专利名称：一种生物碱的抗癌应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种生物碱，尤其是涉及一种生物碱Exfoliazone的抗癌应用。
背景技术：
孤儿受体Nur77 (又称为TR3或NGFI-B)，是核受体超家族的重要成员，它也是一种 立刻早期基因，其表达可以被血清、生长因子、十四烷酰佛波醋酸酯-13(TPA)以及钙信号 迅速诱导(Zhang XK. et. al. , Expert Opin Ther Tar 2007 ；11 69~79 ；Mo 11 UM, et. al., Oncogene 2006 ；25 =4725-4743) 0 Nur77最初被认为是一种细胞存活因子，它可以从介导多 种存活信号通路，包括蛋白激酶A、蛋白激酶C、MAPK和NF-KB通路。Nur77表达的促生长作 用在多种肿瘤中都被证实(Chen GQ, et. al.，Int J Cancer 2002 ；99 171-8 ；Wu Q，et. al.， Carcinogenesis 2002 ；23 1583-1592)，已有报道表明，Nur77的mRNA在癌组织中的表达水 平明显高于癌旁组织。最近，越来越多的证据表明，Nur77同时也是一种促凋亡分子。Nur77对凋亡的 作用首先在未成熟的胸腺细胞和T-细胞杂交瘤通过T-细胞受体信号的凋亡中被报道。 Nur77对细胞凋亡的作用已在多种类型的癌细胞中被证实，它可以对多种凋亡因子，如钙 离子载体、依托泊甙(VP-16)、佛波酯、镉以及 l，l-Bis(3，-indoly)-1-(p-subsatituted phenyl)methanes 做出应答(Stasik I，et. al. ,BBA-Mol Cell Res 2007 ； 1773 1483-1490 ； Gennari A, et.al. , Toxicol ApplPharmacol 2002 ；181 :27_31 ；Liu S, et. al. , World J Gastroenterol 2002 ；8 446-450 ；Wilson AJ, et. al.，Cancer Res 2003 ；63 5401-5407 ； Chintharlapalli S, et. al.，J Biol Chem 2005 ；280 :24903_24914·)。Nur77 的凋亡效应 具有临床上的价值，当以环磷酰胺、阿霉素、长春新碱对病人进行治疗时，弥漫性大B细胞 淋巴瘤病人的存活率和Nur77亚家族成员Nor-I的表达水平相关(Shipp MA, et. al.，Nat Med 2002；8 :68_74·)。调控Nur77的增殖作用和凋亡作用的生物活性机制之一是通过Nur77的亚细胞定 位来实现的。Nur77通过其在细胞核中的作用实现生长促进，这一作用需要Nur77与靶基因 DNA反应调控元件相结合，即Nur77在细胞核内的转录激活作用具有诱导细胞增殖的功能。 而Nur77的凋亡作用不依赖于转录，在其DNA结合结构域缺失时，这种凋亡诱导作用仍可发 生。生物碱Exfoliazone是一种从海洋生物中提取的生物碱，Kimai等(KIMAI S. et al. , Isolationand structure of a new phenoxazine antibiotic, ^ ^Μ Exfoliazone, produced by Streptomycesexfoliates. Journal of Antibiotics,1990,43(12) 1606-1607.)的研究表明，从 Streptomycesexfoliatus 中提取的生物碱 Exfoliazone 具
lifi^ffl ‘ M Shinsuke (Shinsuke I. et. al.Exfoliazone and lavanducyanin,
