸蛋白酶。GE切割谷氨酸或天冬氨酸的羧基末端一侧上的肽键。在一个实施方案中，肽链内切酶可为丝氨酸蛋白酶，该酶的氨基酸序列具有与表1 中所示的SEQ ID NO :1至少80%的同一性并具有蛋白酶活性。在另一个实施方案中，肽链内切酶可为丝氨酸蛋白酶，该酶的氨基酸序列具有与SEQ ID NO :1至少85%的同一性并具有蛋白酶活性。在另一个实施方案中，肽链内切酶可为丝氨酸蛋白酶，该酶的氨基酸序列具有与SEQ ID NO :1至少90%的同一性并具有蛋白酶活性。在另一个实施方案中，肽链内切酶可为丝氨酸蛋白酶，该酶的氨基酸序列具有与SEQ ID NO :1至少95%的同一性并具有蛋白酶活性。在另一个实施方案中，肽链内切酶可为丝氨酸蛋白酶，该酶的氨基酸序列具有与 SEQ ID NO :1至少97%的同一性并具有蛋白酶活性。在另一个实施方案中，肽链内切酶可为丝氨酸蛋白酶，该酶的氨基酸序列具有与SEQ ID NO :1至少99%的同一性并具有蛋白酶活性。表 1
MYSKKSVKRGLITGLIGISIYSLGMHPAQAAPSPHTP
VSSDPSYKAETSVTYDPNIKSDQYGLYSKAFTGTGK
VNETKEKAEKKSPAKAPYSIKSVIGSDDRTRVTNTT
AYPYRAIVHISSIGSCTGWMIGPKTVATAGHCIYDTS
SGSFAGTATVSPGRNGTSYPYGSVKSTRYFIPSGWR
SGNTNYDYGAIELSEPIGNTVGYFGYSYTTSSLVGT
TVTISGYPGDKTAGTQWQHSGPIAISETYKLQYAMD
TYGGQSGSPVFEQSSSRTNCSGPCSLAVHTNGVYG
GSSYNRGTRITKEVFDNLTNWKNSAQ两个氨基酸序列间的序列同一性程度可使用Karlin和Altschul的BLASTp算法进行测定(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268,1990)。通过在比较窗口上比较两个最佳比对序列来测定序列同一性百分比，其中比较窗口中的氨基酸序列部分与参比序列 (不包括添加或删除)相比可包括添加或删除(例如间隙)以达到最佳的两序列比对效果。 百分比通过以下方法进行计算确定两序列中具有相同氨基酸的位置的数目以得到匹配位置的数目，将该匹配位置的数目除以比较窗口中位置的总数，并且所得结果乘以100来获得序列同一性的百分比。技术人员将理解一个氨基酸残基可被另一个具有相似侧链、不影响多肽功能的氨基酸残基取代。例如，具有脂族侧链的一组氨基酸是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、和异亮氨酸；具有脂族-羟基侧链的一组氨基酸是丝氨酸和苏氨酸；具有包含酰胺的侧链的一组氨基酸是天冬酰胺和谷氨酰胺；具有芳族侧链的一组氨基酸是苯丙氨酸、酪氨酸、和色氨酸；具有碱性侧链的一组氨基酸是赖氨酸、精氨酸、和组氨酸；并且具有含硫侧链的一组氨基酸是半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的几组保守氨基酸取代包括缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸一酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、和天冬酰胺-谷氨酰胺。因此肽链内切酶可具有至少一个针对SEQ ID NO :1的保守氨基酸取代。在一个实施方案中，肽链内切酶可具有约35个针对SEQ ID NO :1的保守氨基酸取代。