专利名称：一种木质纤维分解复合菌群的制备方法及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种木质纤维分解复合菌群的制备方法及其用途，是一种利用微生物 处理农业废弃秸秆的生物技术。
背景技术：
我国是个养牛大国，近年来，随着养牛业向规模化、集约化方向发展，牛粪对环境 的污染问题变得越来越严重。1999年中国农业统计年鉴表明，牛的饲养量为3506. 94万头 /年，每头牛产粪量10. 6吨/年、产尿量4. 9吨/年；总产粪量13689. 52万吨/年，总产尿 量4500. 66万吨/年。堆肥法对于性冷牛粪需要三四个月甚至半年，历时长，处理效率低下， 难以适应现代规模养殖业发展。传统的牛粪堆的温度也不高，难以杀灭牛粪中所含的大量 杂草中子和虫卵病菌等缺点限制了其使用价值。如何迅速而有效地处理牛粪是科技工作者 面临的新挑战。新鲜牛粪含水率都在80%以上，常常通过添加麦秸、稻壳等农作物秸秆进行调节。 农业秸秆中较难降解的有机成分是木质素，其在堆肥化中的降解是促进堆肥化进程的关 键。木质素的降解能为提高堆肥的效率、缩短堆肥时间改善堆肥质量的研究提供一条新的 思路和技术。在自然界中，能降解木质素并产生相应酶类的生物只占少数。降解木质素的真菌 主要是白腐真菌，此类真菌能够分泌胞外氧化酶降解木质素，因此被认为是最主要的木质 素降解微生物。目前，国内外普遍采用的秸秆发酵技术如好氧发酵或厌氧发酵存在诸如菌 种较单一，分解能力弱，纤维素总降解率低，一般为20 40%左右以及发酵周期较长，一般 需要50d左右的发酵周期等问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种木质纤维分解复合菌群的制备方法及其用途，为解决现 有在秸秆降解过程中所利用的微生物菌剂种类单一、分解能力弱、纤维素总降解率低以及 发酵周期长等问题，提供了一种高效秸秆分解复合菌群。本发明的目的是这样实现的本发明的木质纤维分解复合菌群的制备方法按照以下的步骤进行(1)牛粪培养基的制备称取牛粪150g加入IOOOmL的烧杯中，倒入400mL水，充 分搅拌30min，过滤取掉渣制，取IOOmL加入250mL的三角瓶中待用；(2)摇瓶培养接种剂制备取牛粪堆肥150g投加到含400mL水的IOOOmL的烧杯 中，充分搅拌30min，待用；(3)取IOmL摇瓶培养接种剂投加到IOOmL液体牛粪培养基的250mL三角瓶中，置 于转速为120r/min和温度为45°C的摇床上培养3 5d ；(4)黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)和采用微生物分离的 常规方法自牛粪上分离的木霉(Trichoderma sp)、根霉(Rhizopus sp)、花褶伞属真菌(Panaeolus sp)(Coprinus sp)的;t音#。包原毛平胃 (Phanerochaete
chrysosporium)禾口木霉(Trichodermasp)、根霉(Rhizopus sp)、花裙伞属真菌(Panaeolus sp)、鬼伞属真菌(Coprinus sp)的菌种分别经过含PDA培养基的斜面培养，获得其孢子，浓 度为每毫升1 X IO5个孢子，其中PDA培养基采用200g/L的马铃薯浸出液，然后添加20g/ L的葡萄糖和17 20g/L的琼脂并定溶至IL ；(5)将采用牛粪培养基的发酵获得的发酵液与黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)和采用微生物分离的常规方法自牛粪上分离的木霉(Trichoderma sp)、根 霉(Rhizopus sp)、花褶伞属真菌(Panaeolus sp)、鬼伞属真菌(Coprinus sp)的孢子悬液 混合，几种菌液的体积比为2 1 1 1 1 1，然后干燥，获得发酵菌剂。本发明的木质纤维分解复合菌群的用途，是将该种微生物菌剂作为牛粪与农业秸 秆的堆肥发酵菌剂。本发明具有以下优点1、能全面降解各种有机物质，尤其是秸秆和牛粪中的木质 纤维素，降解率高，周期短，适宜条件下25天左右，降解率达60%以上；2、可实现农业废弃 物和畜禽粪便的有效利用，改良农业、养殖业生态环境，减少因焚烧秸秆造成的空气污染和 保护环境。
具体实施例方式实施例1本发明的木质纤维分解复合菌群的制备方法按以下具体步骤制备(1)牛粪培养基的制备称取牛粪150g加入IOOOmL的烧杯中，倒入400mL水，充 分搅拌30min，过滤取掉渣制，取IOOmL加入250mL的三角瓶中待用；(2)摇瓶培养接种剂制备取牛粪堆肥40g，过筛，然后在称取20g投加到含50mL 水的IOOOmL的烧杯中，充分搅拌30min，待用；(3)取IOmL摇瓶培养接种剂投加到IOOmL液体牛粪培养基的250mL三角瓶中，置 于转速为120r/min和温度为45°C的摇床上培养3d 5d ；(4)黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)和采用微生物分离的 常规方法自牛粪上分离的木霉(Trichoderma sp)、根霉(Rhizopus sp)、Panaeolus sp、 Coprinus sp 的；t音养。