potent growth promoting substances of rat liver cell line, RLN—8, produced by streptomyces exfoliatus and streptomyces aeriouvifer[J]. J Antibiot,1993,46 (8) 1232-1238)的研究表明，生物碱Exfoliazone对鼠肝细胞系具有促生长作用，但未见其对
3癌细胞作用的报道。
发明内容
本发明的第一个目的在于，提供一种生物碱Exfoliazone在制备治疗癌症药物中 的应用。本发明的第二个目的在于，提供一种孤儿受体Nur77作为作用靶点在筛选海洋生 物资源中的应用。所述生物碱Exfoliazone可以诱导癌症细胞的凋亡，具体的，生物碱Exfoliazone 可以诱导孤儿受体Nur77的表达，诱导孤儿受体Nur77出核，并且生物碱Exfoliazone是通 过CRMl途径诱导Nur77的出核转运，最后引起肝癌细胞的凋亡，且生物碱Exfoliazone的 凋亡效应依赖于Nur77的出核转运。生物碱Exfoliazone在制备治疗癌症药物中的应用，是生物碱Exfoliazone作为 一种靶向Nur77凋亡途径的调节因子。所述癌症为肝癌、肺癌等。所述治疗癌症药物以孤 儿受体Nur77作为作用靶点。所述以孤儿受体Nur77作为作用靶点在筛选海洋生物资源中 的应用。所述筛选是筛选作用于孤儿受体Nur77诱导肿瘤细胞凋亡的生物碱Exfoliazone 等一类海洋生物资源。所述诱导肿瘤细胞凋亡是通过诱导孤儿受体Nur77的表达。所述诱 导肿瘤细胞凋亡是通过诱导孤儿受体Nur77出核且依赖于Nur77的出核转运。本发明提供的作用于Nur77诱导肿瘤细胞凋亡可以用于指导筛选其它生物碱，从 中获取具有抗肿瘤活性的化合物，并可将获得的药物进而制备可作用于孤儿受体Nur77诱 导肿瘤细胞凋亡的活性与功能的药物。本发明涉及的是从海洋生物中提取的一种生物碱Exfoliazone，其具有诱导肿瘤 细胞凋亡，且凋亡效应依赖于Nur77的出核转运。生物碱Exfoliazone作为一种靶向Nur77 凋亡途径的新的调节因子，将成为一种非常有效的癌症治疗药物。本发明根据海洋药物资源与核受体的关系，得到一种生物碱Exfoliazone能够诱 导肿瘤细胞的凋亡，且凋亡效应依赖于Nur77的出核转运。
图1显示生物碱Exfoliazone对Nur77mRNA水平的调控结果。图2显示生物碱Exfoliazone对肝癌细胞H印G2中Nur77蛋白的表达量调控结果。 该诱导作用具有良好的时效和量效关系。图3显示生物碱Exfoliazone诱导内源Nur77出核。图4显示生物碱Exfoliazone诱导外源Nur77的出核(通过CRMl途径诱导)。图5显示生物碱Exfoliazone诱导外源Nur77的凋亡(通过CRMl途径诱导)。图6显示生物碱Exfoliazone对肝癌细胞!fepG2生长的抑制作用。图7显示生物碱Exfoliazone诱导H印G2细胞的凋亡。图8显示生物碱Exfoliazone诱导!tepG2细胞PARP蛋白切割。图9显示Annexin V/PI双染检测生物碱Exfoliazone对!fepG2细胞的凋亡。图10显示外源Nur77介导生物碱Exfoliazone的凋亡效应。图llNur77敲除的MEF细胞中生物碱Exfoliazone的凋亡效应显著下降。
图12显示生物碱Exfoliazone在!fepG2细胞中诱导的凋亡效应依赖于Nur77的 出核转运。图13显示生物碱Exfoliazone对肺癌细胞H460生长的抑制作用。图14显示生物碱Exfoliazone对Nur77mRNA水平的调控结果。图15显示生物碱Exfoliazone对肺癌细胞H460中Nur77蛋白的表达量调控结果。
