专利名称：一种细胞培养基的制作方法
技术领域：
本发明是生物技术领域的一种新型细胞培养基。
背景技术：
自上世纪初细胞培养基出现以來，细胞培养技术已经成为生物技术和生物工程领域不可 或缺的基础性技术，同时对培养基的要求也在不断提高。目前的培养基主要由基础培养基和 添加剂构成，基础培养基主要由平衡盐、蛋白质水解物、维生素和能量成分构成；添加剂主 要是各种动物血清(司徒振强，吴军正细胞培养世界图书出版公司北京2004; 44-61 )。 由于血清中含有抗体和补体等免疫分子会对细胞构成影响，而且血清蛋白质成分负责和目标 蛋白可能存在交叉，而且受到人畜共患病的影响，人们不断在摸索各种血清的替代产品，比 如各种细胞因子的组合，或者利用植物源生物活性物质，但是这些技术要么过于昂贵、要么 细胞生长效率较低，难以完全替代血清产品，而且血清对于部分工程细胞尤其是昆虫细胞的 支持并不理想。因此我们希望开发一种新的血清替代产品，并结合对基础培养成分的调整建 立一套新的细胞培养体系，目前国内和国际上尚未发现类似的报道。
发明内容
本发明涉及生物技术领域一种细胞培养用培养基，由基础培养成本和添加成分构成，其
特征是基础成分由平衡盐溶液、能量物质，维生素，蛋白质水解物，以及酸碱指示剂构成， 添加成分为昆虫幼虫提取物。
其中，昆虫幼虫提取物来源于无菌条件下培养的蝇蛆，黄粉虫、蚕或者菜青虫，首选但 不限于无菌蝇蛆。基础成分可以选择传统基础培养基，也可以自行配置。自制基础培养成分
中平衡盐溶液可以是Hanks溶液、Earle溶液、Ringer溶液、Dulbecco溶液、D-Hanks溶液
或者PBS;其中能量物质可以是葡萄糖、果糖、蔗糖和可溶性淀粉中一种或者几种；其中维 生素是目前发现的13种微生物中的一种或者几种；其中蛋白质水解物可以是氨基酸、蛋白胨 或者蛋白腙，其来源可以是动物乳汁、大豆、小麦、鱼或者动物肉制品中一种或者几种，首 选但不限于动物乳汁。
实施实例
昆虫幼虫提取物的制备
1、 无菌培养昆虫幼虫到幼虫青年期，优选但不限于无菌蝇蛆
2、 加入适量平衡盐溶液制备匀浆，
3、 离心去处残渣和脂类成分
4、 微孔滤膜过滤得到提取物
5、 以标准血清为参照测定提取物相对生长活性基础培养基的制备
参照商品化基础培养基比例，以平衡盐溶液为基础制备基础培养基，其中蛋白质水解物 首选但不限于蛋白胨，添加量推荐但不限于0.1%-5.0% (w/v %);能量物质首选但不限于葡
萄糖，添加量推荐但不限于0.1%-1.0% (W/V%);其他成分参照商品化培养基添加。
培养基调配
以待培养细胞为实验对象，以标准血清作为参照，在商品化基础培养集中加入不同体积 的昆虫幼虫提取物，测定培养物相对活性并确定添加比例。之后可与商品化基础培养基配合 使用。
以待培养细胞为实验对象，以商品化基础培养作为参照，在自制基础培养集中加入等体 积活性确定的昆虫幼虫提取物，选择最佳基础培养基配方。之后可和昆虫幼虫提取物配合使用。
本发明所涉及的血清代用品不含有动物成分，来源广泛，成本低廉，利用自制基础培养 成分进一歩降低了成本，培养适合工程细胞尤其是昆虫细胞的工业化培养，具有一定的经济 价值、实用价值和社会价值。
具体实施实例
下面举例说明本发明所涉及培养基的配置过程，其内容不构成对本发明所要求各项权利 的限制。
1、 人工培养无菌蝇蛆到1周龄，预冷无菌水快速清洗三次。
2、 加入等体积预冷D-Hinkers溶液，低温匀浆
3、 低温4000g到6000g离心10分钟，匀浆分为三层，提取中层清液
4、 0.22微米微孔滤膜正压过滤，收集滤液，低温保存或冻干保存，滤液既为添加剂。
5、 将滤液按照5%、 10%、 20%、 30%的体积比例添加到RPMI1640培养基中混合，并以添 加10。/。标准胎牛血清的RPMI1640培养基作为参照，以Hela细胞作为检验对象，测定 添加剂活性和添加比例。
6、 取医用复合氨基酸注射液，复合维生素溶液，葡萄糖注射液，无菌水按照不同比例混 合后，加入等体积2倍D-Hinkers溶液，和适量酸碱指示剂，调节酸碱度到7.40。 添加等体积昆虫细胞提取物，以RPMI1640培养基作为参照，以Hela细胞作为检验对 象，确定最佳配合比例。
权利要求
1本发明涉及生物技术领域一种细胞培养基，由基础培养成本和添加成分构成，其特征是基础成分由平衡盐溶液、能量物质，维生素，蛋白质水解物，以及酸碱指示剂构成，添加成分为昆虫幼虫提取物。
2. 根据权利要求(1)中所描述的细胞培养基，其特征是添加成分中昆虫幼虫提取物来 源于蝇蛆，黄粉虫、蚕或者菜青虫，首选但不限于无菌蝇蛆。
3. 根据权力要求(l)中所描述的细胞培养基，其特征是基础成分可以选择传统基础培养基，也可以自行配置；其中平衡盐溶液可以是Hanks溶液、Earie溶液、Ringer溶液、 Dulbecco溶液、D-Hanks溶液或者PBS;其中能量物质可以是葡萄糖、果糖、蔗糖和可溶 性淀粉中一种或者几种；其中维生素是目前发现的13种微生物中的一种或者几种；其中蛋 白质水解物可以是氨基酸、蛋白胨或者蛋白腙，其来源可以是动物乳汁、大豆、小麦、鱼或 者动物肉制品中一种或者几种，首选但不限于动物乳汁。
全文摘要
本发明涉及生物技术领域一种细胞培养基，由基础成本和添加成分构成，其特征是基础成分由平衡盐溶液、能量物质，维生素，蛋白质水解物，以及酸碱指示剂构成，添加成分为昆虫幼虫提取物。其中，添加成分不含有动物成分，来源广泛，成本低廉，利用自制基础培养成分可进一步降低操作成本，适合工程细胞尤其是昆虫细胞的工业化培养，具有一定的经济价值、实用价值和社会价值。
文档编号C12N5/00GK101624578SQ20081011653
公开日2010年1月13日 申请日期2008年7月11日 优先权日2008年7月11日
发明者张永钢 申请人:张永钢