黄 包原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)禾口 木 β (Trichoderma sp)、根霉(Rhizopus sp)、花裙伞属真菌(Panaeolus sp)、鬼伞属真菌 (Coprinus sp)的菌种分别经过含PDA培养基的斜面培养，获得其孢子，浓度为每毫升 IX IO5个孢子，其中PDA培养基采用200g/L的马铃薯浸出液，然后添加20g/L的葡萄糖和 17 20g/L的琼脂并定溶至IL ；(5)将采用牛粪培养基的发酵获得的发酵液与黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)和采用微生物分离的常规方法自牛粪上分离的木霉(Trichoderma sp)、根 霉(Rhizopus sp)、花褶伞属真菌(Panaeolus sp)、鬼伞属真菌(Coprinus sp)的孢子悬液 混合，菌液的体积比为2 1 1 1 1 1。干燥，获得发酵菌剂。实施例2牛粪培养基的发酵获得的发酵液与黄孢原毛平革菌 (Phanerochaetechrysosporium)和采用微生物分离的常规方法自牛粪上分离的木霉 (Trichoderma sp)、根霉(Rhizopussp)、花裙伞属真菌(Panaeolus sp)、鬼伞属真菌(Coprinus sp)的孢子悬液混合的制备如实施例1。该复合菌剂适合秸秆和粪便为主要原料的堆肥使用。实施例3牛粪培养基的发酵获得的发酵液与黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)和采用微生物分离的常规方法自牛粪上分离的木霉(Trichoderma sp)、根 霉(Rhizopus sp)孢子悬液混合的制备如实施例1。将采用牛粪培养基的发酵获得的发酵液与黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)、木霉(Trichoderma)和根霉(Rhizopus sp)的孢子悬液混合,三种菌液的 体积比为1 2 1。该复合菌剂适合秸秆(菌液与粉碎为1厘米左右秸秆的体积比采用 1 100-1 200，二者充分混合，湿度控制在75-80% )为主要原料的堆肥使用。
权利要求
一种木质纤维分解复合菌群的制备方法，其特征是，按照以下的步骤进行(1).牛粪培养基的制备称取牛粪150g加入1000mL的烧杯中，倒入400mL水，充分搅拌30min，过滤取掉渣制，取100mL加入250mL的三角瓶中待用；(2).摇瓶培养接种剂制备取以牛粪为原料采用常规方法堆置获得的堆肥40g，过筛后，然后再将过筛后的堆肥称取20g投加到含50mL水的1000mL的烧杯中，充分搅拌30min，待用；(3).取10mL摇瓶培养接种剂投加到100mL液体牛粪培养基的250mL三角瓶中，置于转速为120r/min和温度为45℃的摇床上培养3d～5d；(4).黄孢原毛平革菌Phanerochaete chrysosporium和采用微生物分离的常规方法自牛粪上分离的木霉Trichoderma sp、根霉Rhizopus sp、曲霉Aspergillus sp、花褶伞属真菌Panaeolussp、鬼伞属真菌Coprinus sp的培养将黄孢原毛平革菌Phanerochaete chrysosporium和Trichoderma sp、根霉Rhizopus sp、花褶伞属真菌Panaeolus sp、鬼伞属真菌Coprinus sp的菌种分别经过含PDA培养基培养，获得其孢子，浓度为每毫升1×108个孢子，其中PDA培养基采用200g/L的马铃薯浸出液，然后添加20g/L的葡萄糖和17～20g/L的琼脂并定溶至1L；(5).将采用牛粪培养基的发酵获得的发酵液与黄孢原毛平革菌Phanerochaetechrysosporium和Trichoderma sp、根霉Rhizopus sp、花褶伞属真菌Panaeolus sp、鬼伞属真菌Coprinus sp的孢子悬液混合，菌液的体积比为2∶1∶1∶1∶1∶1，然后干燥，获得发酵菌剂。
2.权利要求1所述的木质纤维分解复合菌群的用途，其特征在于将该种微生物菌剂 作为牛粪与农业秸秆的堆肥发酵菌剂。全文摘要
本发明涉及一种木质纤维分解复合菌群的制备方法及其用途，是一种快速简便的制备高效木质纤维分解复合菌群的方法，具体为牛粪与农业秸秆地堆肥化提供微生物菌剂，解决了牛粪和农业秸秆难堆肥化的问题。该复合菌群由采用牛粪培养基的发酵获得的发酵液与黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)和分离自牛粪的木霉(Trichoderma sp)、根霉(Rhizopus sp)、花褶伞属真菌(Panaeolus sp)、鬼伞属真菌(Coprinus sp)的孢子悬液混合组成，能够全面降解牛粪和木质纤维素的农业秸秆。在牛粪与稻秸的堆肥中使用该菌剂，其发酵周期短，仅需25d。菌群的制作方法简单，易于实施，单位原料中菌群含量大，活性高。
文档编号C12R1/885GK101974426SQ20101028216
公开日2011年2月16日 申请日期2010年9月15日 优先权日2010年9月15日
发明者刘张, 周成, 宁平, 熊向峰, 瞿广非, 贾丽娟, 邓志华, 黄兆林, 黄凯 申请人:昆明理工大学