具体实施例方式以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本 发明而非用于限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条 件如《分子克隆实验室手册》(New York Co Id Spring Harbor Laboratory Press, 1989) 中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。本发明中使用的试剂脂质体2000、Trizol 购自 Invitrogen 公司，普霉素 A(LMB)购自 sigma ;ECL、山 羊抗兔、山羊抗鼠辣根过氧化物酶二抗购自Thermo公司；Cy3标记的山羊抗鼠二抗购自 Cheniconinternational ；Nur77 多抗(sc-5569)、PARP (sc-556494)及 FITC 标记的山羊抗 兔二抗购自Santa Cruz ； β-actin抗体购自Sigma公司；PVDF膜购自Millipore0无特别 注明外，其它化学试剂均购自Sigma公司。所采用的生物碱Exfoliazone为北京大学医学部林文翰教授的实验室分离 和鉴定(有关化学结构已公开，见参考文献Journal of Antibiotics，1990，43 (12) 1606-1607)。其结构式如下实施例1在!fepG2细胞中生物碱Exfoliazone对于Nur77表达的诱导作用1、细胞培养选择肝癌细胞株H印G2 (ATCC)，用10%小牛血清的DMEM培养基，在37°C含5% C02 的细胞培养箱培养于6孔组织培养板中，24h后换液，饥饿12h后进行加药(不含血清) 处理。生物碱Exfoliazone溶解于DMSO(DMS0终浓度< 0. )中，分别以10 μ mol/L、 20 μ mol/L处理6h，阴性对照组用同样浓度的DMSO处理6h，而阳性对照组用佛波酯IOOng/ mL (TPA)处理3h，具体处理如下(1)阴性对照组(DMSO)(2)阳性对照组(TPA)(3)生物碱 Exfoliazone 组(10 μ mol/L)(4)生物碱 Exfoliazone 组(20 μ mol/L)收集细胞，以备提取RNA。
2、转录水平分析Nur77的表达细胞以TRIZOL提取RNA，然后进行RT-PCR，最后PCR产物用1 %琼脂糖胶进行分 析，结果如图1所示。由图1的结果可知，在H印G2肝癌细胞中，生物碱Exfoliazone可显著上调 Nur77mRNA 的表达。3、蛋白水平分析Nur77的表达为了确证时效及量效关系，用生物碱Exfoliazone处理H印G2细胞，处理浓度为 10ymol/L，20ymol/L，处理时间为6，12h，以未以任何处理的!fepG2细胞作为对照。细胞以改进的RIPA裂解缓冲液(50mM Tris_Hcl，pH 7. 4 ； 150mM NaCl ；5mM EDTA ； 1% NP-40,0. 5%脱氧胆酸钠，0. 1% SDS)于冰上裂解30min。以相同上样量，8% SDS-PAGE 电泳，转膜，以 5 % 脱脂奶粉的 TBST(50mM Tris-HCl (pH 7. 4), 150mM NaCl and 0. 1 % Tween20)室温封闭lh，于室温2h或4°C过夜孵育一抗，室温孵育二抗lh，ECL显色，曝光。 结果如图2所示。由图2的结果可知，在!fepG2细胞中，以10、20 μ mol/L生物碱Exfoliazone作用 于H印G2细胞6h后，高浓度的生物碱Exfoliazone (20 μ mol/L)可以诱导Nur77的表达；当 作用细胞12h后，低浓度的生物碱Exfoliazone (10 μ mol/L)即可诱导Nur77表达水平的显 著提高。以上结果表明，生物碱Exfoliazone可有效诱导H印G2细胞Nur77蛋白的表达，且 这种诱导作用是时间和剂量依赖型的，表明其生物学功能的发挥有可能与作用时间和剂量 呈一定的相关性。4、生物碱Exfoliazone诱导内源Nur77出核选择肝癌细胞H印G2，用含10%胎牛血清的DMEM培养基(购自Hyclone)，在37°C 含5% C02的细胞培养箱培养于24孔组织培养板中，24h后换液和进行加药(不含血清) 处理。