专利名称：一种青枯雷尔氏菌菌株的制作方法
一种青枯雷尔氏菌菌株
技术领域：
本发明涉及一种微生物，具体涉及一种无致病力的青枯雷尔氏菌菌株。背景技术：
现有的青枯雷尔氏菌(Ralsotonia solanacearum)具有致病性，是一种能引起作物青枯病的植物细菌病原菌，广泛分布在热带、亚热带和温带地区，其侵染寄主范围很广， 包括花生、番茄、茄子和辣椒等经济作物，并且近年来青枯病在中国继续加重，新的寄主也在不断地被发现，目前研究发现青枯雷尔氏菌还能侵染美人蕉、姜花、黄穗和百日草4种花卉。青枯雷尔氏菌的致病性机制较复杂，在寄主植物细胞存在的情况下，青枯雷尔氏菌激活细胞壁降解酶、过敏反应以及由III型分泌系统组分编码的致病基因，其一旦进入植物组织中，高密度青枯雷尔氏菌大量表达毒力因子、胞外蛋白以及主要致病决定因子。为了避免经济作物因遭受青枯雷尔氏菌侵染而导致萎蔫或枯死的现象，从业人员一直在致力于对青枯雷尔氏菌的研究。
发明内容本发明所要解决的技术问题在于提供一种无致病力的青枯雷尔氏菌菌株 FJAT-1458 (Ralstonia solanacearum)，该青枯雷尔氏菌菌株FJAT-1458 于 2011 年 08 月 04 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路 1号院3号，保藏编号为CGMCC No. 5111。本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的本实验室从福建省南平市建瓯市番茄病株植株茎部分离并筛选得到的菌株，该菌株经青枯雷尔氏菌特异性引物鉴定确认为青枯雷尔氏菌菌属中的一个菌株；之后对该菌株进行致病性检测，得知其为无致病力的青枯雷尔氏菌菌株。本发明的有益效果在于提供了一种青枯雷尔氏菌菌株FJAT-1458，且该青枯雷尔氏菌菌株具有无致病力的特征，为研究避免因青枯雷尔氏菌的致病性而造成的植株萎蔫或死亡的现象提供了可能。
具体实施方式本发明提供的一种无致病力的青枯雷尔氏菌菌株FJAT-1458是从福建省南平市建瓯市番茄病株植株茎部分离并筛选得到的菌株。1.菌株 FJAT-1458 的分离(1)称取发病初期番茄的茎部5g并用清水冲洗干净，且将冲洗后的茎部剪成小块组织；接着在无菌操作条件下，将小块组织依次采用75%酒精处理30s、10%次氯酸钠消毒 8min、无菌水漂洗3遍；之后采用榨汁机将小块组织打碎以获得组织液，之后吸取ImL组织液进行梯度稀释，选用稀释度为IO-1UO-2UO-3UO-4UO-5UO-6和10_7 ；
(2)取步骤(1)获得的稀释液200 μ L涂布于TTC培养基平板上，然后将TTC培养基平板置于30°C下培养2d;(3)将步骤( 培养获得的菌株重新划线接种于TTC培养基上，并将TTC培养基置于30°C条件下培养48h，获得菌株FJAT-1458。2.菌株 FJAT-1458 的鉴定初步鉴定将所获得菌株FJAT-1458的菌落置于Leica M165FC高级电动荧光体视显微镜下进行镜检观察，观察结果显示，菌株FJAT-1458的菌落形态为表面较干燥，无流动性，中间为暗红色，且白边较窄的菌株，因此，可初步认定菌株FJAT-1458为青枯雷尔氏菌。进一步鉴定(1)菌株FJAT-1458的活化用接种环将所获得菌株FJAT-1458划线于TTC培养基上，并将TTC培养基置于恒温培养箱中培养48-7池，培养温度为30°C ；(2)制备种子液将步骤(1)所获得的菌株FJAT-1458的单菌落接种于20mL的种子培养基中，并将其置于恒温振荡摇床中培养Mh，恒温振荡摇床的温度设定30°C、转速设定 170rpm/min ；(3)基因组DNA的提取取步骤⑵所获得的种子液ImL于已灭菌的1. 5mL离心管中，并按照Promega试剂盒说明书操作以提取菌株FJAT-1458的基因组DNA ；(4)菌株FJAT-458的PCR鉴定采用青枯雷尔氏菌的特异性引物pehA#6 5' -ATC GGA CTT GAT GCG CAG GCC GTT-3‘和引物 pehA#3 5' -CAG CAG AAC CCG CGC CTG ATC CAG-3'为引物对(该引物对委托上海生物博尚有限公司合成)，菌株FJAT-1458的基因组 DNA为模板DNA进行PCR反应，并以现有公认的青枯雷尔氏菌标准菌株GMI1000为阳性对眧.
/、、、 该PCR反应体系(25 μ L体系)如下
权利要求
1. 一种青枯雷尔氏菌菌株，其特征在于所述菌株为无致病力的青枯雷尔氏菌菌株 FJAT-1458 (Ralstonia solanacearum)，于2011年08月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 5111。
全文摘要
本发明一种青枯雷尔氏菌菌株，所述菌株为无致病力的青枯雷尔氏菌菌株FJAT-1458(Ralstonia solanacearum)，于2011年08月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5111。本发明的优点在于提供了一种无致病力的青枯雷尔氏菌菌株FJAT-1458，为研究避免因青枯雷尔氏菌的致病性而造成的植株萎蔫或死亡的现象提供了可能。
文档编号C12R1/01GK102373170SQ20111033690
公开日2012年3月14日 申请日期2011年10月28日 优先权日2011年10月28日 公开号201110336906.发明者刘波, 唐建阳, 朱育菁, 林营志, 车建美, 郑雪芳 申请人:福建省农业科学院农业生物资源研究所