专利名称：松香诱导生物转化制备活性酚类化合物的方法
技术领域：
本发明涉及-
-株从云南松林腐殖质中筛选获得的毛霉科iM^/oAsis属A5+菌株
及其培养发酵优化条件，并用于松香诱导生物转化制备活性酚类化合物0，0-1，1' -二 (2-羟基-3，4，5-三甲基)苯基氧桥和4，5，6-三甲基-1，2-邻苯二酚的方法，通过下列技术方案实现。 本发明的目的在于提供一种松香诱导来生产活性酚类化合物的方法，其特征在于经过下列各步骤
A.将微生物菌株A5+在PDA培养基中进行常规培养，获得活化菌株，再接入PDB培养基中进行发酵48 72h;
B.配制转化产物的诱导物；
C.将步骤B中所配制的诱导物加入步骤A中发酵后的菌株，进行生物转化；
D.将C的转化液进行过滤浓缩，得到转化产物粗提物浸膏；
E.转化产物粗提物浸膏用50 90%的无水乙醇进行梯度醇沉，乙醇相浓缩；其次再用石油醚萃取，水相浓缩；接着用乙酸乙酯多级萃取3次，乙酸乙酯相浓缩；最后经过薄层层析、硅胶柱层析LH-20凝胶层析和高效液相色谱法分离纯化得到粉状化合物SX-I为0，0
-1, 1'-
(2-羟基-3，4，5-三甲基)苯基氧桥和结晶化合物SX-2为4，5，6-三甲
基-1，2-邻苯二酚。
权利要求
1.一种松香诱导来生产活性酚类化合物的方法，其特征在于经过下列各步骤A.将微生物菌株A5+在PDA培养基中进行常规培养，获得活化菌株，再接入PDB培养基中进行发酵48 72h ；B.配制转化产物的诱导物；C.将步骤B中所配制的诱导物加入步骤A中发酵后的菌株，进行生物转化；D.将C的转化液进行过滤浓缩，得到转化产物粗提物浸膏；E.转化产物粗提物浸膏用50 90%的无水乙醇进行梯度醇沉，乙醇相浓缩；其次再用石油醚萃取，水相浓缩；接着用乙酸乙酯多级萃取3次，乙酸乙酯相浓缩；最后经过薄层层析、硅胶柱层析LH-20凝胶层析和高效液相色谱法分离纯化得到粉状化合物SX-I为0，0 -1，1' -二(2-羟基-3，4，5-三甲基)苯基氧桥和结晶化合物SX-2为4，5，6-三甲基-1，2-邻苯二酚。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述PDA培养基为200g/L的马铃薯+20g/ L的葡萄糖+1. 5% 觊的琼脂，pH值为6，于110 125°C下高压灭菌15 30min。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述PDB培养基为200g/L的马铃薯+20g/ L的葡萄糖，pH值为6，于110 125°C下高压灭菌15 30min。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述诱导物为按每200mL的PDA培养基中加松香0. 1 0. 3g，助溶剂95%的乙醇5 SmL取样，将松香充分溶解在乙醇中所得的溶液为诱导物。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述生物转化的条件为在温度沈 30°C、搅拌速率为120 128rpm下，反应72 96h。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述微生物菌株A5+为毛霉菌亚门 (Mucoromycotina)、毛霉目(Mucorales)、毛霉禾斗(Mucorales incertae sedis)。
全文摘要
本发明提供一种松香诱导来生产活性酚类化合物的方法，通过将微生物菌株A5+在PDA培养基中进行常规培养，获得活化菌株，再接入PDB培养基中进行发酵48～72h；将诱导物加入发酵后的菌株，进行生物转化；转化液进行过滤浓缩，得到转化产物粗提物浸膏；转化产物粗提物浸膏用梯度醇沉，用石油醚、乙酸乙酯萃取，最后经过薄层层析、硅胶柱层析LH-20凝胶层析和高效液相色谱法分离纯化得到O,O-1,1′-二(2-羟基-3,4,5-三甲基)苯基氧桥和4,5,6-三甲基-1,2-邻苯二酚。本发明的生物转化法具有高效性、高选择性，反应条件温和，几乎不会对环境带来污染；比提取法费用低，节省成本；所得酚类化合物的活性有抗氧化性、抑菌、抗病毒、抗癌、抗辐射和抗过敏等作用。
文档编号C12R1/645GK102181488SQ20111005972
公开日2011年9月14日 申请日期2011年3月14日 优先权日2011年3月14日
发明者余旭亚, 孟庆雄, 曹建新, 李巧峰, 王亚明 申请人:昆明理工大学