生物碱Exfoliazone溶解于DMSO(DMS0终浓度< 0. )中，以10 μ mol/L处理6h， 对照组用同样浓度的DMSO处理6h，具体处理如下(1)对照组(DMSO)(2)生物碱 Exfoliazone 组(3)用普霉素A(LMB) (10ng/mL)预处理后，加入生物碱Exfoliazone组。反应板中各孔溶液的总体积均为1ml，生物碱Exfoliazone的浓度均为10 μ mol/ L0细胞经处理6h后，0.5%胰酶消化，PBS洗3次，4%多聚甲醛固定，再用Triton穿 膜，最后加入DAPI (0.01mg/mL)染色。甘油封片，荧光显微镜下观察细胞核的形态，结果如 图3所示。根据图3的结果可知，生物碱Exfoliazone作用后的细胞中，Nur77大多呈胞质 分布，而无生物碱Exfoliazone处理的细胞，Nur77大多分布在细胞核中。说明生物碱 Exfoliazone能够有效诱导IfepG2细胞中内源Nur77的出核转运。5、生物碱Exfoliazone诱导外源Nur77出核选择肝癌细胞H印G2，用含10%胎牛血清的DMEM培养基(购自Hyclone)，在 37°C含5% C02的细胞培养箱培养于24孔组织培养板中，在细胞密度达到80%左右，将 GFP-Nur77用脂质体2000转入H印G2中，24h后换液和进行加药(不含血清)处理。生物 碱Exfoliazone溶解于DMSO (DMS0终浓度< 0. 1 % )中，以10 μ mol/L处理6h，对照组用同样浓度的DMSO处理6h，具体处理如下(1)对照组(DMSO)(2)生物碱 Exfoliazone 组(3)用普霉素A(LMB) (10ng/mL)预处理后，加入生物碱Exfoliazone组。反应板中各孔溶液的总体积均为1ml，生物碱Exfoliazone的浓度均为10 μ mol/ L0细胞经处理6h后，0.5%胰酶消化，PBS洗3次，4%多聚甲醛固定，再用Triton穿 膜，最后加入DAPI (0.01mg/mL)染色。甘油封片，荧光显微镜下计数凋亡细胞。凋亡细胞根 据细胞形态上典型的细胞质皱缩，膜起泡以及核凝缩、破碎加以识别。至少300个细胞，多 于5个随机视野。结果如图4和5所示。根据图4的结果可知，ΙΟμπιοΙ/L生物碱Exfoliazone处理转染后的IfepG2细 胞6h，发现GFP-Nur77出核，重新定位于细胞质中。根据图5的结果可知，在细胞中转入 GFP-Nur77后，用LMB预先处理!fepG2细胞，再加入生物碱Exfoliazone共同处理6h，LMB也 可显著阻断外源GFP-Nur77的出核转运。由此可知，生物碱Exfoliazone通过CRMl途径诱 导Nur77的出核转运。上述结果表明生物碱Exfoliazone可以诱导Nur77出核，且是通过CRMl途径来 诱导的。实施例2生物碱Exfoliazone诱导肝癌细胞IfepG2的凋亡1、生物碱Exfoliazone对!fepG2细胞的生长抑制作用H印G2细胞以5 X IO3/孔接种于96孔板，5% C02、37°C条件下培养24h后，加入浓 度为1、10、20、30和40ymol/L的生物碱Exfoliazone，以等量的DMSO作为对照组，每组均 设置6个重复孔。药物分别处理24,48和72h后，加MTT液(5mg/mL，20 μ L/孔)，孵育4h 后加DMS0(150 μ L/孔)，振荡，显色。用酶联免疫检测仪在波长490nm下读取吸光度，采用 公式细胞生存率=(实验组吸光度平均值/对照组吸光度平均值)X 100%，计算细胞生 存率。结果如图6所示。根据图6的结果可知，生物碱Exfoliazone可显著抑制!fepG2细胞的生长，这种作 用呈现剂量依赖性和时间依赖性的关系，在药物处理24、48和72h后，生物碱Exfoliazone 半数抑制浓度(IC5tl)分别为35、16和8 μ mol/L。2、生物碱Exfoliazone诱导!fepG2细胞凋亡的形态变化选择肝癌细胞H印G2，用含10%胎牛血清的DMEM培养基(购自Hyclone)，在37°C 含5% C02的细胞培养箱培养于24孔组织培养板中，24h后换液和进行加药(不含血清)处 理。