在另一个实施方案中，肽链内切酶可具有约25个针对SEQ ID NO :1的保守氨基酸取代。在另一个实施方案中，肽链内切酶可具有约15个针对SEQ ID NO 1的保守氨基酸取代。在另一个实施方案中，肽链内切酶可具有约10个针对SEQ ID NO 1的保守氨基酸取代。在另一个实施方案中，肽链内切酶可具有约5个针对SEQ ID NO :1的保守氨基酸取代。在另一个实施方案中，肽链内切酶可具有约一个针对SEQ ID NO 1的保守氨基酸取代。这些具有蛋白酶活性的序列中的任何一个序列的片段可以是活性酶的氨基酸序列，例如在加工后，例如在任何信号肽和/或肽原已经被切割后。肽链内切酶也可为源于哺乳动物的酶，例如源于牛或猪的酶。表2中给出了蛋白材料和肽链内切酶的多种组合。表 权利要求
1.大豆蛋白水解产物组合物，所述组合物包含富集47kDa片段的多肽的混合物，其中按重量计约10% -约66%的所述多肽是所述47kDa片段。
2.权利要求1的组合物，其中所述组合物包含选自SEQID N0:2、SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7、和 SEQ ID NO :8 的至少一种寡肽。
3.蛋白级份，所述蛋白级份包含富集的疏水性伴球蛋白核心区域。
4.食品，所述食品包含权利要求1的大豆蛋白水解产物组合物。
5.权利要求4的食品，所述食品选自干酪、乳化肉类、搅打食品、块状食品、鱼肉酱产品、挤出食品、饮料、全肌食品、酸奶、布丁以及它们的组合。
6.用于制备蛋白级份的方法，所述方法包括a.使用来源于在pH4. 5等电点沉淀的大豆粉或大豆浓缩物制备大豆蛋白浆液，以及b.用酶水解所述大豆蛋白浆液，所述酶在谷氨酸和天冬氨酸的C末端上切割蛋白以获得蛋白级份。
7.制备富集的疏水性伴球蛋白核心区域的蛋白产物的方法，其中所述伴球蛋白的α ’和α亚基的亲水性延伸区域通过用酶水解β-伴球蛋白被选择性地从β-伴球蛋白水解，所述酶在谷氨酸和天冬氨酸的C末端上切割蛋白，从而产生富集的疏水性β -伴球蛋白核心区域的蛋白产物。
8.权利要求7的方法，其中所述酶是蛋白酶。
9.权利要求8的方法，其中所述酶是丝氨酸蛋白酶。
10.权利要求9的方法，其中所述酶是来自地衣芽孢杆菌的丝氨酸蛋白酶。
11.用于制备蛋白质水解产物组合物的方法，所述方法包括a.使蛋白材料与肽链内切酶接触，所述肽链内切酶将所述蛋白材料切割成富集47kDa 片段的多肽的混合物，所述多肽的混合物包含所述蛋白质水解产物组合物，其中按重量计约10% -约66%的所述多肽是所述47kDa片段。
12.权利要求11的方法，其中所述肽链内切酶是丝氨酸蛋白酶。
13.权利要求12的方法，其中所述丝氨酸蛋白酶来自地衣芽孢杆菌。
14.食品，所述食品包含蛋白质水解产物组合物，所述组合物包括富集47kDa片段的多肽的混合物，其中按重量计约10% -约66%的所述多肽是所述47kDa片段。
15.权利要求14的食品，所述食品选自干酪、鱼肉酱产品、乳化肉类、搅打食品、块状食品、挤出食品、饮料、全肌食品、酸奶、布丁以及它们的组合。
全文摘要
本发明提供蛋白质水解产物组合物、用于制备蛋白质水解产物组合物的方法、以及包括蛋白质水解产物组合物的食品。大豆蛋白水解产物组合物一般包含富集47kDa片段的多肽的混合物，其中按重量计约10％-约66％的所述多肽是47kDa片段。
文档编号A23C20/00GK102387711SQ200980157668
公开日2012年3月21日 申请日期2009年12月30日 优先权日2008年12月31日
发明者D-C·黄, G·B·莱恩格列夫, N·K·沙, P·S·克尔, T·M·王 申请人:索莱有限责任公司, 诺沃兹美斯公司