专利名称：一种谷氨酸脱氢酶的突变体酶及其构建方法
技术领域：
本发明涉及利用突变体酶及其构建方法，特别属于谷氨酸脱氢酶的突变体酶及其构建方法。
背景技术：
氨基酸脱氢酶家族(amino acid dehydrogenases, EC 1. 4. 1)，该家族蛋白利用 NAD+或者NADP+为辅因子催化氨基酸氧化脱氨形成相应的酮酸。反应如下所示
权利要求
1.一种谷氨酸脱氢酶的突变体酶，其特征在于它具有SEQ ID NO :1，所示的氨基酸序列。
2.一种编码权利要求1所述的谷氨酸脱氢酶的突变体酶的基因。
3.权利要求1所述的一种谷氨酸脱氢酶的突变体酶的构建方法，包括以下步骤: 从鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)中获得谷氨酸脱氢酶基因，通过突变引物获得了突变的基因片段，将突变基因片段与pET28b质粒连接，构建重组表达质粒 pET28b-KA/LG;该重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞，构建用于突变体酶表达的基因工程菌 Rosetta(DE3)/pET28b-KA/LG ；所述的166位的突变引物为·166 位 anti-sense :5' -GATATCCCCCCCAGGCACGTCG-3‘； 166 位 sense :5' -GATACCGACGTGCCTGGGGGGGATA-3‘； 92位突变引物为·92 位 anti-sense :5' -GCATACCGCCAAGATAGGGGCCGATAG-3‘； 92 位 sense:5' ~TCGGCCCCTATCTTGGCGGTATGCG~3‘。
全文摘要
本发明公开了一种谷氨酸脱氢酶的突变体酶及其构建方法，所述的突变体酶具有SEQ ID NO1，所示的氨基酸序列。该突变基因在异源宿主大肠杆菌中获得了良好表达，表达蛋白是一类能催化多种氨基酸的脱氢酶。本发明过程主要包括以下步骤(1)获得谷氨酸脱氢酶基因gdh并构建重组质粒；(2)突变菌株的构建；3)表达菌株构建；(4)表达和纯化。本发明与现有技术相比，所生成的工程菌不仅能催化谷氨酸，而且还能催化甲硫氨酸和正亮氨酸。
文档编号C12N15/53GK102199578SQ20111005983
公开日2011年9月28日 申请日期2011年3月14日 优先权日2011年3月14日
发明者宋平, 曹正宇, 朱国萍, 潘蔚, 王文才, 王晖, 王鹏, 靳明明 申请人:安徽师范大学