生物碱Exfoliazone溶解于DMSO(DMS0终浓度< 0. 1 % )中，以30 μ mol/L处理24h， 对照组用同样浓度的DMSO处理24h。反应板中各孔溶液的总体积均为1ml。细胞经处理6h后，0. 5%胰酶消化，PBS洗3 次，4%多聚甲醛固定，再用Triton穿膜，最后加入DAPI (0.01mg/mL)染色。甘油封片， 荧光显微镜下观察细胞核的形态，结果如图7所示。根据图7的结果可知，处理24h，对照组细胞界限清晰，胞浆丰富，胞核圆形或椭圆 形，饱满，染色质均勻分布，而30 μ mol -L"1生物碱Exfoliazone处理后，!fepG2细胞核变圆、 缩小，染色质浓缩呈斑块状。3、生物碱Exfoliazone诱导!fepG2细胞的PARP蛋白降解
选择肝癌细胞H印G2，在37°C和5%二氧化碳培养箱培养于24孔板组织培养板中， 24h后，分别用加有5、10、20 μ M生物碱Exfoliazone的无血清的DMEM处理24h。细胞以改 进的RIPA裂解缓冲液(50mM Tris_Hcl，pH 7.4 ； 150mM NaCl ；5mM EDTA ；1%ΝΡ-40,0. 5%脱 氧胆酸钠，0. 1% SDS)于冰上裂解30min。以相同上样量，8% SDS-PAGE电泳，转膜，以5% 脱脂奶粉的 TBST (50mM Tris-HCl (pH 7. 4)，150mMNaCl and 0. 1 % Tween-20)室温封闭 lh， 于室温2h或4°C过夜孵育一抗anti-PARP(l 1000稀释)，室温孵育二抗lh，ECL显色，曝 光。结果如图8所示。如图8所示，生物碱Exfoliazone可以诱导113kD的PARP蛋白被降解为89kD的 特异性降解产物。随生物碱Exfoliazone作用浓度的延长89kD的降解产物量逐渐增多。4、利用Annexin-V/PI双染检测生物碱Exfoliazone诱导！fepG2的凋亡在无血清DMEM 培养基(购自 Hyclone)中用 1、10、20 μ mol/L 生物碱 Exfoliazone 处理H印G2肝癌细胞24h，以不加生物碱Exfoliazone的细胞作为阴性对照，以紫杉醇 (Taxol) 100nmol/L处理为阳性对照。细胞根据Vybrant Apoptosis Assay Kit#2操作手册 染色 PI 和 AnnexinV，用流式细胞仪(Beckman Coulter EPICS ALTRA)分析。用 EXP032ADC 软件(Beckman Coulter EPICS ALTRA)分析,结果如图9所示。结果表明，用lOOnmol/L的紫杉醇处理H印G2细胞24h，可引起细胞大量死亡，细胞 的早期凋亡率和晚期凋亡率分别为42. 4%和15. 9%。而用生物碱Exfoliazone处理H印G2 细胞，细胞主要表现为早期凋亡，并且呈明显的剂量依赖关系，1、10和20 μ mol/L分别处理 !fepG2细胞24h后，细胞的早期凋亡率分别为1. 1%、10%和44. 2%，而晚期凋亡率分别为 3.4%、4. 9%和9.7%，坏死细胞几乎检测不到，这表明生物碱Exfoliazone能够诱导!fepG2 细胞凋亡，而不是坏死。上述结果表明，生物碱Exfoliazone诱导!fepG2的凋亡。实施例3生物碱Exfoliazone诱导HepG2细胞的凋亡依赖于Nur77的表达水平以 及Nur77的出核转运为了研究Nur77在生物碱Exfoliazone诱导的凋亡所起的作用，用Nur77的抗体 和DAPI共同染色生物碱Exfoliazone处理后的!fepG2细胞(细胞培养同实施例2. 5)，结果 如图10所示。根据图10的结果可以看出，10μmol/L生物碱Exfoliazone处理H印G2细胞 24h，相对于对照组，HepG2细胞没有发生显著的凋亡效应；而当转入外源GFP_Nur77，再用 10 μ mol/L生物碱Exfoliazone处理!fepG2细胞24h，细胞凋亡率提高约60%。说明Nur77 介导生物碱Exfoliazone的凋亡效应。为了进一步证明Nur77的表达同细胞凋亡诱导之间的关系，将Nur77基因敲除的 MEF细胞(MEF Nur77+的H印G2细胞用10、20 μ M的生物碱Exfoliazone处理24h，细胞根 据 VybrantApoptosis Assay Kit#2 操作手册染色 PI 和 AnnexinV，用流式细胞仪(Beckman Coulter EPICSALTRA)分析。用 EXP032ADC 软件(Beckman Coulter EPICS ALTRA)分析，结 果如图11所示。根据图11结果可以看出，10、20 μ mol/L生物碱Exfoliazone处理后，MEF细胞的 早期凋亡率分别为8%和41. 1%，而同样浓度生物碱Exfoliazone处理的MEF Nur77+细 胞，早期凋亡率下降为3. 6%和4. 6%。这一结果表明生物碱Exfoliazone的凋亡效应是由Nur77介导的。如果Nur77的出核转运在生物碱Exfoliazone诱导的细胞凋亡中起作用，抑制 Nur77的出核将可以减少细胞凋亡。因此，转染GFP-Nur77的H印G2细胞在LMB存在或是缺 乏的情况下，以生物碱Exfoliazone 10 μ mol/L处理6h。然后AnnexinV/PI双染检测细胞 凋亡，结果见图12。根据图12的结果表明，10 μ mol/L生物碱Exfoliazone使H印G2细胞早期凋亡率 为10%，LMB的加入使凋亡率大幅下降为1.8%，细胞基本不发生凋亡。以上结果说明，生 物碱Exfoliazone的凋亡效应依赖于介导Nur77的出核转运。以上的结果说明生物碱Exfoliazone诱导的细胞凋亡不仅依赖于Nur77的表达水 平也依赖于其出核转运。实验例4生物碱Exfoliazone对肺癌细胞H460的生长抑制作用及对Nur77的诱 导作用1、生物碱Exfoliazone对H460细胞的生长抑制作用选择肺癌细胞株H460(ATCC)，用10%小牛血清的DMEM培养基，在37°C含5% C02 的细胞培养箱培养。以5X IO3/孔接种于96孔板，5% C02、37°C条件下培养24h后，加入浓 度为 0,1. 25,2. 5,5,10,20,40,80 μ mol/L 的生物碱 Exfoliazone，以等量的 DMSO 作为对照 组，每组均设置6个重复孔。药物处理24h后，加MTT液(5mg/mL，20 μ L/孔)，孵育4h后 加DMSO (150 μ L/孔)，振荡，显色。用酶联免疫检测仪在波长490nm下读取吸光度，采用公 式细胞生存率=(实验组吸光度平均值/对照组吸光度平均值)X 100%，计算细胞生存 率。结果如图所13示。根据图13的结果可知，生物碱Exfoliazone可显著抑制H460细胞的生长，这种作 用呈现剂量依赖性关系，在药物处理24h后，生物碱Exfoliazone半数抑制浓度(IC5tl)分别 为 13.6 μ mol/L。2、生物碱Exfoliazone对Nur77的诱导作用选择肺癌细胞株H460，用10%小牛血清的DMEM培养基，在37°C含5% C02的细胞 培养箱培养于6孔组织培养板中，24h后换液，饥饿12h后进行加药(不含血清)处理。生 物碱 Exfoliazone 溶解于 DMSO (DMS0 终浓度< 0. 1% )中，分别以 10 μ mol/L、20 μ mol/L 处 理6h，阴性对照组用同样浓度的DMSO处理6h，而阳性对照组用佛波酯lOOng/mL (TPA)处理 3h，具体处理如下(5)阴性对照组(DMSO)(6)阳性对照组(TPA)(7)生物碱 Exfoliazone 组(10 μ mol/L)(8)生物碱 Exfoliazone 组(20 μ mol/L)收集细胞，以备提取RNA。2. 1转录水平分析Nur77的表达细胞以TRIZOL提取RNA，然后进行RT-PCR，最后PCR产物用1 %琼脂糖胶进行分 析，结果如图14所示。由图14的结果可知，在肺癌细胞H460中，生物碱Exfoliazone可显 著上调Nur77mRNA的表达。2. 2蛋白水平分析Nur77的表达
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用生物碱Exfoliazone处理H460细胞，处理浓度为10、20 μ mol/L，处理时间为 12h，以未以任何处理的H460细胞作为对照。细胞以改进的RIPA裂解缓冲液(50mM Tris_Hcl，pH 7. 4 ； 150mM NaCl ；5mM EDTA ； 1% NP-40,0. 5%脱氧胆酸钠，0. 1% SDS)于冰上裂解30min。以相同上样量，8% SDS-PAGE 电泳，转膜，以 5 % 脱脂奶粉的 TBST(50mM Tris-HCl (pH 7. 4), 150mM NaCl and 0. 1 % Tween20)室温封闭lh，于室温2h或4°C过夜孵育一抗，室温孵育二抗lh，ECL显色，曝光。 结果如图15所示。由图15的结果可知，在H460细胞中，以1、10、20 μ mol/L生物碱Exfoliazone作 用于H460细胞12h后，均能诱导Nur77的表达；且这种诱导作用是剂量依赖型的，随着着处 理浓度的增高，其诱导Nur77的蛋白量也增多。这表明其生物学功能的发挥有可能与作用 剂量呈一定的相关性。综上所述，本发明的生物碱Exfoliazone通过诱导Nur77表达及其出核转运，从而 诱导肿瘤细胞的凋亡。因此本发明的生物碱Exfoliazone可以用于制备治疗癌症的以孤儿 受体Nur77作为作用靶点的药物。另外，孤儿受体Nur77可以作为作用靶点用于筛选生物 碱Exfoliazone等一系列的海洋生物资源。
权利要求
一种生物碱Exfoliazone在制备治疗癌症药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述癌症为肝癌或肺癌。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述治疗癌症药物以孤儿受体Nur77作为作 用靶点。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述以孤儿受体Nur77作为作用靶点在筛选 海洋生物资源中的应用。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述筛选是筛选作用于孤儿受体Nur77诱导 肿瘤细胞凋亡的海洋生物资源。
6.如权利要求4或5所述的应用，其特征在于所述海洋生物资源为生物碱。
7.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述诱导肿瘤细胞凋亡是通过诱导孤儿受体 Nur77的表达。
8.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述诱导肿瘤细胞凋亡是通过诱导孤儿受体 Nur77出核且依赖于Nur77的出核转运。
全文摘要
一种生物碱的抗癌应用，涉及一种生物碱。提供生物碱Exfoliazone在制备治疗癌症药物应用以及孤儿受体Nur77作为作用靶点在筛选海洋生物资源中的应用。所述Exfoliazone可诱导癌症细胞的凋亡，Exfoliazone可诱导孤儿受体Nur77的表达，诱导孤儿受体Nur77出核，并且Exfoliazone是通过CRM1途径诱导Nur77的出核转运，最后引起肝癌细胞的凋亡，Exfoliazone的凋亡效应依赖于Nur77的出核转运。Exfoliazone作为一种靶向Nur77凋亡途径的调节因子，将成为一种非常有效的癌症治疗药物。所述治疗癌症药物以孤儿受体Nur77作为作用靶点。
文档编号C12Q1/68GK101947225SQ20101029656
公开日2011年1月19日 申请日期2010年9月29日 优先权日2010年9月29日
发明者张晓坤, 曾锦章, 韦杨烨 申请人:厦门大学